The authors would like to thank the MSKCC Tissue Procurement Service Team (TPS), specifically, Maria Corazon Mariano, Priscilla McNeil, Anas Idelbi, Daniel Navarrete and Katrina Allen, in all of their efforts in the successful pursuit of this project and funding from the following sources: 5 R21 CA158609-02 and the Conquer Cancer Foundation and the Breast Cancer Research Foundation. In addition, the authors would like to thank Eric Cottington PhD, Vice President of the Office of Research and Project Administration, the Office of Technology Development, Research Outreach and Compliance and RTM Information Systems Support, in the support of the submission of this manuscript.

HINWEIS: Patientengewebebeschaffung wurde durch institutionell Review Board (IRB) zugelassenen -zugelassene Biospecimen und Klinische Protokolle (Protokoll-Nummern 09-121 und 11-041, beziehungsweise) am Memorial Sloan Kettering Cancer Center. 1. Gewebebeschaffung <ol><li> Beschaffung von Patienten Primärtumor / Metastasen HINWEIS: Bis heute hat dieses Protokoll auf chirurgisch entfernt Pankreas, Magen-und Brusttumorarten, sowie, Lymphom Metastasen durchgeführt. <ol><li> Richten Sie die OP-Team, um die Probe per Kurier oder Rohrpostsystem der Pathologie-Abteilung in dicht verschlossenen und sterile dicht Kunststoffbeutel in sterilen Probenspritzwassergeschützte Behälter zu liefern. Richten Sie die OP-Team, um die Probe im frischen Zustand ohne Formalin oder Fixiermittel zu transportieren. </li><li> Richten Sie den Pathologen oder Pathologe Assistent der frischen Probe ernten mit sterilen Technik, die incLudes Verwendung von sterilen Handschuhen und Instrumente unter einer Steril. </li><li> Notieren Sie sich die Erntezeit der beschafften Probe, die streng unter 30 min von der Beendigung des chirurgischen Eingriffs gehalten wird. Unter Berücksichtigung der Effekte kalten Ischämie, Proben nehmen Sie nicht aus reseziert Proben mit einer kalten Ischämiezeit von&gt; 30 min 18. </li><li> Leiten der Pathologie Personal an eine primäre Tumorprobe von etwa 0,5 cm3 bis 1,0 cm 3 in einem Abzug mit laminarer Strömung zu entfernen, um eine sterile Umgebung aufrechtzuerhalten. Wenn möglich, wählen Tumorgewebe von der Peripherie der Läsion Indexpotential Frank zentrale Nekrose (Zelltod) zu vermeiden. HINWEIS: Die nekrotischen Gewebe kann grob durch eines der folgenden Kriterien erkennbar sein: Verlust von Farbe oder Blässe des Gewebes; Verlust von Kraft, in dem nekrotischen Gewebe ist weich und brüchig; eine deutliche Abgrenzung zwischen nekrotischen und lebensfähiges Gewebe. </li><li> Richten Sie die pathologist oder Pathologe Assistent peripheren Gewebe, das im Überschuss (chirurgische Ablage) ist nach sofortiger Abtastung des Tumor für Diagnostik liefern. Die Probe wird in einem 15 ml sterilen konischen Zentrifugenröhrchen mit annähernd 5 ml Minimalmedium (MEM), das 1% Antibiotika (Penicillin und Streptomycin). </li><li> Falls vorhanden (zB Lymphknoten Achsel Schwanz Mastektomie Probe), beschaffen grob positive Lymphknoten assoziiert Probe der gleichen Größe (0,5 cm 3 bis 1,0 cm 3) und zu vergleichen, um das Ansprechen auf Medikamente des Primärtumors. Wie die Primärtumorprobe, legen die zugehörigen Lymphknoten Probe in einem 15 ml sterilen konischen Zentrifugenröhrchen mit annähernd 5 ml Minimalmedium (MEM), das 1% Antibiotika (Penicillin und Streptomycin). </li><li> Wenn die Größe der chirurgischen Probe Genehmigungen (zB Mastektomie Probe), zu entfernen (entfernt von Primärtumor) einer Probe von normalem Gewebe (dhnormalen dicht / Faser Brustparenchym) und in eine 15 ml sterilen konischen Zentrifugenröhrchen mit etwa 5 ml Minimalmedium (MEM), die 1% Antibiotika für nur Übertragungszwecken. Nach dem Transfer auf die Laboreinrichtungen, übertragen Sie die &quot;normalen&quot; Probe einem Kryoröhrchen, &quot;Snap&quot; einzufrieren und an einem -80 ° C Gefrierschrank für zukünftige molekulare Analysen. </li><li> Legen Sie alle Proben auf nassem Eis und sofort in den Laborraum für ex vivo frischem Gewebe Schnitte zu transportieren. Abschnitt nicht die normale Probe, sondern in einem -80 ° C nicht speichern Gefrierschrank für zukünftige molekulare Analysen. Übertragen einen Teil des Primärtumors und der zugehörigen Metastasen in einem