The authors would like to thank the MSKCC Tissue Procurement Service Team (TPS), specifically, Maria Corazon Mariano, Priscilla McNeil, Anas Idelbi, Daniel Navarrete and Katrina Allen, in all of their efforts in the successful pursuit of this project and funding from the following sources: 5 R21 CA158609-02 and the Conquer Cancer Foundation and the Breast Cancer Research Foundation. In addition, the authors would like to thank Eric Cottington PhD, Vice President of the Office of Research and Project Administration, the Office of Technology Development, Research Outreach and Compliance and RTM Information Systems Support, in the support of the submission of this manuscript.

NOTA: approvvigionamento dei tessuti del paziente è stato autorizzato attraverso la revisione bordo istituzionalmente (IRB) -approvato Biospecimen e protocolli clinici (numeri di protocollo 09-121 e 11-041, rispettivamente) al Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Procurement 1 Tissue <ol><li> Approvvigionamento di paziente tumore primario / metastasi NOTA: Fino ad oggi, questo protocollo è stata eseguita su pancreatiche, gastriche e tipi di tumore al seno chirurgicamente rimosso, così come, metastasi linfoma. <ol><li> Dirigere il team chirurgico di consegnare il campione di corriere o sistema a tubo pneumatico per il reparto di Patologia in borsa tenuta esemplare di plastica ben chiuso e sterile nel contenitore a prova di fuoriuscita sterile. Dirigere la squadra chirurgica per trasportare il campione allo stato fresco senza formalina o fissante. </li><li> Dirigere l&#39;assistente patologo o patologo per raccogliere il campione fresco con tecnica sterile, che includes uso di guanti e strumenti sterili sotto una cappa a flusso laminare. </li><li> Registrare il tempo di raccolta del campione procurati, che viene tenuto rigorosamente sotto 30 minuti dal completamento della procedura chirurgica. Prendendo in considerazione gli effetti di ischemia fredda, non prelevare campioni da campioni resecati con un tempo di ischemia fredda&gt; 30 min 18. </li><li> Dirigere il personale del Dipartimento di Patologia per rimuovere un campione del tumore primario di circa 0,5 centimetri 3-1,0 cm 3 in una cappa a flusso laminare per mantenere un ambiente sterile. Quando possibile, scegliere il tessuto tumorale dalla periferia della lesione indice per evitare possibili necrosi centrale (morte cellulare) frank. NOTA: Il tessuto necrotico può essere grossolanamente riconoscibile per uno dei seguenti criteri: perdita di colore o pallore del tessuto; perdita di forza in cui il tessuto necrotico è morbido e friabile; una demarcazione netta tra il tessuto necrotico e vitale. </li><li> Dirigere il pathologist o assistente patologo per fornire tessuti periferici che è in eccesso (scarti chirurgica) dopo il prelievo immediato del tumore per la valutazione diagnostica. Porre il campione in un tubo da centrifuga da 15 ml sterile contenente circa 5 ml di supporti essenziale minimo (MEM) contenente 1% antibiotici (penicillina e streptomicina). </li><li> Se disponibile (ad esempio, linfonodi ascellari di coda di campione mastectomia), procurarsi un grossolanamente positivi esemplare linfonodali associato della stessa dimensione (0,5 centimetri 3-1,0 cm 3) e confrontare la risposta ai farmaci del tumore primario. Come il campione del tumore primario, posizionare il campione associati linfonodi in un tubo da centrifuga da 15 ml sterile contenente circa 5 ml di supporto essenziale minimo (MEM) contenente 1% antibiotici (penicillina e streptomicina). </li><li> Se la dimensione dei permessi campioni chirurgici (ad esempio, campioni mastectomia), rimuovere (distante da tumore primario) di un campione di tessuto normale (cioè,normale / parenchima denso fibroso seno) e posto in una provetta da centrifuga conica da 15 ml sterile contenente circa 5 ml di supporti minimi essenziali (MEM) contenenti 1% antibiotici solo a scopo di trasferimento. In seguito trasferimento alle strutture di laboratorio, di trasferire il campione &#39;normale&#39; per un esageratamente, congelare &#39;scatto&#39; e conservare in un freezer -80 ° C per le analisi molecolari futuri. </li><li> Mettere tutti i campioni su ghiaccio bagnato e trasportare immediatamente allo spazio laboratorio per il sezionamento ex vivo tessuto fresco. Non tratto il campione normale, ma piuttosto conservare in un freezer -80 ° C per le analisi molecolari futuri. Trasferire una parte del tumore primitivo e metastasi