The authors would like to thank the MSKCC Tissue Procurement Service Team (TPS), specifically, Maria Corazon Mariano, Priscilla McNeil, Anas Idelbi, Daniel Navarrete and Katrina Allen, in all of their efforts in the successful pursuit of this project and funding from the following sources: 5 R21 CA158609-02 and the Conquer Cancer Foundation and the Breast Cancer Research Foundation. In addition, the authors would like to thank Eric Cottington PhD, Vice President of the Office of Research and Project Administration, the Office of Technology Development, Research Outreach and Compliance and RTM Information Systems Support, in the support of the submission of this manuscript.

NOTA: colheita de tecidos do paciente, autorizado por conselho de revisão institucional (IRB) -aprovado Biospecimen e Protocolos Clínicos (números de protocolo 09-121 e 11-041, respectivamente) no Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Procurement 1 Tissue <ol><li> Aquisição de paciente primário tumor / metástase NOTA: Até à data, este protocolo foi realizado em pancreáticos, gástricos e tipos de tumor da mama removidos cirurgicamente, bem como, as metástases de linfoma. <ol><li> Direcionar a equipe cirúrgica para entregar a amostra por correio ou sistema de tubos pneumáticos para o departamento de Patologia em hermeticamente fechado e estéril saco plástico espécime à prova de vazamentos dentro de recipiente à prova de derrame estéril. Direcionar a equipe cirúrgica para transportar a amostra no estado fresco, sem formol ou fixador. </li><li> Dirigir o patologista ou patologista assistente para colher a amostra frescos utilizando uma técnica estéril, que inclui uso de luvas e instrumentos esterilizados sob uma capela de fluxo laminar. </li><li> Anote o tempo de colheita das amostras adquiridas, que é mantido rigorosamente menos de 30 min a partir da conclusão do procedimento cirúrgico. Levando-se em conta os efeitos de isquemia fria, não tome amostras de espécimes ressecados, com um tempo de isquemia fria de&gt; 30 min 18. </li><li> Dirigir o pessoal do Departamento de Patologia para remover uma amostra do tumor primário de aproximadamente 0,5 cm3 a 1,0 cm 3 de uma câmara de fluxo laminar, para manter um ambiente estéril. Quando possível, escolher o tecido do tumor a partir da periferia da lesão, para evitar potenciais índice de necrose central (morte celular) franca. NOTA: O tecido necrótico pode ser grosseiramente reconhecível por qualquer um dos seguintes critérios: a perda de cor ou palidez do tecido; perda de força em que o tecido necrosado é macio e friável; uma demarcação clara entre o tecido necrosado e viável. </li><li> Dirigir o pathologiST ou assistente patologista para fornecer tecido periférico que é em excesso (descarte cirúrgico), após a recolha imediata do tumor para avaliação diagnóstica. Colocar a amostra num tubo de centrífuga cónico de 15 ml estéril contendo cerca de 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina). </li><li> Se estiver disponível (por exemplo, linfonodo axilar de cauda de espécime mastectomia), adquirir um grosseiramente positivos espécime gânglio linfático do mesmo tamanho (0,5 cm 3 a 1,0 cm 3) e comparar a resposta à droga do tumor primário. Como as amostras de tumor primário, colocar as amostras de nódulos linfáticos associados em um tubo de centrífuga cónico de 15 ml estéril contendo cerca de 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina). </li><li> Se o tamanho de licenças peça cirúrgica (por exemplo, espécime mastectomia), remova (distante do tumor primário) de uma amostra de tecido normal (ou seja,fibrosa parênquima normal densa / peito) e colocar em um tubo de centrífuga cônico de 15 ml estéril contendo aproximadamente 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos apenas para fins de transferência. Após a transferência para as instalações de laboratório, transferir a amostra &#39;normal&#39; para um, congelar e armazenar cryovial &#39;estalo&#39; em um freezer -80 ° C para análises moleculares futuras. </li><li> Coloque todas as amostras em gelo molhado e transportar imediatamente para o espaço de laboratório para ex vivo de corte de tecido fresco. Não secção do espécime normal, mas sim armazenar em um freezer -80 ° C para análises moleculares futuras. Transfira uma porção do tumor primário e de metástases associadas a um, congelar e armazenar criotubo &quot;pressão&quot; de uma temperatura de -80 ° C congelador para futuras análises moleculares. </li></ol></li><li> Aquisição de tecido a partir de estudos clínicos (por exemplo, biópsias com agulha grossa opcional (CNB)) ATENÇÃO: Nós obter tecidos tumorais de pacientesmatriculados em protocolos clínicos que dão o seu consentimento se submeter a uma CNB de uma metástase de tumor acessíveis antes do início da terapia. CNBS, até à data, têm sido realizados em pacientes com câncer de mama, linfoma da zona marginal, linfoma de células do manto, paraganglioma metastático, colo do útero (de células escamosas) e ovário. <ol><li> Ter pessoal clínico de Radiologia Intervencionista ou departamento competente realizar uma biópsia com agulha pré-tratamento e colocar a amostra em um tubo de centrífuga de 15 ml cônico estéril contendo aproximadamente 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina). </li><li> Coloque a amostra de biópsia no gelo molhado e transportar imediatamente para o espaço de laboratório para ex vivo de corte de tecido fresco. </li></ol></li></ol> 2 Preparação de materiais para corte e Vibratome Configurações <ol><li> Elaboração de Materiais para Seccionamento <ol><li> Adicione uma solução de agarose a 4% por adição de 4 g de agasubiu para 100 ml de PBS. Autoclave (configurações de ciclo: Líquido, 121 ° C, 30 min, 15 libras por polegada quadrada), a solução antes do primeiro uso. Para utilizações seguintes, coloque a agarose 4% em um micro-ondas para liquefazer (fogo alto por intervalos de 30 segundos) antes de cada utilização e resfriar adequadamente para ~ 25 ° C (ou seja, quente ao toque) consciente de que agarose solidifica à temperatura ambiente. </li><li> Use a agarose 4% como uma mídia tecido incorporação não permanente. Quando a agarose 4% esfriou o suficiente e ainda está em estado líquido, com uma pinça estéril, colocar as amostras de tecido em um molde de incorporação e despeje a agarose 