Kryoröhrchen, &quot;Snap&quot; einzufrieren und an einem -80 ° C Gefrierschrank für zukünftige molekulare Analysen. </li></ol></li><li> Beschaffung von Gewebe aus klinischen Studien (zB optional Kernnadelbiopsien (CNB)) HINWEIS: Wir erhalten Tumorgewebe von Patientenauf klinische Protokolle, die ihre Zustimmung zu einer CNB einer zugänglichen Tumormetastasierung vor Beginn der Therapie zu unterziehen geben eingeschrieben. CNBs bis heute haben sich auf Patienten mit Brust-, Randzone Lymphom, Mantelzell-Lymphom, Metastasen paraganglioma, des Gebärmutterhalses (Plattenepithelkarzinom) und Eierstockkrebs durchgeführt. <ol><li> Haben klinische Personal aus Interventionelle Radiologie oder Fachabteilung führen eine Vorbehandlung Stanzbiopsie und platzieren Sie die Probe in einem 15 ml konischen sterile Zentrifugenröhrchen mit etwa 5 ml Minimalmedium (MEM), die 1% Antibiotika (Penicillin und Streptomycin). </li><li> Legen Sie die Biopsie auf nassem Eis und sofort auf den Laborraum für ex vivo frischem Gewebe Schnitte zu transportieren. </li></ol></li></ol> 2. Herstellung von Materialien für Schnitte und Vibratom Einstellungen <ol><li> Vorbereitung der Materialien für die Schnitte <ol><li> Stellen Sie einen 4% igen Lösung durch Zugabe von 4 g agastieg auf 100 ml PBS. Autoklaven (Zykluseinstellungen: flüssig, 121 ° C, 30 min, 15 Pfund pro Quadratzoll) die Lösung vor dem ersten Gebrauch. Für nachfolgende Verwendungen, legen Sie die 4% Agarose in der Mikrowelle auf (hohe Hitze für 30 Sekunden-Intervallen) vor jeder Verwendung zu verflüssigen und kühlen angemessen auf ~ 25 ° C (dh warm an) bewusst, dass Agarose erstarrt bei RT. </li><li> Verwenden Sie die 4% Agarose als nicht-ständiges Einbettung Gewebe Medien. Wenn die 4% Agarose ausreichend abgekühlt ist und sich noch in einem flüssigen Zustand mit einer sterilen Pinzette Platzieren der Gewebeprobe in einem Einbettmedium Form gießen und in 4% Agarose. </li><li> Die Gewebeprobe in der Nähe (ca. 2 mm Abstand), aber nicht direkt in der Schneidfläche Wand der Einbettung Form. Die 4% Agarose beginnt schnell zu verfestigen, damit entsprechend der Gewebeprobe zu positionieren schnell. Während des Schneidens, halten Sie die 4% Agarose in einem 55 ° C Wasserbad in Lösung zu halten. </li><li> Zu einem 24-Well-Platte für Schnittanalyse, 1 ml of Vollmedien (dh MEM + 10% fötales Rinderserum + 1% Antibiotika) in jede Vertiefung. Halten Sie die 24-Well-Platte bei RT (~ 25 ° C) während der Dauer der Schneiden. </li></ol></li><li> Vorbereitung der Vibratom Einstellungen <ol><li> Verwendung der vibrierenden Mikrotom, stellen Sie die Geschwindigkeit, mit der die Klinge nähert die Probe [0 (0,00 mm / s) auf 10 (2,5 mm / sec)] und die Frequenz der Klinge [0 (0 Hz) bis 10 (100 Hz) ]. Passen Sie die Einstellungen nach der Beschaffenheit des Gewebes (dh Dichte / Festigkeit). </li><li> Für einen primären Brusttumor von invasiven duktalen Karzinom, passen Sie die Einstellungen bis 6 und 3, Geschwindigkeit und Häufigkeit auf. Für weniger dicht / Firma Tumorgewebe, reduziert sich die Geschwindigkeit entsprechend zu erhöhen und Frequenz. </li><li> Stellen Sie die Schnittdicke innerhalb der Grenzen Instrument (1-999 um). Für diese Analysen, stellen Sie die Schnittdicke auf 200 um. </li><li> Montieren Sie die Agarose eingebettete Probe mit einer dünnen Schicht aus flüssigem Klebstoff auf der Objektplatte that in einem Reservoir von Medien, die in nassem Eis eingeschlossen ist taucht. </li></ol></li></ol> 3. Gewebe Schnitte, Behandlung &amp; Analysen <ol><li> Sofort nach Schneiden mit einer sterilen Pinzette und in eine Multi-Well-Platte mit 1 ml Vollmedium entfernen Sie die präzise geschnittenen Abschnitte. Wenn genügend Abschnitte sind für die Antwort und korrelativen Analysen erworben, legen Sie die Multi-Well-Platte zur Behandlung Reaktion in einem Gewebekulturbrutschrank bei Standardgewebekulturbedingungen eingestellt. </li><li> Nehmen mehrere Steuerabschnitte, die die behandelten Bereiche in dem Bemühen, eine dosisabhängige Reaktion zu bestätigen, im Gegensatz zu kultivierten Artefakte Buchstütze. Führen Schneiden schnell Gewebe (~ 30 - 40 min), der in jedes nachteiligen Auswirkungen der kalten Ischämiezeit (~ 2-4 h), 18. Führen Behandlung der Abschnitte erst nach einer Eingewöhnungszeit 1 Stunde. </li><li> Nach der Eingewöhnungszeit 1 Stunde, fügen steigenden Dosen (therapeutisch relevant ist; <em.