The authors would like to thank the MSKCC Tissue Procurement Service Team (TPS), specifically, Maria Corazon Mariano, Priscilla McNeil, Anas Idelbi, Daniel Navarrete and Katrina Allen, in all of their efforts in the successful pursuit of this project and funding from the following sources: 5 R21 CA158609-02 and the Conquer Cancer Foundation and the Breast Cancer Research Foundation. In addition, the authors would like to thank Eric Cottington PhD, Vice President of the Office of Research and Project Administration, the Office of Technology Development, Research Outreach and Compliance and RTM Information Systems Support, in the support of the submission of this manuscript.

הערה: רכש רקמות חולה הוסמך באמצעות מועצה לביקורת מוסדית (IRB) -approved Biospecimen ופרוטוקולים קליניים (מספרי פרוטוקול 09-121 ו11-041, בהתאמה) בשעה Memorial Sloan Kettering Cancer Center. רכש .1 רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכש של גידול / גרורות ראשוניות מטופל הערה: נכון להיום, בפרוטוקול זה בוצע על סוגים הוסרו בניתוח בלבלב, קיבה וסרטן השד, כמו גם, גרורות לימפומה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את צוות כירורגי כדי לספק את הדגימה על ידי מערכת צינור פנאומטי שליח או למחלקה לפתולוגיה בשקית דגימת פלסטיק דליפת הוכחה בחוזקה אטומה וסטרילי בתוך מיכל הוכחה לשפוך סטרילי. כוון את צוות כירורגי להעביר את הדגימה במדינה הטרי ללא פורמלין או מקבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את עוזר פתולוג או פתולוג לקצור את הדגימה הטרי באמצעות טכניקה סטרילית, שincשימוש לרכב של כפפות ומכשירים סטריליים תחת הזרימה למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את זמן הקציר של דגימת הרכש, אשר נשמרה בקפדנות תחת 30 דקות מסיום ההליך הכירורגי. אם ניקח בחשבון את ההשפעות של איסכמיה הקרה, לא לוקח דגימות מדגימות שעברו כריתה עם זמן איסכמי קר של&gt; 30 דקות 18. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את אנשי פתולוגיה המחלקה כדי להסיר דגימת גידול ראשונית של כ 0.5 סנטימטר 3-1.0 סנטימטר 3 בזרימה למינרית לשמור על סביבת סטרילית. במידת האפשר, לבחור רקמת גידול מהפריפריה של נגע המדד, כדי למנוע נמק מרכזי (מוות של תאים) פרנק פוטנציאלי. הערה: רקמת נימקי עשויה להיות מוכרת באופן בוטה על ידי כל אחד מהקריטריונים הבאים: אובדן צבע או החיוורון של הרקמות; איבוד כוח שברקמות נמקית היא רכות ופריכה; תיחום ברור בין הרקמות נמקית ובת קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את pathologist או עוזר פתולוג כדי לספק רקמות היקפיים שהיא ב( קלפים שנזרקו כירורגית) עודפים לאחר דגימה מיידית של הגידול להערכת אבחון. הנח את הדגימה בצינור צנטריפוגות חרוטי 15 מ&quot;ל סטרילי המכיל כ 5 מ&quot;ל של תקשורת המינימלית חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה (1% פניצילין וסטרפטומיצין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם זמין (לדוגמא, בלוטות לימפה בבית השחי של זנב של דגימת כריתת שד), להשיג דגימת בלוטות לימפה קשורה בעליל חיובית באותו הגודל (0.5 סנטימטר 3-1.0 סנטימטר 3) ולהשוות לתגובת תרופה של גידול ראשוני. כמו דגימת הגידול הראשונית, למקם את הדגימה הקשורים הבלוטה לימפה בצינור צנטריפוגות חרוטי 15 מ&quot;ל סטרילי המכילה כ 5 מ&quot;ל של מינימום תקשורת חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה (1% פניצילין וסטרפטומיצין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם גודל של היתרים כירורגית דגימה (לדוגמא, דגימת כריתת שד), להסיר (רחוקה מגידול ראשוני) דגימה של רקמה נורמלית (כלומר,parenchyma נורמלי צפוף / סיבי שד) ומקום בצינור צנטריפוגות חרוטי 15 מ&quot;ל סטרילי המכיל כ 5 מ&quot;ל של תקשורת המינימלית חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה 1% למטרות העברה בלבד. בעקבות העברה למתקני המעבדה, להעביר את הדגימה &#39;הנורמלית&#39; להקפאת cryovial, &quot;הצמד&quot; וחנות במקפיא -80 מעלות צלזיוס לניתוחים מולקולריים עתיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כל הדגימות על קרח רטוב, ומייד להעביר למרחב המעבדה לחתך רקמה הטרי ex vivo. אל סעיף הדגימה הנורמלית אלא לאחסן במקפיא -80 מעלות צלזיוס לניתוחים מולקולריים עתיד. להעביר חלק מהגידול הראשוני