associato ad una esageratamente, congelare &#39;scatto&#39; e conservare in freezer -80 ° C per le analisi molecolari futuri. </li></ol></li><li> Approvvigionamento di tessuto da studi clinici (ad esempio, centrali opzionale biopsie (CNB)) NOTA BENE: Otteniamo tessuti tumorali da pazientiiscritti ai protocolli clinici che danno il loro consenso a sottoporsi ad un CNB di una metastasi tumorale accessibili prima dell&#39;inizio della terapia. CNB, ad oggi, sono stati effettuati su pazienti con mammella, linfoma della zona marginale, linfoma a cellule del mantello, paraganglioma metastatico, cervice (cellule squamose) e tumori ovarici. <ol><li> Disporre di personale clinici di Radiologia Interventistica o servizio competente di eseguire un pre-trattamento nucleo ago biopsia e posizionare il campione in un 15 ml sterile provetta da centrifuga conica contenente circa 5 ml di supporti essenziale minimo (MEM) contenente 1% antibiotici (penicillina e streptomicina). </li><li> Posizionare il campione di biopsia su ghiaccio bagnato e trasportare immediatamente allo spazio laboratorio per il sezionamento ex vivo tessuto fresco. </li></ol></li></ol> 2 Preparazione dei materiali per le impostazioni sezionamento e vibratome <ol><li> Preparazione dei materiali per il sezionamento <ol><li> Fare una soluzione di agarosio al 4% con l&#39;aggiunta di 4 g di agasalito a 100 ml di PBS. Autoclave (Impostazioni ciclo: liquidi, 121 ° C, 30 min, a 15 libbre per pollice quadrato) la soluzione prima del primo utilizzo. Per gli usi successivi, posizionare l&#39;agarosio 4% in un forno a microonde per liquefare (Alto calore per intervalli di 30 sec) prima di ogni utilizzo e raffreddare adeguatamente a ~ 25 ° C (cioè, caldo al tatto), consapevoli che agarosio solidifica a temperatura ambiente. </li><li> Utilizzare l&#39;agarosio 4% come un supporto di tessuto embedding non permanente. Quando l&#39;agarosio 4% si è raffreddato a sufficienza ed è ancora in uno stato liquido, con una pinza sterile posizionare il campione di tessuto in uno stampo embedding e versare il agarosio 4%. </li><li> Posizionare il campione di tessuto stretti (~ 2 mm di distanza), ma non direttamente sulla parete superficie di taglio dello stampo embedding. L&#39;agarosio 4% inizierà a solidificarsi in fretta, quindi opportunamente posizionare il campione di tessuto in fretta. Durante il sezionamento, mantenere l&#39;agarosio 4% in un bagno d&#39;acqua a 55 ° C per mantenere in soluzione. </li><li> Per una piastra a 24 pozzetti per l&#39;analisi di sezione, aggiungere 1 ml of multimediale completo (ad esempio, MEM + 10% di siero fetale bovino + 1% antibiotici) in ciascun pozzetto. Mantenere la piastra a 24 pozzetti a temperatura ambiente (~ 25 ° C) per tutta la durata di sezionamento. </li></ol></li><li> Preparazione delle impostazioni vibratome <ol><li> Utilizzando il microtomo vibrante, impostare la velocità con cui la lama si avvicina il campione [0 (0,00 mm / sec) a 10 (2,5 mm / sec)] e la frequenza della lama [0 (0 Hz) a 10 (100 Hz) ]. Regolare le impostazioni in base alla consistenza del tessuto (ad esempio, densità / consistenza). </li><li> Per un tumore mammario primario del carcinoma duttale invasivo, regolare le impostazioni a 6 e 3, la velocità e la frequenza rispettivamente. Per tessuto tumorale meno denso / ditta, diminuire la velocità e aumentare la frequenza di conseguenza. </li><li> Impostare lo spessore di taglio entro i limiti dello strumento (1-999 micron). Per queste analisi, impostare lo spessore della sezione a 200 micron. </li><li> Montare il campione agarosio-embedded utilizzando un sottile strato di adesivo liquido sul tha disco dei campionit è immerso in un serbatoio di media che è racchiuso nel ghiaccio bagnato. </li></ol></li></ol> 3 Tissue sezionamento, trattamento e analisi <ol><li> Rimuovere le sezioni di precisione-affettato subito dopo il sezionamento con pinza sterile e posto in un piatto multi-bene con 1 ml di completo supporto. Quando le sezioni sono acquisite sufficienti per la risposta e le analisi correlative, posizionare la piastra multi-bene per la risposta al trattamento in un tessuto culturale incubatore fissato a condizioni di coltura dei tessuti normali. </li><li> Prendere più sezioni di controllo che fermalibri sezioni trattate nel tentativo di confermare la risposta dose-dipendente al contrario di manufatti in coltura. Eseguire tessuto sezionamento rapidamente (~ 30 - 40 minuti), ben al di eventuali effetti negativi del freddo tempo ischemico (~ 2 - 4 ore) 18. Eseguire il trattamento delle sezioni solo dopo un periodo di acclimatazione 1 ora. </li><li> Dopo il periodo di acclimatazione 1 ora, aggiungere dosi crescenti (terapeuticamente rilevanti; <em.