&gt; ZB 0 - 10 uM Konzentrationen) von Arzneimittel zu den Abschnitten und Haus unter Standardzellkulturbedingungen für die Behandlungsdauer. Für diese Studie verwenden 24 und / oder 48 Stunden Veranlagungszeiträume. Jedoch wird die Kontrolle (nur Vehikel) Gewebeschnitte lebensfähig bleiben, wie in dieser Studie getestet, für Zeiträume bis zu einschließlich 96 Stunden Beurteilungszeiträume. </li><li> Nach der Behandlung entfernt alle Abschnitte steril und Formalin-fix, indem der Gewebeabschnitt in einer Röhre, die entweder 10% gepuffertem Formalin und Stelle bei RT O / N oder in einem Rohr, enthaltend 4% Paraformaldehyd (Verdünnung 16% Paraformaldehyd aus einem Fläschchen mit PBS für eine endgültige Konzentration von 4%) und Platz bei RT für 2 Stunden. <ol><li> Fix größeren Gewebeschnitten (zB., ~ 6 mm x 4 mm) 200 um dick in 10% Formalin O / N bei RT. Beheben kleinere Abschnitte (beispiels., 1 mm x 1 mm), 200 um dick, in 4% Paraformaldehyd 2 h bei RT. HINWEIS: Für eine effiziente Penetration der Fixierungs das Volumen von fixative sollte das Volumen des Gewebes 20x werden. Angesichts, dass dieses Protokoll zu extrem kleinen Gewebe Größen (zB 6 mm 3 Gewebe = 6 ul Volumen), für Sicherung der richtige Fixierung Verwendung von 1 ml Fixiermittel für alle Gewebe Größen. </li><li> Nach der Fixierung müssen die Gewebeproben in Paraffin durch die Pathologie-Abteilung Personal eingebettet. Abschnitt Probe Paraffinblöcke auf geladene Objektträger zu Hämatoxylin und Eosin gefärbt und bewertet immunhistochemisch (zB Apoptose) sein. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture.">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li><li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+for+Determining+Malignancy+in+Tissue-Culture+Cell+Lines+in+the+Albino+Rat.">Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat.</a> New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).</li><li>Paul, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cancer+Cell+in+Vitro:+A+Review.">The Cancer Cell in Vitro: A Review.</a> Cancer Research. 22, 431-440 (1962).</li><li>Dean, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+response+to+CDK4/6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors.">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li><li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer.">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li><li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance.">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li><li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia.">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li><li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples.">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332 (2014).</li><li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells.">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li><li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90.">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li><li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+sialyl-Lewis(x/a)+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer.">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li><li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+paradox+of+E-cadherin:+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism.">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li><li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors.">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li><li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development.">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li><li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer:+current+status+and+future+directions.">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li><li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71.">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, 11076-11 (2013).</li><li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor,+progesterone+receptor,+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma.">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li></ol>