וגרורות קשורות להקפאת cryovial, &quot;הצמד&quot; וחנות במקפיא -80 מעלות צלזיוס לניתוחים מולקולריים עתיד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכש של רקמה ממחקרים קליניים (למשל, ביופסיות מחט ליבה אופציונלית (CNB)) הערה: אנו משיגים רקמות גידול מחוליםנרשם על פרוטוקולים קליניים שנותנים את הסכמתם לעבור CNB של גרורות סרטנית נגישות לפני התחלת טיפול. CNBs, עד היום, בוצעו על חולים עם שד, לימפומה האזור שולית, לימפומה תא מעטפת, paraganglioma גרורתי, צוואר רחם (תאי קשקש) וסרטן השחלות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ 5 מ&quot;ל של תקשורת המינימלית חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה (1% פניצילין וסטרפטומיצין) יש אנשים קליניים מהתערבותית רדיולוגיה או מחלקה רלוונטית לבצע ביופסיה מחט ליבת טיפול מראש ומניחים את הדגימה ב15 מ&quot;ל צינור צנטריפוגות חרוטי סטרילית המכילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את דגימת הביופסיה על קרח רטוב, ומייד להעביר למרחב המעבדה לחתך רקמה הטרי ex vivo. </li></ol></li></ol> 2 הכנת חומרים להגדרות חתך וVibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת חומרים לחתך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע פתרון agarose 4% על ידי הוספת 4 גרם של האגאעלה לשל PBS 100 מ&quot;ל. החיטוי (הגדרות מחזור: נוזל, 121 מעלות צלזיוס, 30 דקות, 15 ק&quot;ג לסנטימטר רבוע) הפתרון לפני השימוש ראשון. לשימושים שלאחר מכן, הנח את agarose 4% במיקרוגל לנזל (חום גבוה במשך 30 מרווחי שניות) לפני כל שימוש ולקרר כראוי ל~ 25 ° C (כלומר, חם למגע) מודעת כי agarose מתמצק ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש agarose 4% כאמצעי תקשורת רקמות הטבעה שאינה קבוע. כאשר agarose 4% יתקרר, והוא עדיין במצב נוזלי, עם מלקחיים סטריליות למקם את דגימת הרקמה בעובש הטבעה ויוצקים בagarose 4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את דגימת הרקמה הקרובה (~ מרחק 2 מ&quot;מ), אך לא באופן ישיר על הקיר של עובש הטבעת משטח חיתוך. Agarose 4% יתחיל לגבש במהירות, ולכן כראוי למקם את דגימת הרקמה במהירות. במהלך חתך, לשמור agarose 4% באמבט המים C ° 55 לשמור בפתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצלחת 24 גם לניתוח סעיף, להוסיף 1 מ&quot;ל of מדיה מלאה (כלומר, אנטיביוטיקה סרום + 1% MEM + 10% שור עוברי) זה טוב. שמור את צלחת 24 גם ב RT (~ 25 ° C) בכל משך הזמן של חתך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת הגדרות Vibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות microtome הרוטט, להגדיר את המהירות שבה להב גישות הדגימה [0 (0.00 מ&quot;מ / השנייה) ל10 (2.5 מ&quot;מ / שנייה)] ואת התדירות של (Hz 0) להב [0 עד 10 (100 הרץ) ]. התאם את ההגדרות בהתאם למרקם של הרקמה (כלומר, צפיפות / מוצקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגידול שד ראשוני של קרצינומה ductal פולשנית, להתאים את הגדרות ל6 ו -3, מהירות ותדירות בהתאמה. לרקמת גידול פחות צפופה / חברה, להקטין את המהירות ולהגדיל את התדירות בהתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את עובי הסעיף בגבולות המכשיר (1-999 מיקרומטר). לניתוחים אלו, להגדיר את עובי הסעיף ב200 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר הדגימה מוטבע agarose באמצעות שכבה דקה של דבק נוזלי על tha דיסק הדגימהt הוא טבל במאגר של תקשורת, כי הוא עטוף בקרח רטוב. </li></ol></li></ol> .3 רקמות חתך, טיפול וניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את החלקים שנחתך בדייקנות מייד עם חתך באמצעות מלקחיים ומקום סטרילי בצלחת רב גם עם 1 מ&quot;ל של מדיה מלאה. כאשר חלקים מספיקים נרכשים לתגובה וניתוחים גומלים, למקם את הצלחת רב גם לתגובה לטיפול בתרבית רקמת חממה נקבעה בתנאי culturing הרקמה סטנדרטיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את סעיפי שליטה מרובים שbookend הסעיפים שטופלו במאמץ כדי לאשר תגובה תלוית מינון בניגוד לממצאים בתרבית. לבצע רקמת חתך במהירות (~ 30 - 40 דקות), גם בתוך כל השפעות מזיקות של זמן איסכמי הקר (~ 2 - 4 שעות) 18. בצע טיפול בחלקים רק לאחר תקופת הסתגלות לשעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופת הסתגלות 1 שעות, להוסיף הגדלת מינון (רלוונטי טיפולי; <em.