&gt; Ad esempio, 0 - 10 micron) concentrazioni di farmaco alle sezioni e la casa in condizioni di coltura di tessuti standard per il periodo di trattamento. Per questo studio, utilizzare i periodi di valutazione hr 24 e / o 48. Tuttavia, il controllo (solo veicolo) sezioni di tessuto rimarranno vitali, come testato in questo studio, per periodi fino al periodi di valutazione 96 hr. </li><li> Dopo il trattamento, rimuovere tutte le sezioni in condizioni sterili e formalina-fix posizionando la sezione di tessuto in una provetta contenente sia il 10% formalina tamponata e posto a RT O / N o in una provetta contenente 4% paraformaldeide (diluito 16% paraformaldeide da un flaconcino con PBS per una concentrazione finale di 4%) e posto a temperatura ambiente per 2 ore. <ol><li> Fissare sezioni di tessuto di grandi dimensioni (ad es., ~ 6 mm x 4 mm) 200 micron di spessore in 10% formalina tamponata O / N a RT. Fissare sezioni più piccole (ad es. 1 mm x 1 mm) 200 micron di spessore in paraformaldeide al 4% per 2 ore a temperatura ambiente. NOTA: Per una penetrazione efficace del fissativo del volume di fixative opportuno 20X il volume del tessuto. Dato che il presente protocollo si traduce in dimensioni estremamente piccole di tessuto (ad esempio 6 mm 3 di tessuto = 6 ml di volume), per la garanzia di un uso corretto fissaggio 1 ml di fissativo per tutte le dimensioni del tessuto. </li><li> Dopo fissazione hanno i campioni di tessuto incluso in paraffina da parte del personale del Dipartimento di Patologia. Sezione esemplare blocchi di paraffina su vetrini caricati per essere ematossilina e eosina macchiato e valutati immunoistochimica (ad esempio, apoptosi). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture.">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li><li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+for+Determining+Malignancy+in+Tissue-Culture+Cell+Lines+in+the+Albino+Rat.">Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat.</a> New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).</li><li>Paul, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cancer+Cell+in+Vitro:+A+Review.">The Cancer Cell in Vitro: A Review.</a> Cancer Research. 22, 431-440 (1962).</li><li>Dean, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+response+to+CDK4/6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors.">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li><li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer.">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li><li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance.">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li><li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia.">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li><li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples.">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332 (2014).</li><li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells.">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li><li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90.">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li><li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+sialyl-Lewis(x/a)+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer.">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li><li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+paradox+of+E-cadherin:+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism.">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li><li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors.">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li><li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development.">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li><li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer:+current+status+and+future+directions.">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li><li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71.">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, 11076-11 (2013).</li><li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor,+progesterone+receptor,+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma.">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li></ol>