4%. </li><li> Posicione a amostra de tecido estreitas (~ mm distância 2), mas não diretamente na parede superfície de corte do molde de incorporação. A agarose a 4% começa a solidificar rapidamente, por conseguinte, a posição apropriada do espécime de tecido rápida. Durante o corte, manter a agarose 4% em um banho de água a 55 ° C para se manter em solução. </li><li> Para uma placa de 24 poços para análise secção, adicionar 1 ml de of meio completo (ou seja, de MEM + 10% de soro fetal de bovino 1% + antibióticos) a cada poço. Manter a placa de 24 cavidades à temperatura ambiente (~ 25 ° C) durante toda a duração do seccionamento. </li></ol></li><li> Preparação de Configurações Vibratome <ol><li> Usando o micrótomo vibratório, definir a velocidade a que a lâmina se aproxima da amostra [0 (0,00 mm / seg) a 10 (2,5 mm / seg)] e a frequência da lâmina [0 (0 Hz) a 10 (100 Hz) ]. Ajuste as configurações de acordo com a textura do tecido (ou seja, a densidade / firmeza). </li><li> Para um tumor de mama primário de carcinoma ductal invasivo, ajuste as configurações de 6 e 3, velocidade e freqüência, respectivamente. Para o tecido do tumor menos denso / firme, diminuir a velocidade e aumentar a frequência em conformidade. </li><li> Defina a espessura de corte dentro dos limites do instrumento (1-999 mm). Para estas análises, definir a espessura de corte de 200 m. </li><li> Montar o espécime embebidas em agarose utilizando uma fina camada de cola líquida sobre o disco de amostra that está submerso em um reservatório de mídia que é envolto em gelo molhado. </li></ol></li></ol> 3. Tissue Seccionamento, Tratamento e Análise <ol><li> Remova os cortes cortado com precisão imediatamente após corte usando uma pinça estéril e coloque em um prato multi-bem com 1 ml de meio completo. Quando as secções são adquiridos suficientes para resposta e análises de correlação, colocar a placa de multi-poços de resposta ao tratamento em uma incubadora de cultura de tecido fixado em condições de cultura de tecidos padrão. </li><li> Tire várias secções de controlo que bookend as secções tratadas em um esforço para confirmar a resposta dependente da dose, em oposição aos artefactos cultivadas. Realizar tecido seccionamento rapidamente (~ 30 - 40 min), bem dentro de quaisquer efeitos prejudiciais de tempo de isquemia fria (~ 2-4 hr) 18. Realizar o tratamento de secções só depois de um período de aclimatação de 1 hora. </li><li> Após o período de aclimatação de 1 hora, adicionar (doses terapeuticamente relevante aumentando; <em.&gt; Por exemplo, 0-10 mM concentrações) de drogas para as seções e casa em condições de cultura de tecidos para o período de tratamento. Para este estudo, utilizar períodos de avaliação de 24 horas e / ou 48. No entanto, cortes de tecidos de controle (veículo) só vai permanecer viável, como testado neste estudo, por períodos de até e incluindo os períodos de avaliação de 96 horas. </li><li> Após o tratamento, remover todas as secções em condições estéreis e formalina-fix, colocando a secção de tecido em um tubo contendo quer 10% de formalina tamponada e lugar à TA S / N ou em um tubo contendo paraformaldeído a 4% (16% de paraformaldeído diluir a partir de um frasco com PBS para uma concentração final de 4%) e lugar à temperatura ambiente durante 2 horas. <ol><li> Fixar as secções de tecido maiores (por exemplo,., ~ De 6 mm x 4 mm) de 200 um de espessura em 10% de formalina tamponada O / N à temperatura ambiente. Fix secções menores (por exemplo,. 1 mm x 1 mm) de 200 um de espessura, em 4% de paraformaldeído durante duas horas à temperatura ambiente. NOTA: Para a penetração eficiente de fixador o volume de fixative deve ser 20x o volume do tecido. Dado que este protocolo resulta em tamanhos extremamente pequenos de tecido (por exemplo, de 6 mm de tecido 3 = 6 ul de volume), para garantia de utilização adequada fixação 1 ml de fixador para todos os tamanhos de tecido. </li><li> Após a fixação ter as amostras de tecido embebidas em parafina pelo pessoal do Departamento de Patologia. Seção espécime blocos de parafina em lâminas carregadas ser hematoxilina e eosina e avaliadas por imunohistoquímica (por exemplo, apoptose). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture.">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li><li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+response+to+CDK4/6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors.">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li><li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer.">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li><li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance.">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li><li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia.">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li><li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples.">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332 (2014).</li><li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells.">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li><li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90.">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li><li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+sialyl-Lewis(x/a)+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer.">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li><li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+paradox+of+E-cadherin:+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism.">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li><li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors.">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li><li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development.">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li><li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer:+current+status+and+future+directions.">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li><li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71.">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, 11076-11 (2013).</li><li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor,+progesterone+receptor,+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma.">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li></ol>