&gt; למשל, 0 - 10 מיקרומטר ריכוזים) של תרופה לסעיפים והבית בתנאי תרבית רקמה סטנדרטית לתקופת הטיפול. לצורך המחקר, השתמש 24 ו / או 48 תקופות הערכת שעות. עם זאת, סעיפי רקמות שליטה (רכב בלבד) יישארו קיימא, כפי שנבדקו במחקר זה, לתקופות עד וכוללים תקופות הערכה 96 שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות טיפול, להסיר את כל הסעיפים בתנאים סטריליים ופורמלין לתקן על ידי הצבת קטע הרקמה בצינור המכיל גם 10% פורמלין ומקום שנאגרו ב RT O / N או בצינור המכיל 4% paraformaldehyde (לדלל paraformaldehyde 16% מבקבוקון עם PBS לריכוז סופי של 4%) ומקום בRT עבור שעה 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתקן סעיפי רקמות גדולים יותר (למשל., ~ 6 מ&quot;מ x 4 מ&quot;מ) 200 מיקרומטר עבה ב10% O נאגר פורמלין / N ב RT. לתקן חלקים קטנים יותר (לדוגמא., 1 מ&quot;מ x 1 מ&quot;מ) 200 מיקרומטר עבה בparaformaldehyde 4% עבור שעה 2 ב RT. הערה: לחדירה יעילה של מקבע את עוצמת הקול של fixative יש 20x הנפח של רקמה. בהתחשב בכך שתוצאות פרוטוקול זה בגדלים קטנים מאוד רקמות (לדוגמא, 6 מ&quot;מ 3 רקמה = 6 μl נפח), להבטחת שימוש קיבעון הנכון 1 מ&quot;ל של מקבע לכל גדלי הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות קיבעון יש לי דגימות רקמת פרפין מוטבעות על ידי אנשי המחלקה לפתולוגיה. סעיף דגימה בלוקים פרפין על גבי שקופיות טעונות להיות hematoxylin וeosin מוכתם והעריך immunohistochemically (למשל, אפופטוזיס). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture.">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li><li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+for+Determining+Malignancy+in+Tissue-Culture+Cell+Lines+in+the+Albino+Rat.">Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat.</a> New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).</li><li>Paul, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cancer+Cell+in+Vitro:+A+Review.">The Cancer Cell in Vitro: A Review.</a> Cancer Research. 22, 431-440 (1962).</li><li>Dean, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+response+to+CDK4/6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors.">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li><li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer.">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li><li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance.">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li><li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia.">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li><li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples.">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332 (2014).</li><li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells.">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li><li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90.">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li><li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+sialyl-Lewis(x/a)+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer.">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li><li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+paradox+of+E-cadherin:+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism.">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li><li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors.">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li><li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development.">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li><li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer:+current+status+and+future+directions.">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li><li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71.">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, 11076-11 (2013).</li><li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor,+progesterone+receptor,+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma.">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li></ol>

