Em estudos de farmacocinética e toxicocinética, precisamos coletar uma certa quantidade de sangue em pontos de tempo específicos em ratos para detectar a exposição a medicamentos. Este estudo descreve um método simples e eficiente para a coleta de sangue da veia subclávia em ratos neste protocolo. Esta técnica permite a amostragem repetida, oportuna e facilmente identificável sem anestesia, e obtém sangue de alta qualidade através da coleta repetitiva de amostras.
Você deve conhecer a anatomia da veia subclávia, a contenção capaz de ratos e o ponto da agulha. O método é arriscado e exige um profissional qualificado. Para começar, encontre o ponto mais baixo da fossa triangular subclávia entre o pescoço e o membro anterior em um rato.
Mova-se aproximadamente dois a três milímetros em direção à cabeça e alcance o ponto da agulha no local de coleta de sangue. Remova o cabelo usando um barbeador elétrico. Para manter a cabeça, o pescoço e o peito do rato eretos, segure a pele na parte de trás do pescoço com uma mão e exponha o local da injeção.
Endireitar o membro anterior no lado do local da injeção para manter o seu nível. Mantenha a seringa paralela à cabeça do rato com a outra mão e incline a seringa para fora de cinco a 10 graus, de modo que a ponta fique inclinada em direção à direção ventral. Insira a agulha totalmente na cavidade anterior.
Retire a seringa para manter a pressão negativa com o tubo. Mova lentamente a agulha de profunda para rasa e volte para o mesmo caminho. Quando o sangue tiver entrado na agulha da seringa, fixe a posição da agulha.
Dependendo do peso e da saúde dos ratos, monitorar a quantidade máxima de sangue a ser coletada de acordo com os padrões estabelecidos pelo comitê de cuidados e uso de animais da instituição. Na ausência de outros requisitos, não remova mais de 20% do volume sanguíneo total do animal no prazo de 24 horas. Quando uma amostra de sangue suficiente for coletada, retire imediatamente a seringa e prepare-se para o tratamento com sangue.
Pressurize o local de injeção do rato durante um a dois minutos para parar a hemorragia. Como o local de coleta está na parte inferior do pescoço, aperte a pele da veia subclávia para parar o sangramento, pressionando-o. Retire a agulha da seringa e descarte-a no recipiente de ferramentas afiado.
Transfira lentamente o sangue da seringa para um tubo de 1,5 mililitro. Pressione a seringa contra a parede para evitar a formação de bolhas. Feche a tampa do tubo de microcentrífuga e mexa-o suavemente.
Misture o sangue com o anticoagulante completamente, virando-o de cabeça para baixo pelo menos cinco vezes. Dentro de 120 minutos após a coleta do plasma, centrifugar a amostra de sangue total a 2.000 RCF por 10 a 15 minutos à temperatura ambiente. Use uma pistola de pipeta para transferir o plasma superior para um tubo de microcentrífuga fresco.
Não toque na cabeça da pipeta com o sangue total inferior. Descartar ou recentrifugar o plasma contaminado com os glóbulos vermelhos. As amostras de plasma coletadas com precisão da veia subclávia eram amarelo pálido translúcido.
A coleta de sangue inadequada ou a manipulação resultaram em hemólise. Durante a primeira amostragem, o peso corporal do animal macho estava entre 268 a 297 gramas, e cerca de 214 a 239 gramas para as fêmeas. Durante a última amostragem, o peso corporal do animal macho foi entre 376 a 462 gramas, e cerca de 254 a 300 gramas para as fêmeas.
Houve um intervalo de 28 dias entre a coleta de sangue toxicocinético. O peso corporal do animal aumentou de forma constante a cada semana, e a observação clínica foi normal. O método preciso de inserção da agulha e o ângulo podem garantir uma coleta de sangue suave e evitar riscos.
Esta operação requer prática repetida.
