Diese Methode kann helfen, wesentliche Fragen im Hautgewebe Regenerationsfeld zu beantworten, die ist, wie die verschiedenen Zelltypen und Strukturen, die in der natürlichen Haut enthalten sind zu ersetzen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass autologe Volldicke Haut mit minimaler Spender-Site-Morbidität gesammelt werden kann. Demonstriert wird das Verfahren von Bill Farinelli, der wissenschaftlicher Mitarbeiter in unserem Labor ist.
Beginnen Sie dieses Verfahren mit der Einrichtung der Produktionsphase, wie im Textprotokoll beschrieben. Installieren Sie zwei Trennscheiben konzentrisch auf das Drehwerkzeug. Verwenden Sie ein kleineres niedrigeres Diamant-Cutoff-Rad über einem größeren höheren Rasterstein-Cutoff-Rad.
Positionieren Sie eine Oberlichtquelle mit verstellbarem Arm über dem Drehwerkzeug mit dem Licht, das auf die Schneidräder gerichtet ist. Um die Visualisierung zu verbessern, positionieren Sie ein Sezieren von Mikroskop über dem Produktionsaufbau, sodass das Okular auf die Schneidscheiben fokussiert ist. Tragen Sie beim Umformen der Nadelspitze eine Schutzbrille und eine chirurgische Maske, um zu verhindern, dass feine Metallpartikel in die Augen oder Atemwege gelangen.
Wählen Sie hypodermische Nadeln der entsprechenden Messgröße basierend auf experimentellen Anforderungen. Markieren Sie die vorgesehene Länge auf jeder Erntenadel. Senken Sie die Nadel senkrecht zum Drehwerkzeug mit der Einschaltkraft, die die Kante der äußeren Schneidscheibe verwendet, um die überschüssige Länge der Nadel an der markierten Stelle abzuschneiden.
Schließen Sie die verkürzte stumpfe Nadel an den weiblichen Luer-Verriegelungsstecker auf der Produktionsbühne an. Stellen Sie die horizontale Drehstufe so ein, dass sich die Nadel in einem 12-Grad-Winkel parallel zu den Schneidscheiben am Drehwerkzeug befindet. Schalten Sie das Oberlicht ein und passen Sie seine Position an, während Sie die Nadel unter der Vergrößerung beobachten, bis das Licht von der Mittellinie der Nadel reflektiert wird.
Schalten Sie das Drehwerkzeug ein. Verwenden Sie dann die Übersetzungsstufe, um die Nadel in Richtung der inneren Schneidscheibe zu bringen. Bewegen Sie die Nadel langsam gegen die Schneidscheibe, bis die Schneidscheibe ungefähr die Mittellinie der Nadel erreicht.
Bewegen Sie die geschnittene Nadeloberfläche vom inneren Diamantrad langsam auf das äußere Steinrad, um die geschnittene Nadeloberfläche mit einer feineren Politur zu beenden. Ziehen Sie die Nadel von der Schneidscheibe weg. Drehen Sie die Nadel mit der vertikalen Rotationsstufe um 180 Grad.
Wiederholen Sie diese Schritte, um die andere Seite der Nadel umzuformen. Entfernen Sie nun die Nadel von der Produktionsstufe. Reinigen Sie die Innenbohrung mit einem Metalldraht, der etwas kleiner ist als der Innendurchmesser der Nadel.
Entfernen Sie mit einem scharfen Holzstab alle Grate, die noch an den Rändern der neu gebildeten Nadel befestigt werden können. Wenn ein hohes Volumen an Mikrosäulen benötigt wird, entfernen Sie den Kolben aus einer 20-Milliliter-Spritze. Befestigen Sie die Spritze dann an einem Saugadapter.
Vervollständigen Sie die Montage, indem Sie eine Erntenadel an der Spritze befestigen. Verwenden Sie ein Stück sterile Saugschläuche, um den Saugadapter an einen sterilen Saugkanister anzuschließen. Stellen Sie sicher, dass das Erntegerät mit einem Kanistereingang verbunden ist, der es ermöglicht, ungehindert Flüssigkeit in den Kanister zu fließen.
Verbinden Sie das Gerät nun mit einer Unterdruckquelle. Ernten Sie die Mikrosäulen, indem Sie die Erntenadel in die Haut einlegen. Tauchen Sie die Erntenadel während des Erntevorgangs zeitweise in einen Behälter mit steriler Saline, um das System zu spülen.
Halten Sie einen Metalldraht oder eine Nadel bereit, die etwas kleiner ist als der Innendurchmesser der Erntenadel. Wenn die Nadel verstopft wird, kann sie durch Einsetzen des Metalldrahtes in die Nadelbohrung gelöscht werden. Wenn sich die gewünschte Menge an Mikrosäulen im Kanister angesammelt hat, trennen Sie das Gerät von der Absaugung.
Dann gießen Sie den Inhalt des Saugkanisters durch einen Filter, um die Mikrosäulen zu sammeln. Hier ist eine fertige Erntenadel von vorne und von der Seite betrachtet. Beachten Sie die beiden Schnittpunkte an der Spitze.
Die Erntenadeln sollten in der Lage sein, Mikrosäulen aus volldicken Hautgewebe mit einer Erfolgsrate von ca. 80 bis 90% zu sammeln. In dieser Abbildung stellen Häkchen einen Millimeter dar. Jede Mikrosäule sollte Epidermis, Dermis und etwas subkutanes Fett enthalten.
Mikrosäulen können direkt auf die Wundheilung aufgetragen oder mit verschiedenen Matrixmaterialien kombiniert werden, um Kombinationskonstrukte zu erzeugen. Mikrosäulen können auch in der Kultur für In-vitro-Studien gepflegt werden. Bei der Durchführung von Hochvolumen-Ernte, ist es wichtig, denken Sie daran, eine intermittierende Saline-Flush zu integrieren.
Obwohl diese Methode für die Reparatur von Hautwunden entwickelt wurde, könnte ein ähnliches Prinzip auf andere Organsysteme wie Muskeln angewendet werden, bei denen eine autologe Gewebetransplantation erforderlich ist.