No conflicts of interest disclosed.

Krebs Biologen vor großen Herausforderungen, wenn man versucht, wirksame therapeutische Strategien zu entwickeln. Testen von Medikamenten in der Entwicklung auf etablierte Krebszelllinien nicht genau in vivo Reaktion und in vivo Versuchen an PDX Modelle sind arbeitsintensiv und sehr teuer. Angesichts des Vorstehenden wird die Anwendung der Ex-vivo-Techniken der Primärtumoren Patienten 14, 15 wird nun neben der molekularen Analyse von etablierten Tumorzelllinien und von einem Patie...

Entwicklung wirksamer Krebstherapeutika hat sich als äußerst schwierig. Krebszelllinien und Tumor Explantate - ebenso wie Heterotransplantate wurden in der Krebsforschung seit über einem halben Jahrhundert 1,2,3 verwendet. Bis heute ist die molekulare Analyse von Arzneimittelempfindlichkeit und Widerstand in beiden etablierten Krebszelllinien und Patienten abgeleitete Xenografts (PDX) unverzichtbar. Jedoch ist der Test-Verbindungen in etablierte Krebszelllinien oft nicht prädiktiv für die Wirksamkeit in vivo, und die entsprechenden in vivo-Untersuchungen an Tieren, insbesondere in PDX Modelle, ist sehr teuer und zeitaufwendig. Die Grenzen dieser Modellsysteme, nämlich der Unfähigkeit, über den Einfluss der nativen Mikroumgebung der Tumorprogression und der Reaktion auf therapeutische Strategien zu informieren, hat das Forschungsfeld, um zusätzliche Methoden, um diese Analysen zu entwickeln Kompliment geführt. Der letzten, ist erhöhte Aufmerksamkeit in Richtung Ex-vivo-Analyse von Patienten TUM bezahltoder Explantaten 4, 5 aufgrund der besseren Verständnis, dass Krebs therapeutische Antwort nicht exklusiv ist, um die inhärente molekulare Zusammensetzung von Krebszellen, sondern wird stark durch die Tumorzelle Mikro 6, 7 eine Funktion, die nicht durch herkömmliche Kultivierungsverfahren und rekapitulieren beeinflusst / oder PDX. Ex-vivo-Analyse in der obigen Kontext (dh., Einfluss der benachbarten Umgebung von Tumorzellen Mikroumgebung) impliziert Bewertung von lebensfähigen primären Tumor / Metastasen Abschnitte, statt ex vivo Analyse zellulärer Isolate 8, 9. Wir berichten hier über einen Ex-vivo-Technik (dh., Präzise geschnittenen frischen Gewebeschnitten) der beiden Patienten Primärtumoren und Metastasen assoziiert (dh Lymphknoten), die treu informiert über Antwort (IC50), Off-Target-Effekte und ermöglicht für die molekulare Analyse von Widerstand und Feedback-Mechanismen. Zusätzlich wird ein Korrelat Analyse therapeUTIC Empfindlichkeit / Resistenz gegen Biomarker und Genexpressionsprofil kann in dem Bemühen, Patienten eher zu dem experimentellen Medikament von Interesse reagieren zu identifizieren durchgeführt werden (dh., hohe Medikamentenantwort passt Patienten mit bestimmten biologischen Profil). Anwendung der Ex-vivo-Technik und Bewertung in einer Multi-Parameter-Mode ist Bewegung in Richtung Patientenauswahl und die allgemeine Verbesserung der klinischen Ergebnisse. Ex-vivo-Behandlung Response-Analyse konnte ein Standardwerkzeug in der präklinischen und klinischen Entwicklung von Krebstherapeutika zu werden und wird als ein Schritt hin zu einer personalisierten Medizin Ansatz in der therapeutischen Entwicklungsstrategien in Betracht gezogen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:96px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome Leica VT1000s</td>
			<td style="width:96px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">14047235613</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">UltraPure agarose</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">16500500</td>
			<td style="width:167px;">Prepare 4% and 6% before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Injector blade</td>
			<td style="width:96px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">121-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">MEM with Penicillin&#160; + Streptomycin</td>
			<td style="width:96px;">Media Core Facilities (MSKCC)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">The media is prepared at Memorial Sloan Kettering Cancer Center&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scalpel no. 10</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">31-200-32</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable forceps</td>
			<td style="width:96px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:119px;">84011182</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Embedding mold</td>
			<td style="width:96px;">Electron Microscopy Science</td>
			<td style="width:119px;">70181</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FBS (heat inactivated)</td>
			<td style="width:96px;">Gemini</td>
			<td style="width:119px;">100106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">24 well plates</td>
			<td style="width:96px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3524</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Formalin (10%)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">SDHT501128&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">16% Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">28908</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Embedding microsettes</td>
			<td style="width:96px;">Simport</td>
			<td style="width:119px;">M503-2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol (70%)</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A405P-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Waterbath</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15-462-2SQ</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microwave</td>
			<td style="width:96px;">General Electric</td>
			<td style="width:119px;">ModelJES2051DNBB</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Adhesive (Ethyl Cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E1505-5G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10mm dishes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353003</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">15ml tubes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">352096</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
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ex vivo treatment response of primary tumors and/or associated metastases for preclinical and clinical development of therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both direct and rapid analysis of therapeutic sensitivity and resistance. However, recent evidence suggests that therapeutic response is not exclusive to the inherent molecular composition of cancer cells but rather is greatly influenced by the tumor cell microenvironment, a feature that cannot be recapitulated by traditional culturing methods. Even implementation of tumor xenografts, though providing a wealth of information on drug delivery/efficacy, cannot capture the tumor cell/microenvironment crosstalk (i.e., soluble factors) that occurs within human tumors and greatly impacts tumor response. To this extent, we have developed an ex vivo (fresh tissue sectioning) technique which allows for the direct assessment of treatment response for preclinical and clinical therapeutics development. This technique maintains tissue integrity and cellular architecture within the tumor cell/microenvironment context throughout treatment response providing a more precise means to assess drug efficacy.

