We thank Marleen De Meulemeester for demonstrating the assay technique in the video film. B. I. R. is a Postdoctoral Research Fellow of the Research Foundation &#8211; Flanders (FWO &#8211; Vlaanderen). L.M.M. is a recipient of an Emmanuel van der Schueren grant from the Flemish League against Cancer (Vlaamse Liga tegen Kanker).

<ol>
	<li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Van Roy, F. M., de Baetselier, P., JR, B. e. r. t. i. n. o. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+cancer+invasion.">Molecular mechanisms of cancer invasion.</a> Encyclopedia of Cancer. 2, 1072-1083 (1997).</li><li>Mareel, M., Kint, J., Meyvisch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+study+of+the+invasion+of+malignant+C3H+mouse+fibroblasts+into+embryonic+chick+heart+in+vitro.">Methods of study of the invasion of malignant C3H mouse fibroblasts into embryonic chick heart in vitro.</a> Virchows Arch. B. Cell Pathol. Incl. Mol. Pathol. 30 (1), 95-111 (1979).</li><li>Albini, A., Noonan, D. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+in+vitro+by+explants+of+Lucke+renal+carcinoma+cocultered+with+normal+tissue+is+temperature+dependent.">Invasion in vitro by explants of Lucke renal carcinoma cocultered with normal tissue is temperature dependent.</a> Clin. Exp. Metastasis. 4 (4), 237-243 (1986).</li><li>Wanson, J. C., de Ridder, L., Mosselmans, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+hyperplastic+nodule+cells+from+diethylnitrosamine+treated+cells.">Invasion of hyperplastic nodule cells from diethylnitrosamine treated cells.</a> Cancer Res. 41 (12 Pt 1), 5162-5175 (1981).</li><li>Mareel, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+temperature+on+invasion+of+MO4+mouse+fibrosarcoma+cells+in+organ+culture.">Effect of temperature on invasion of MO4 mouse fibrosarcoma cells in organ culture.</a> Clin. Exp. Metastasis. 2 (2), 107-125 (1984).</li><li>Laerum, O. D., Steinsvag, S., Bjerkvig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+and+tissue+culture+of+the+central+nervous+system:+recent+developments+and+current+applications.">Cell and tissue culture of the central nervous system: recent developments and current applications.</a> Acta Neurol. Scand. 72 (6), 529-549 (1985).</li><li>Schroyens, W., Mareel, M. M., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+invasiveness+of+human+bladder+cancer+from+cell+lines+and+biopsy+specimens.">In vitro invasiveness of human bladder cancer from cell lines and biopsy specimens.</a> Clin. Exp. Metastasis. 1 (2), 153-162 (1983).</li><li>Mareel, M. M., De Bruyne, G. K., Vandesande, F., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+study+of+embryonic+chick+heart+invaded+by+malignant+cells+in+three+dimensional+culture.">Immunohistochemical study of embryonic chick heart invaded by malignant cells in three dimensional culture.</a> Invasion Metastasis. 1 (3), 195-204 (1981).</li><li>Bjerkvig, R., Laerum, O. D., Mella, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+cell+interactions+with+fetal+rat+brain+aggregates+in+vitro+and+with+brain+tissue+in+vivo.">Glioma cell interactions with fetal rat brain aggregates in vitro and with brain tissue in vivo.</a> Cancer Res. 46 (8), 4071-4079 (1986).</li><li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confrontation+of+an+invasive+(MO4)+and+a+non-invasive+(MDCK)+cell+line+with+embryonic+chick+heart+fragments+in+serum-free+culture+media.">Confrontation of an invasive (MO4) and a non-invasive (MDCK) cell line with embryonic chick heart fragments in serum-free culture media.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. 22 (9), 508-514 (1986).</li><li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Storme, G. A., Grundmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tumor+spread:+a+brief+overview.">Mechanisms of tumor spread: a brief overview.</a> Cancer Campaign. 9: The Cancer Patient. , 59-64 (1985).</li><li>De Neve, W. J., Storme, G. A., De Bruyne, G. K., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+image+analysis+system+for+the+quantification+of+invasion+in+vitro.">An image analysis system for the quantification of invasion in vitro.</a> Clin. Exp. Metast. 3 (2), 87-101 (1985).</li><li>Smolle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+evaluation+of+melanoma+cell+invasion+in+three-dimensional+confrontation+cultures+in+vitro+using+automated+image+analysis.">Quantitative evaluation of melanoma cell invasion in three-dimensional confrontation cultures in vitro using automated image analysis.</a> J. Invest. Dermatol. 94 (1), 114-119 (1990).</li><li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=flavonoid+effect+on+tumor+invasion+and+metastasis.">flavonoid effect on tumor invasion and metastasis.</a> Food Technol. 48 (11), 121-124 (1994).</li><li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+tangeretin+on+tamoxifen&#8217;s+therapeutic+benefit+in+mammary+cancer.">The influence of tangeretin on tamoxifen&#8217;s therapeutic benefit in mammary cancer.</a> J. Natl. Cancer Inst. 91 (4), 354-359 (1999).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Durante a preparação de PHF, os fragmentos não pode ficar em suspensão, mas aderir à parede do vaso; isso pode ser superado através do aumento do volume do meio de cultura. Se o número de PHF é muito baixo e o seu tamanho é muito grande, diminuir o volume do meio de cultura. A falha das células de teste para agregar pode ser devido a flutuações na temperatura ou a infecção microbiana. Alternativamente, uma incapacidade de agregado pode ser uma característica intrínseca das células. Durante a fixação d...