No conflicts of interest disclosed.

ביולוגים הסרטן מתמודדים עם אתגרים משמעותיים כאשר מנסים לפתח אסטרטגיות טיפוליות יעילות. בדיקת תרופות בפיתוח בשורות תאי הסרטן שהוקמו לא יכולה לשקף באופן מדויק בתגובה vivo ובניסויי vivo על המודלים PDX הן עבודה אינטנסיבית ויקר מאוד. לאור אמור לעיל, היישום של טכניקות vi...

פיתוח תרופות לסרטן יעילים הוכיח להיות מאוד מאתגר. קווי סרטן תאים וexplants גידול - כמו גם xenografts היו בשימוש במחקר סרטן ליותר ממחצית המאה 1,2,3. עד כה, הניתוח המולקולרי של רגישות לסמים והתנגדות בשתי שורות תאי הסרטן הוקמו וxenografts המופק מחולה (PDX) הוא הכרחי. עם זאת, הבדיקה של תרכובות בשורות תאי הסרטן שהוקמו לא לעתים קרובות חזויה של יעילות in vivo, ומקביל במחקרי vivo בבעלי חיים, במיוחד בדגמי PDX, זה מאוד יקר וגוזל זמן. המגבלות של מערכות מודל אלה, כלומר חוסר היכולת להודיע ​​על ההשפעה של microenvironment הילידים בהתקדמות גידול ותגובה לאסטרטגיות טיפוליות, הובילו את תחום המחקר לפיתוח שיטות נוספות כדי לשבח ניתוחים אלו. של אחרונים, תשומת לב מוגברת משלמת לכיוון ניתוח vivo לשעבר של קיבת חולהאו explants 4, 5 בשל ההבנה הגדולה יותר שתגובה לטיפול בסרטן אינה בלעדית להרכב המולקולרי הגלום של תאי סרטן, אלא מושפעת במידה רבה על ידי מייקרו-סביבת התאים הסרטניים 6, 7 תכונה שלא יכול להיות סכם על ידי שיטות culturing מסורתיות ו / או PDX. ניתוח Ex vivo בהקשר הנ&quot;ל (כלומר., השפעה של microenvironment תאים הסרטני המקיף הסמוך) מרמזת הערכת סעיפים גידול / גרורות עיקריות קיימא, ולא ניתוח vivo לשעבר של בידודים סלולריים 8, 9. אנו מדווחים כאן על טכניקת vivo לשעבר (כלומר., קטעים שנחתך בדייקנות טריות רקמה) של שני גידולים הראשוניים המטופל וגרורות קשורות (כלומר, בלוטות לימפה) שנאמנות מודיעה על תגובה (IC50), השפעות מחוץ היעד ומאפשר מולקולריים ניתוח של מנגנוני התנגדות ומשוב. בנוסף, ניתוח מתאם של therapeרגישות / התנגדות utic לעומת פרופיל ביטוי סמן ביולוגי והגנטי יכולה להתבצע במאמץ לזהות חולי סיכוי גבוה יותר להגיב לתרופה הניסיונית של עניין (כלומר., תגובת סמים גבוהה תואמת מטופל עם פרופיל ביולוגי מסוים). יישום של טכניקת vivo לשעבר והערכה באופנה רב פרמטר הוא תנועה לכיוון בחירת מטופלים ושיפור כללי של תוצאות קליניות. Ex vivo ניתוח תגובה לטיפול יכול להיות כלי סטנדרטי בפיתוח הקליני ופרה קליני של תרופות לסרטן והוא חזה כצעד לקראת גישת רפואה מותאמת אישית באסטרטגיות פיתוח טיפוליות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:96px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome Leica VT1000s</td>
			<td style="width:96px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">14047235613</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">UltraPure agarose</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">16500500</td>
			<td style="width:167px;">Prepare 4% and 6% before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Injector blade</td>
			<td style="width:96px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">121-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">MEM with Penicillin&#160; + Streptomycin</td>
			<td style="width:96px;">Media Core Facilities (MSKCC)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">The media is prepared at Memorial Sloan Kettering Cancer Center&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scalpel no. 10</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">31-200-32</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable forceps</td>
			<td style="width:96px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:119px;">84011182</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Embedding mold</td>
			<td style="width:96px;">Electron Microscopy Science</td>
			<td style="width:119px;">70181</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FBS (heat inactivated)</td>
			<td style="width:96px;">Gemini</td>
			<td style="width:119px;">100106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">24 well plates</td>
			<td style="width:96px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3524</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Formalin (10%)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">SDHT501128&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">16% Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">28908</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Embedding microsettes</td>
			<td style="width:96px;">Simport</td>
			<td style="width:119px;">M503-2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol (70%)</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A405P-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Waterbath</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15-462-2SQ</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microwave</td>
			<td style="width:96px;">General Electric</td>
			<td style="width:119px;">ModelJES2051DNBB</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Adhesive (Ethyl Cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E1505-5G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10mm dishes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353003</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">15ml tubes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">352096</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo treatment response of primary tumors and/or associated metastases for preclinical and clinical development of therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both direct and rapid analysis of therapeutic sensitivity and resistance. However, recent evidence suggests that therapeutic response is not exclusive to the inherent molecular composition of cancer cells but rather is greatly influenced by the tumor cell microenvironment, a feature that cannot be recapitulated by traditional culturing methods. Even implementation of tumor xenografts, though providing a wealth of information on drug delivery/efficacy, cannot capture the tumor cell/microenvironment crosstalk (i.e., soluble factors) that occurs within human tumors and greatly impacts tumor response. To this extent, we have developed an ex vivo (fresh tissue sectioning) technique which allows for the direct assessment of treatment response for preclinical and clinical therapeutics development. This technique maintains tissue integrity and cellular architecture within the tumor cell/microenvironment context throughout treatment response providing a more precise means to assess drug efficacy.