No conflicts of interest disclosed.

Biologi cancro devono affrontare sfide significative nel tentativo di sviluppare efficaci strategie terapeutiche. Test farmaci in sviluppo su linee cellulari di cancro stabilite non può riflettere con precisione in risposta vivo e in vivo su modelli PDX sono laborioso e molto costoso. Considerato quanto sopra, l&#39;applicazione di tecniche ex vivo di paziente primaria tumori 14, 15 è ora posizionato accanto alla analisi molecolare di consolidate linee cellulari tumorali ...

Lo sviluppo di terapie efficaci cancro ha dimostrato di essere estremamente impegnativo. Linee cellulari tumorali e espianti tumorali - così come xenotrapianti sono stati utilizzati nella ricerca sul cancro per oltre mezzo secolo 1,2,3. Ad oggi, l&#39;analisi molecolare della sensibilità di droga e resistenza in entrambe le linee di cellule di cancro affermati e xenotrapianti di derivazione paziente (PDX) è indispensabile. Tuttavia, i test di composti in linee cellulari di cancro stabiliti spesso non è predittivo di efficacia in vivo, e corrispondenti studi in vivo negli animali, soprattutto nei modelli PDX, è molto costoso e richiede tempo. I limiti di questi sistemi modello, vale a dire l&#39;impossibilità di informare l&#39;influenza del microambiente nativo nella progressione tumorale e la risposta alle strategie terapeutiche, ha portato il campo di ricerca per sviluppare metodi aggiuntivi per complimentarmi con queste analisi. Di recente, accresciuta attenzione viene rivolta verso ex vivo analisi di tum pazienteo espianti 4, 5 a causa della maggiore comprensione che il cancro risposta terapeutica non è esclusiva alla composizione molecolare intrinseca delle cellule tumorali, ma piuttosto è fortemente influenzato dal microambiente delle cellule tumorali 6, 7, una caratteristica che non può essere riassunta con metodi di coltura tradizionali e / o PDX. ex vivo analisi nel contesto di cui sopra (ad esempio., influenza adiacente tumorale circostante microambiente cellulare) implica la valutazione delle sezioni tumore / metastasi primarie vitali, piuttosto che ex vivo analisi degli isolati cellulari 8, 9. Riportiamo qui su una tecnica ex vivo (ad esempio., Sezioni di precisione-fette fresche di tessuto) di entrambi i tumori primari del paziente e metastasi associate (ad esempio, linfonodi) che segnala fedelmente alla risposta (IC50), gli effetti off-target e consente molecolare analisi dei meccanismi di resistenza e di feedback. Inoltre, l&#39;analisi correlativa di therapeUTIC sensibilità / resistenza contro biomarker e profilo di espressione genica può essere eseguita in uno sforzo per identificare i pazienti più probabilità di rispondere al farmaco sperimentale di interesse (ad esempio., la risposta alle alte farmaco corrisponde paziente con particolare profilo biologico). Applicazione della tecnica ex vivo e la valutazione in modo multi-parametro è movimento verso la selezione dei pazienti e il miglioramento complessivo dei risultati clinici. Trattamento ex vivo analisi di risposta potrebbe diventare uno strumento standard per lo sviluppo preclinico e clinico di terapie del cancro ed è immaginato come un passo verso un approccio di medicina personalizzata nelle strategie di sviluppo terapeutiche.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:96px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome Leica VT1000s</td>
			<td style="width:96px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">14047235613</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">UltraPure agarose</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">16500500</td>
			<td style="width:167px;">Prepare 4% and 6% before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Injector blade</td>
			<td style="width:96px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">121-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">MEM with Penicillin&#160; + Streptomycin</td>
			<td style="width:96px;">Media Core Facilities (MSKCC)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">The media is prepared at Memorial Sloan Kettering Cancer Center&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scalpel no. 10</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">31-200-32</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable forceps</td>
			<td style="width:96px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:119px;">84011182</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Embedding mold</td>
			<td style="width:96px;">Electron Microscopy Science</td>
			<td style="width:119px;">70181</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FBS (heat inactivated)</td>
			<td style="width:96px;">Gemini</td>
			<td style="width:119px;">100106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">24 well plates</td>
			<td style="width:96px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3524</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Formalin (10%)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">SDHT501128&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">16% Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:96px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">28908</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Embedding microsettes</td>
			<td style="width:96px;">Simport</td>
			<td style="width:119px;">M503-2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol (70%)</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A405P-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Waterbath</td>
			<td style="width:96px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15-462-2SQ</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microwave</td>
			<td style="width:96px;">General Electric</td>
			<td style="width:119px;">ModelJES2051DNBB</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Adhesive (Ethyl Cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:96px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E1505-5G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10mm dishes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353003</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">15ml tubes</td>
			<td style="width:96px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">352096</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
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</table>