No conflicts of interest disclosed.

Biólogos câncer enfrentam desafios significativos ao tentar desenvolver estratégias terapêuticas eficazes. Testar medicamentos em desenvolvimento em linhas celulares de cancro estabelecidas não pode refletir com precisão em resposta vivo e in vivo em modelos PDX são trabalhoso e muito caro. Dado o acima, a aplicação de técnicas ex vivo de tumores primários do paciente 14, 15 está agora posicionada ao lado da análise molecular das linhas celulares de cancro e xenoenxerto...

O desenvolvimento de cancro terapêutica eficazes provou ser extremamente desafiador. Linhas de câncer de células tumorais e explantes - bem como enxertos foram usados ​​em pesquisa sobre o câncer há mais de meio século 1,2,3. Até à data, a análise molecular de sensibilidade à droga e resistência em ambas as linhas celulares de cancro e xenoenxertos estabelecidas derivadas de pacientes (PDX) é indispensável. No entanto, o teste de compostos em linhas celulares de cancro estabelecidas muitas vezes não é de previsão de eficácia in vivo, e estudos in vivo correspondente em animais, especialmente em modelos de PDX, é muito cara e demorada. As limitações destes sistemas modelo, ou seja, a incapacidade para informar sobre a influência do microambiente nativo em progressão do tumor e a resposta de estratégias terapêuticas, levou o campo de investigação para o desenvolvimento de métodos adicionais para complementar estas análises. De recente, maior atenção está sendo pago para ex vivo de análise de tum pacienteou explantes 4, 5, devido à maior compreensão de que a resposta terapêutica do câncer não é exclusivo para a composição molecular inerente das células cancerosas mas é muito influenciada pelo microambiente celular tumor 6, 7 um recurso que não pode ser reproduzido por meio de métodos e de cultivo tradicionais / ou PDX. análise ex vivo, no contexto acima (ie., influência do microambiente adjacente célula tumoral circundante) implica a avaliação de seções tumor / metástase de primário viáveis, ao invés de ex vivo de análise de isolados celulares 8, 9. Registramos aqui uma técnica ex vivo (ie., Seções cortado com precisão frescas de tecidos) de ambos os tumores primários de pacientes e metástases associadas (ou seja, os gânglios linfáticos), que informa fielmente na resposta (IC50), efeitos fora do alvo e permite molecular análise dos mecanismos de resistência e de feedback. Além disso, uma análise correlativa de therapeUTIC sensibilidade / resistência contra biomarcador e perfil de expressão do gene pode ser realizada em um esforço para identificar os pacientes com maior probabilidade de responder à droga experimental de interesse (ou seja., resposta de droga elevada corresponde paciente com particular perfil biológico). Aplicação da técnica ex vivo e avaliação de uma forma multi-parâmetro é movimento para a seleção dos pacientes e melhoria global dos resultados clínicos. Análise ex vivo da resposta ao tratamento pode se tornar uma ferramenta padrão no desenvolvimento pré-clínico e clínico da terapêutica do câncer e é visto como um passo em direção a uma abordagem da medicina personalizada em estratégias de desenvolvimento de terapias.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:96px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome Leica VT1000s</td>
			<td style="width:96px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">14047235613</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">UltraPure agarose</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">16500500</td>
			<td style="width:167px;">Prepare 4% and 6% before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Injector blade</td>
			<td style="width:96px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">121-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">MEM with Penicillin&#160; + Streptomycin</td>
			<td style="width:96px;">Media Core Facilities (MSKCC)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">The media is prepared at Memorial Sloan Kettering Cancer Center&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scalpel no. 10</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">31-200-32</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable forceps</td>
			<td style="width:96px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:119px;">84011182</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Embedding mold</td>