במחקר זה, טכניקת vivo לשעבר הייתה בשימוש בניתוח מתאם של רגישות / התנגדות טיפולית של מעכב חלבון הלם חום 90 (Hsp90i). בהערכה פרה קלינית של Hsp90i זה, גידול הראשוני בסרטן השד, ER + קרצינומה ductal פולשנית (IDC), וגרורות בלוטה לימפה קשורות נותחו vivo לשעבר לתגובה לטיפול &#160;...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics at JoVE.com

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

קווים הוקמו סרטן התאים וxenografts היו עמוד התווך של מחקר הסרטן בעשורים האחרונים. עם זאת, הראיות האחרונות עולה כי תגובה לטיפול מושפעת במידה רבה על ידי מייקרו-סביבת התאים הסרטניים. לכן, פיתחנו ניתוח vivo לשעבר של דגימות גידול ראשוניות למטרות פיתוח תרופות.

Ex Vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

ex-vivo-treatment-response-primary-tumors-andor-associated-metastases

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

14.6K Views.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center.  קווים הוקמו סרטן התאים וxenografts היו עמוד התווך של מחקר הסרטן בעשורים האחרונים. עם זאת, הראיות האחרונות עולה כי תגובה לטיפול מושפעת במידה רבה על ידי מייקרו-סביבת התאים הסרטניים. לכן, פיתחנו ניתוח vivo לשעבר של דגימות גידול ראשוניות למטרות פ...

Video: Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Thermal Ablation for the Treatment of Abdominal Tumors