Invasão é a marca de tumores malignos. Esta actividade não só conduz à destruição dos tecidos circundantes, mas também está implicada na formação de metástases. Uma vez que doentes com cancro morrem de invasão e metástase, e tratamentos anti-invasivos eficientes são ainda escassos, ensaios de laboratório que simulam a invasão de células tumorais têm sido desenvolvidos. O objectivo do ensaio de coração de galinha é oferecer um método de cultura de órgão relevante para estudar a invasão do tumor em três dimensões. O ensaio consegue distinguir entre as células invasivas e não invasivas, e permite estudar os efeitos dos compostos de teste na invasão tumoral. A lógica por trás da utilização do ensaio é o próprio conceito de que os tumores são ecossistemas em que as células neoplásicas interagem de forma contínua com o seu estroma (células hospedeiras e de matriz extracelular), e que por elas invasão interacções moleculares é uma sintonia fina. Assim, no ensaio de células de tumor são confrontados com livifragmentos ng embrionárias coração pintainho 2, que servem não só como substrato para a invasão de células tumorais, mas também como uma fonte de diferentes tipos de células do estroma e de elementos de matriz. O coração de galinha contém os miócitos, os fibroblastos e as células endoteliais, e a matriz extracelular é composta de laminina, fibronectina e diferentes tipos de colagénio. Desta forma, a técnica de cultura de órgãos tridimensional abrange muitas interacções celulares e moleculares envolvidas na invasão de tumores de doentes. A principal vantagem do ensaio de coração de galinha é a implementação de efeitos estromais. Este aspecto é mais completa do que em outros ensaios de invasão in vitro que se baseiam na invasão de células tumorais em géis não vivos compostos de membrana basal 3 ou 4 moléculas de matriz intersticial. O conceito de confronto entre as células tumorais eo tecido hospedeiro vivo normal, como encontrados em experiências de cultura de órgãos foi apresentado por váriosautores incluindo Wolff e Schneider em França 5, Easty e Easty no Reino Unido 6 e 7 Schleich na Alemanha. Duas vantagens técnicas do ensaio de invasão coração pintainho em relação aos métodos citados é que o volume dos fragmentos podem ser facilmente padronizados, e que eles permanecem contráctil, o que permite a monitorização da integridade funcional durante a cultura de órgãos. Além disso, são preferidos os embriões de aves, porque eles podem ser facilmente dissecado a partir do conteúdo do ovo esterilizada. O ensaio tem semelhança conceptual para o ensaio de membrana pintainho chorioallantois 8, oferecendo um complexo do estroma circundante para as células tumorais. O ensaio tem sido aplicado com sucesso para distinguir entre variantes de células invasivas e não invasivas dos mesmos tumores humanos, tais como na MCF-7 (mamária) 9 e HCT-8 (do cólon) 10 famílias de linhas celulares. A técnica é útil para testar compostos potencialmente anti-invasivas bem <sup&gt; 11,12. Como explicado mais adiante, que pode ser usado para o estabelecimento de relações de moléculas orgânicas pequenas estrutura-actividade. O ensaio, no entanto, não levam em conta a contribuição de células imunológicas a invasão câncer. Deve ser salientado que a técnica não pode ser considerada como um sistema de análise de alto rendimento, por causa do elevado número de manipulações, o número limitado de passos do ensaio (máximo de 30 culturas) e o tempo de rotação (cerca de 1 mês).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ringer&#39;s salt solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>CEO123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-agar</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>214010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>103157P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA : albumin from bovine serum, cohn V fract.</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4503-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM-Rega 3</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td>19993013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gyrotory shakers</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>G10 and G33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks 50 ml</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>92717</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Petri dishes</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>68516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iridectomy scissors</td>
			<td>Rumex</td>
			<td>11-0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macroscope with calibrated ocular grid</td>
			<td>Wild</td>
			<td>157702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin wax</td>
			<td>International Medical products</td>
			<td>8599956</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>230251-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris&#39; hematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslipping resin (Tissue-Tek)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin melting apparatus</td>
			<td>GFL</td>
			<td>1052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome for paraffin sectioning</td>
			<td>Reichert</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stppers for Erlemeyer flasks with gas in- and outlets</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>2602421 and 260243</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminobenzidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REAX rocking table</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td>54131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well tissue dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NUNC142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophtalmological enucleation spoon</td>
			<td>Rumex</td>
			<td>16-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp forceps</td>
			<td>Rumex</td>
			<td>4-111T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>Nickel-Electro LTD</td>
			<td>7112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks 5 ml</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>211901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides washed and degreased</td>
			<td>International Medical products</td>
			<td>8613908</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chick heart invasion assay for testing the invasiveness of cancer cells and the activity of potentially anti-invasive compounds