Für diese Studie wurde die Ex-vivo-Technik in einem korrelativen Analyse der therapeutischen Empfindlichkeit / Widerstand eines Hitzeschockprotein 90-Inhibitor (Hsp90i) verwendet. In einer präklinischen Bewertung dieses Hsp90i, den Primärtumor Brustkrebs, einem ER + invasive duktale Karzinom (IDC) und die zugehörigen Lymphknoten-Metastasen wurden ex vivo zur Behandlung Reaktion analysiert &#160; (Abbildung 1). Mehrere 200 um serielle Schnitte wurden mit Vehikel all...

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Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Gegründet Krebszelllinien und Heterotransplantate waren die Hauptstütze der Krebsforschung in den letzten Jahrzehnten. Jedoch schlägt letzten Beweis, dass therapeutische Reaktion wird durch die Tumorzelle Mikro beeinflusst. Daher haben wir eine ex vivo-Analyse des Primärtumorproben für die Arzneimittelentwicklung Zwecke entwickelt.

Ex-vivo-Ansprechen auf die Behandlung von Primärtumoren und / oder assoziierten Metastasen für die präklinische und klinische Entwicklung von Therapeutika

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

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Medicine

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

14.6K Aufrufe.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center.  Gegründet Krebszelllinien und Heterotransplantate waren die Hauptstütze der Krebsforschung in den letzten Jahrzehnten. Jedoch schlägt letzten Beweis, dass therapeutische Reaktion wird durch die Tumorzelle Mikro beeinflusst. Daher haben wir eine ex vivo-Analyse des Primärtumorproben für die Arzneimittelentwicklung Zwecke entwickelt. 