Percutaneous thermal ablation is an emerging treatment option for many tumors of the abdomen not amenable to conventional treatments. During a thermal ablation procedure, a thin applicator is guided into the target tumor under imaging guidance. Energy is then applied to the tissue until temperatures rise to cytotoxic levels (50-60 &deg;C). Various energy sources are available to heat biological tissues, including radiofrequency (RF) electrical current, microwaves, laser light and ultrasonic waves. Of these, RF and microwave ablation are most commonly used worldwide.
During RF ablation, alternating electrical current (~500 kHz) produces resistive heating around the interstitial electrode. Skin surface electrodes (ground pads) are used to complete the electrical circuit. RF ablation has been in use for nearly 20 years, with good results for local tumor control, extended survival and low complication rates1,2. Recent studies suggest RF ablation may be a first-line treatment option for small hepatocellular carcinoma and renal-cell carcinoma3-5. However, RF heating is hampered by local blood flow and high electrical impedance tissues (eg, lung, bone, desiccated or charred tissue)6,7. Microwaves may alleviate some of these problems by producing faster, volumetric heating8-10. To create larger or conformal ablations, multiple microwave antennas can be used simultaneously while RF electrodes require sequential operation, which limits their efficiency. Early experiences with microwave systems suggest efficacy and safety similar to, or better than RF devices11-13.
Alternatively, cryoablation freezes the target tissues to lethal levels (-20 to -40 &deg;C). Percutaneous cryoablation has been shown to be effective against RCC and many metastatic tumors, particularly colorectal cancer, in the liver14-16. Cryoablation may also be associated with less post-procedure pain and faster recovery for some indications17. Cryoablation is often contraindicated for primary liver cancer due to underlying coagulopathy and associated bleeding risks frequently seen in cirrhotic patients. In addition, sudden release of tumor cellular contents when the frozen tissue thaws can lead to a potentially serious condition known as cryoshock 16.
Thermal tumor ablation can be performed at open surgery, laparoscopy or using a percutaneous approach. When performed percutaneously, the ablation procedure relies on imaging for diagnosis, planning, applicator guidance, treatment monitoring and follow-up. Ultrasound is the most popular modality for guidance and treatment monitoring worldwide, but computed tomography (CT) and magnetic resonance imaging (MRI) are commonly used as well. Contrast-enhanced CT or MRI are typically employed for diagnosis and follow-up imaging.

A thermal tumor ablation procedure is described. The entire procedure is detailed, including pretreatment planning and imaging studies, anesthesia, adjuvant techniques to facilitate a percutaneous approach, imaging guidance of the ablation device to the tumor, thermal treatment, post-treatment care and follow-up.

אבלציה תרמית לטיפול גידולים בטן

Percutaneous thermal ablation is an emerging treatment option for many tumors of the abdomen not amenable to conventional treatments. During a thermal ...

Monitoring Tumor Metastases and Osteolytic Lesions with Bioluminescence and Micro CT Imaging

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence imaging using IVIS Spectrum was employed to monitor the distribution and development of the tumor cells following the delivery procedure including DLIT reconstruction to measure the tumor signal and its location.
Development of metastatic lesions to the bone tissues triggers osteolytic activity and lesions to tibia and femur were evaluated longitudinally using micro CT. Imaging was performed using a Quantum FX micro CT system with fast imaging and low X-ray dose. The low radiation dose allows multiple imaging sessions to be performed with a cumulative X-ray dosage far below LD50. A mouse imaging shuttle device was used to sequentially image the mice with both IVIS Spectrum and Quantum FX achieving accurate animal positioning in both the bioluminescence and CT images. The optical and CT data sets were co-registered in 3-dimentions using the Living Image 4.1 software. This multi-mode approach allows close monitoring of tumor growth and development simultaneously with osteolytic activity.

An experimental mouse model of bone metastasis was established following intracardiac delivery of luciferase expressing mammary tumor cells. Tumor development and resulted osteolytic lesion were monitored longitudinally with bioluminescence and micro CT imaging.

ניטור גרורות סרטן ונגעים Osteolytic עם פליטת אור CT ו - Micro Imaging

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the presence of circulating tumor cells (CTCs). These rare cells have been demonstrated to be of clinical significance in metastatic breast, prostate, and colorectal cancers. The current gold standard in clinical CTC detection and enumeration is the FDA-cleared CellSearch system (CSS). This manuscript outlines the standard protocol utilized by this platform as well as two&#160;additional adapted protocols that describe the detailed process of user-defined marker optimization for protein characterization of patient CTCs and a comparable protocol for CTC capture in very low volumes of blood, using standard CSS reagents, for studying in vivo preclinical mouse models of metastasis. In addition, differences in CTC quality between healthy donor blood spiked with cells from tissue culture versus patient blood samples are highlighted. Finally, several commonly discrepant items that can lead to CTC misclassification errors are outlined. Taken together, these protocols will provide a useful resource for users of this platform interested in preclinical and clinical research pertaining to metastasis and CTCs.