ex vivo treatment response of primary tumors and/or associated metastases for preclinical and clinical development of therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both direct and rapid analysis of therapeutic sensitivity and resistance. However, recent evidence suggests that therapeutic response is not exclusive to the inherent molecular composition of cancer cells but rather is greatly influenced by the tumor cell microenvironment, a feature that cannot be recapitulated by traditional culturing methods. Even implementation of tumor xenografts, though providing a wealth of information on drug delivery/efficacy, cannot capture the tumor cell/microenvironment crosstalk (i.e., soluble factors) that occurs within human tumors and greatly impacts tumor response. To this extent, we have developed an ex vivo (fresh tissue sectioning) technique which allows for the direct assessment of treatment response for preclinical and clinical therapeutics development. This technique maintains tissue integrity and cellular architecture within the tumor cell/microenvironment context throughout treatment response providing a more precise means to assess drug efficacy.

Per questo studio, la tecnica ex vivo è stato utilizzato in un&#39;analisi correlativa terapeutico sensibilità / resistenza di un inibitore della heat shock protein 90 (Hsp90i). In una valutazione preclinica di questo Hsp90i, il cancro al seno tumore primario, un ER + invasivo carcinoma duttale (IDC), e associata metastasi linfonodali sono stati analizzati ex-vivo per la risposta al trattamento &#160; (Figura 1). Più di 200 micron sezioni seriali sono stati trattati...

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Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Fondata linee cellulari tumorali e xenotrapianti sono stati il ​​cardine della ricerca sul cancro negli ultimi decenni. Tuttavia, recenti evidenze suggeriscono che la risposta terapeutica è fortemente influenzata dal microambiente delle cellule tumorali. Di conseguenza, abbiamo sviluppato una analisi ex vivo di campioni tumorali primarie per scopi di sviluppo della droga.

Ex Vivo risposta al trattamento di tumori primari e / o associati per metastasi preclinici e sviluppo clinico di Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

14.6K Views.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center.  Fondata linee cellulari tumorali e xenotrapianti sono stati il ​​cardine della ricerca sul cancro negli ultimi decenni. Tuttavia, recenti evidenze suggeriscono che la risposta terapeutica è fortemente influenzata dal microambiente delle cellule tumorali. Di conseguenza, abbiamo sviluppato una analisi ex vivo di campioni tumorali primarie per scopi di sviluppo della droga. 