O objectivo do ensaio de coração de galinha é oferecer um método de cultura de órgão relevante para estudar a invasão do tumor em três dimensões. O ensaio consegue distinguir entre as células invasivas e não invasivas, e permite estudo dos efeitos dos compostos de teste na invasão tumoral. As células cancerosas - quer como agregados ou células individuais - são confrontados com fragmentos de coração de galinha embrionário. Após cultura de órgãos em suspensão durante alguns dias ou semanas que confrontam as culturas são fixadas e incluídas em parafina para análise histológica. A interacção tridimensional entre as células cancerosas e o tecido normal é então reconstruído a partir de cortes seriados corados com hematoxilina-eosina ou após coloração imuno-histoquímica para epitopos no tecido cardíaco ou as células cancerosas que confrontam. O ensaio é consistente com o conceito recente que a invasão do câncer é o resultado de interações moleculares entre as células cancerosas e seus elementos hospedeiros do estroma vizinho (miofibroblastos, endothElial células, componentes da matriz extracelular, etc.). Aqui, neste ambiente estromal é oferecido para as células cancerosas como um fragmento de tecido vivo. Aspectos de apoio para a relevância do ensaio são múltiplas. Invasão no ensaio está de acordo com os critérios de invasão do câncer: ocupação progressiva e substituição no tempo e no espaço do tecido hospedeiro, e capacidade de invasão e não-invasivo in vivo das células que confrontam geralmente se correlaciona com o resultado do ensaio. Além disso, o padrão de invasão de células in vivo, tal como definido por patologistas, reflecte-se nas imagens histológicas no ensaio. A análise quantitativa relação estrutura-actividade (QSAR) dos resultados obtidos com vários compostos orgânicos congéneres potencialmente anti-invasivos permitiu o estudo das relações estrutura-actividade de flavonóides e calconas, e conhecidas drogas anti-metastáticos utilizados na clínica (por exemplo, inibidores de microtúbulos ) inibir a invasão no ensaio bem. However, o ensaio não leva em conta as contribuições imunológicas a invasão câncer.

Os cortes histológicos tal como apresentado na Figura 5 mostra o resultado final de um número de ensaios bem sucedidos. A histologia de som das culturas indica as células viáveis ​​e permite interpretar a interacção entre as células de tumor e tecido normal. Além disso, qualquer reacção imunitária do tecido normal pode ser observado, o que confirma a idade correcta dos embriões de galinha utilizados, por exemplo, antes de o sistema de rejeição imunitária é desenvolvida. Não há bactérias v...

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Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

Aqui, apresentamos um protocolo para estudar a invasão das células tumorais em fragmentos de tecido normal vivendo em três dimensões. Esta técnica de cultura de órgãos é aplicada principalmente para testar drogas potencialmente anti-invasivos in vitro.

Pintainho Coração Invasion Ensaio para testar a invasão das células neoplásicas e da Actividade de compostos potencialmente anti-invasivos

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...

chick-heart-invasion-assay-for-testing-invasiveness-cancer-cells

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Medicine

8.9K visualizações.  University of Ghent.  Aqui, apresentamos um protocolo para estudar a invasão das células tumorais em fragmentos de tecido normal vivendo em três dimensões. Esta técnica de cultura de órgãos é aplicada principalmente para testar drogas potencialmente anti-invasivos in vitro. 