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Circulating tumor cells (CTCs) are prognostic in several metastatic cancers. This manuscript describes the gold standard CellSearch system (CSS) CTC enumeration platform and highlights common misclassification errors. In addition, two&#160;adapted protocols are described for user-defined marker characterization of CTCs and CTC enumeration in preclinical mouse models of metastasis using this technology.

עיבוד של semiautomated מחזור תא גידול מבחני (CTC) ליישומים קליניים ומחקר הקליני

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, murine pancreatic tumor model of hepatic metastases via a hemispleen injection of syngeneic murine pancreatic tumor cells is described. This model mimics many of the clinical conditions in patients with metastatic disease to the liver. Mice consistently develop metastases in the liver allowing for investigation of the metastatic process, experimental therapy testing, and tumor immunology research.

A preclinical, murine model of hepatic metastases performed via a hemispleen injection technique.

דגם Murine פרה של גרורות כבדית

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic agent melphalan. Briefly, the procedure starts with the setup of a percutaneous veno-venous bypass from the femoral vein to the external jugular vein. Via a laparotomy, catheters are then inserted into the proper hepatic artery and the caval vein. The portal vein and the caval vein, both supra- and infrahepatically, are then clamped. The arterial and venous catheters are connected to a heart lung machine and the liver is perfused with melphalan (1 mg/kg body weight) for 60 min. This way it is possible to locally perfuse the liver with a high dose of a chemotherapeutic agent, without leakage to the systemic circulation.
In previous studies including patients with isolated liver metastases of uveal melanoma, an overall response rate of 33-100% and a median survival between 9 and 13 months, have been reported. The aim of this protocol is to give a clear description of how to perform the procedure and to discuss IHP as a treatment option for liver metastases of uveal melanoma.

Here, we present a protocol how to perform an isolated liver perfusion (IHP) with melphalan and we also discuss IHP as a treatment option for liver metastases of uveal melanoma.

כבדית זלוף המבודד לטיפול בכבד גרורות של מלנומה של הענביה

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are time consuming, expensive, and labor intensive. To overcome these obstacles, many research groups have turned to spheroid cultures of cancer cells. While useful, tumor spheroids or aggregates do not replicate cell-matrix interactions as found in vivo. As such, three-dimensional (3D) culture approaches utilizing an extracellular matrix scaffold provide a more realistic model system for investigation. Starting from subcutaneous or intracranial xenografts, tumor tissue is dissociated into a single cell suspension akin to cancer stem cell neurospheres. These cells are then embedded into a human-derived extracellular matrix, 3D human biogel, to generate a large number of microtumors. Interestingly, microtumors can be cultured for about a month with high viability and can be used for drug response testing using standard cytotoxicity assays such as 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and live cell imaging using Calcein-AM. Moreover, they can be analyzed via immunohistochemistry or harvested for molecular profiling, such as array-based high-throughput kinomic profiling, which is detailed here as well. 3D microtumors, thus, represent a versatile high-throughput model system that can more closely replicate in vivo tumor biology than traditional approaches.

Patient-derived xenografts of glioblastoma multiforme can be miniaturized into living microtumors using 3D human biogel culture system. This in vivo-like 3D tumor assay is suitable for drug response testing and molecular profiling, including kinomic analysis.

דור של Microtumors שימוש 3D אדם Biogel תרבות מערכת תאי Glioblastoma נגזרות חולות להרכבת פרופיל Kinomic ובדיקת תגובה לתרופה

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&#946; and Tau Neuropathology

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. The paradigm includes tests for spontaneous alternation in a Y-maze, novel object recognition, and limb clasping. These tests were selected because they: 1) interrogate function of cognitive or motor domains and the correlate neural circuitry relevant to the human disease state, 2) have clearly defined endpoints, 3) have easily implementable quality control checks, 4) can be run in a moderate throughput format, and 5) require little intervention by the investigator. These methods are designed for investigators looking to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks, or functional motor behaviors associated with Alzheimer's disease mouse models. The methods described here use behavioral tests that engage a number of different brain regions including hippocampus and various cortical areas. Investigators that desire cognitive tests that specifically assess cognition mediated by a single brain region could use these techniques to supplement other behavioral tests.

