Este método pode ajudar a responder perguntas essenciais no campo de regeneração do tecido da pele, que é como substituir os diversos tipos de células e estruturas que estão contidas na pele natural. A principal vantagem dessa técnica é que a pele autóloga de espessura total pode ser coletada com morbidade mínima do local do doador. Demonstrando o procedimento estará Bill Farinelli, que é um pesquisador associado em nosso laboratório.
Inicie este procedimento com a configuração da etapa de produção, conforme descrito no protocolo de texto. Instale duas rodas de corte concentricamente na ferramenta rotativa. Use uma roda de corte de corte de diamante de grade inferior menor sobre uma roda de corte de pedra de grade maior.
Posicione uma fonte de luz aérea com um braço ajustável sobre a ferramenta rotativa com a luz apontada para as rodas de corte. Para melhorar a visualização, posicione um microscópio de dissecação sobre a configuração da produção para que a ocular esteja focada nos discos de corte. Ao remodelar a ponta da agulha, use óculos protetores e uma máscara cirúrgica para evitar que partículas metálicas finas entrem nos olhos ou vias aéreas.
Escolha agulhas hipodérmicas do tamanho do medidor apropriado com base em requisitos experimentais. Marque o comprimento pretendido em cada agulha de colheita. Abaixe a agulha perpendicularmente para a ferramenta rotativa com a potência usando a borda do disco de corte externo para cortar o excesso de comprimento da agulha no ponto marcado.
Conecte a agulha cega encurtada ao conector de trava Luer feminino no estágio de produção. Ajuste o estágio de rotação horizontal para que a agulha esteja em um ângulo de 12 graus paralelo aos discos de corte na ferramenta rotativa. Acenda a luz aérea e ajuste sua posição observando a agulha sob a ampliação até que a luz seja refletida fora da linha média da agulha.
Potência na ferramenta rotativa. Em seguida, use o estágio de tradução para avançar a agulha em direção ao disco de corte interno. Continue avançando a agulha lentamente contra o disco de corte até que o disco de corte atinja aproximadamente a linha média da agulha.
Mova lentamente a superfície da agulha cortada da roda de diamante interna para a roda de pedra externa para finalizar a superfície da agulha cortada com um polimento mais fino. Retire a agulha do disco de corte. Usando o estágio de rotação vertical, gire a agulha 180 graus.
Repita estes passos para remodelar o outro lado da agulha. Agora remova a agulha da fase de produção. Limpe o furo interno com um fio de metal ligeiramente menor que o diâmetro interno da agulha.
Usando uma vara de madeira afiada, remova quaisquer rebarbas que ainda possam ser anexadas às bordas da agulha recém-formada. Quando for necessário um alto volume de microclolumns, remova o êmbolo de uma seringa de 20 mililitros. Em seguida, conecte a seringa a um adaptador de sucção.
Complete o conjunto anexando uma agulha de colheita à seringa. Use um pedaço de tubo de sucção estéril para conectar o adaptador de sucção a um recipiente de sucção estéril. Certifique-se de que o aparelho de colheita está conectado a uma entrada de recipiente que permite que o fluido flua para dentro do recipiente sem impedimentos.
Agora conecte o aparelho a uma fonte de pressão negativa. Colher os microcólumns inserindo a agulha de colheita na pele. Mergulhe intermitentemente a agulha de colheita em um recipiente de soro fisiológico estéril durante o procedimento de colheita para lavar o sistema.
Mantenha na mão um fio de metal ou uma agulha ligeiramente menor do que o diâmetro interno da agulha de colheita. Se a agulha ficar entupida, ela pode ser limpa inserindo o fio metálico no furo da agulha. Quando a quantidade desejada de microcólumns tiver se acumulado no recipiente, desconecte o dispositivo da sucção.
Em seguida, despeje o conteúdo do recipiente de sucção através de um filtro para coletar os microcollumns. Mostrada aqui é uma agulha de colheita acabada vista da frente e do lado. Observe os dois pontos de corte na ponta.
As agulhas de colheita devem ser capazes de coletar microcollumns de tecido de pele de espessura total com uma taxa aproximada de 80 a 90%. Nesta figura, as marcas de verificação representam um milímetro. Cada microcolumn deve conter epiderme, derme e alguma gordura subcutânea.
Microcólumns podem ser aplicados diretamente à cicatrização de feridas ou podem ser combinados com diferentes materiais matriciais para produzir construções combinadas. Microcólumns também podem ser mantidos na cultura para estudos in vitro. Ao realizar a colheita de alto volume, é importante lembrar de incorporar uma descarga salina intermitente.
Embora este método tenha sido projetado para reparação de feridas cutâneas, um princípio semelhante poderia ser aplicado a outros sistemas de órgãos, como músculos onde o enxerto de tecido autólogo é necessário.