			<td style="width:96px;">Electron Microscopy Science</td>
			<td style="width:119px;">70181</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FBS (heat inactivated)</td>
			<td style="width:96px;">Gemini</td>
			<td style="width:119px;">100106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">24 well plates</td>
			<td style="width:96px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3524</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Formalin (10%)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">SDHT501128&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">16% Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">28908</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Embedding microsettes</td>
			<td style="width:96px;">Simport</td>
			<td style="width:119px;">M503-2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol (70%)</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A405P-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Waterbath</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15-462-2SQ</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microwave</td>
			<td style="width:96px;">General Electric</td>
			<td style="width:119px;">ModelJES2051DNBB</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Adhesive (Ethyl Cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E1505-5G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10mm dishes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353003</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">15ml tubes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">352096</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
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ex vivo treatment response of primary tumors and/or associated metastases for preclinical and clinical development of therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both direct and rapid analysis of therapeutic sensitivity and resistance. However, recent evidence suggests that therapeutic response is not exclusive to the inherent molecular composition of cancer cells but rather is greatly influenced by the tumor cell microenvironment, a feature that cannot be recapitulated by traditional culturing methods. Even implementation of tumor xenografts, though providing a wealth of information on drug delivery/efficacy, cannot capture the tumor cell/microenvironment crosstalk (i.e., soluble factors) that occurs within human tumors and greatly impacts tumor response. To this extent, we have developed an ex vivo (fresh tissue sectioning) technique which allows for the direct assessment of treatment response for preclinical and clinical therapeutics development. This technique maintains tissue integrity and cellular architecture within the tumor cell/microenvironment context throughout treatment response providing a more precise means to assess drug efficacy.

Para este estudo, a técnica ex vivo foi utilizado na análise de um correlativo de terapêutica sensibilidade / resistência de um inibidor da proteína de choque térmico 90 (Hsp90i). Em uma avaliação pré-clínica deste Hsp90i, o tumor primário de câncer de mama, um ER + ductal carcinoma invasivo (IDC), e associado metástases em linfonodos foram analisados ​​ex vivo para a resposta ao tratamento &#160; (Figura 1). Vários 200 mM cortes seriados foram tratad...

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Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Linhas celulares de cancro estabelecidos e xenotransplantes têm sido o esteio da pesquisa do câncer para as últimas décadas. No entanto, evidências recentes sugerem que a resposta terapêutica é muito influenciada pelo microambiente de células tumorais. Portanto, foi desenvolvida uma análise ex vivo de amostras de tumor primário para fins de desenvolvimento de drogas.

Ex Vivo resposta ao tratamento de tumores primários e / ou Associated Metástases para pré-clínica e clínica de Desenvolvimento Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

14.6K visualizações.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center.  Linhas celulares de cancro estabelecidos e xenotransplantes têm sido o esteio da pesquisa do câncer para as últimas décadas. No entanto, evidências recentes sugerem que a resposta terapêutica é muito influenciada pelo microambiente de células tumorais. Portanto, foi desenvolvida uma análise ex vivo de amostras de tumor primário para fins de desenvolvimento de drogas. 