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&amp;#946; and Tau Neuropathology

Described here is a staged, behavioral screening approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. These methods are optimized to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks.

הערכה של חלופה ספונטנית, זיהוי אובייקטים רומנטי ו Clbing איברים מודלים עכבר מהונדס של Amyloid-β ו נוירופתולוגיה טאו

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional ...

Treatment of Liver Metastases Using an Internal Target Volume Method for Stereotactic Body Radiotherapy

The prognosis of patients with metastatic cancers has improved in the past decades due to effective chemotherapy and oligometastatic surgery. For inoperable patients, local ablation therapies, such as stereotactic body radiotherapy (SBRT), can provide effective local tumor control with minimal toxicity. Because of its high precision and accuracy, SBRT delivers a higher radiation dose per fraction, is more effective, and targets smaller irradiation volumes than does conventional radiotherapy. In addition, steep dose gradients from target lesions to surrounding normal tissues are achieved using SBRT; thus, SBRT provides more effective tumor control and exhibits fewer side effects than conventional radiotherapy. The use of SBRT is prevalent for treating intracranial lesions (known as stereotactic radiosurgery); however, it is now also used for treating spinal and adrenal metastases. Because of advancements in image-guided assistance and respiratory motion management, several studies have investigated the use of SBRT for treating lung or liver tumors, which move as a patient breathes. The results of these studies have suggested that SBRT favorably controls tumors in the case of moving lesions.
Four-dimensional computed tomography (4D-CT) with an abdominal compressor (AC) is clinically convenient for effective respiratory motion management. Because this method is noninvasive and allows free breathing, its use reduces complications. Furthermore, patients consider this method convenient. Moreover, it is considered more efficient than other methods of respiratory motion management by physicians and therapists. The use of 4D-CT with an AC for treating pulmonary lesions has also been widely investigated, and the technique is gaining acceptance for treating hepatic lesions. However, the protocols for using 4D-CT with an AC for treating hepatic lesions are different from those used for treating pulmonary lesions. In this article, we describe a new protocol for SBRT with 4D-CT and an AC for treating liver metastases.

Stereotactic body radiotherapy (SBRT) requires rigorous accuracy and precision for delivering high radiation doses per fraction to small treatment volumes to improve tumor control and simultaneously reduce toxicity. Herein, we present a noninvasive and clinically convenient respiratory motion management protocol for SBRT for liver metastases.

טיפול של גרורות בכבד באמצעות שיטת אחסון פנימי היעד עבור הקרנות הגוף סטיאוטטי

The prognosis of patients with metastatic cancers has improved in the past decades due to effective chemotherapy and oligometastatic surgery. For ...

Contractions of Human-iPSC-derived Cardiomyocyte Syncytia Measured with a Ca-sensitive Fluorescent Dye in Temperature-controlled 384-well Plates

Spontaneously contracting syncytia of cardiomyocytes derived from human-induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) are a useful model of human cardiac physiology and pharmacology. Various methods have been proposed to record this spontaneous activity and to evaluate drug effects, but many of these methods suffer from limited throughput and/or physiological relevance. We developed a high-throughput screening system to quantify the effects of exogenous compounds on hiPSC-CM's beating frequency, using a Ca-sensitive fluorescent dye and a temperature-controlled imaging multi-well plate reader. We describe how to prepare the cell plates and the compound plates and how to run the automated assay to achieve high sensitivity and reproducibility. We also describe how to transform and analyze the fluorescence data to provide reliable measures of drug effects on spontaneous rhythm. This assay can be used in drug discovery programs to guide chemical optimization away from, or toward, compounds affecting human cardiac function.

Spontaneously contracting syncytia of cardiomyocytes derived from human-induced pluripotent stem cells are useful models of human cardiac physiology and pharmacology. Here we present a high-throughput screening system to quantify the effects of exogenous compounds on beating frequency, using a Ca-sensitive fluorescent dye and a temperature-controlled imaging multi-well plate reader.

התכווצויות של האדם iPSC-נגזר Cardiomyocyte Syncytia נמדד עם תיוג הפלורסנט Ca הרגישים ב טמפרטורה מבוקרת צלחות 384-ובכן

Spontaneously contracting syncytia of cardiomyocytes derived from human-induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) are a useful model of human cardiac ...