Coleta de sangue através de punção venosa subclávia em camundongos. A coleta de amostras de sangue de camundongos é essencial na maioria dos laboratórios de pesquisa. As abordagens convencionais para coleta de sangue em camundongos são o corte de cauda, quando menos de 100 amostras de microliter são necessárias.
No entanto, se mais de 100 microliteres de sangue são necessários em um ponto de tempo não terminal, sangramento retro-orbital, submandibular ou coleta de sangue submental, são as técnicas mais comumente consideradas. Em alguns locais, a incisão venosa jugular ou cateterismo foram adotados como métodos alternativos. No entanto, os métodos acima são dolorosos para os ratos.
Com base em nossas pesquisas formais, aqui introduzimos uma nova estratégia econômica e suave para a coleta de sangue da veia subclávia em camundongos. A segurança e a viabilidade, e o volume sanguíneo obtido com esta técnica, são apresentados e discutidos. Após anestesia geral, deite o rato em posição supina.
Limpe o espaço infraclavicular com 75% de etanol. Confirme a clavícula e a fossa suprasternal antes da punção. Identifique o local da punção no meio da clavícula.
Mova as agulhas superior e para cima em direção ao fossae suprasternal, apenas posterior para a clavícula. Depois de mover de três a quatro milímetros para a frente, mantenha a pressão negativa na seringa, e lentamente puxe a agulha de volta. O sangue vai drenar para a seringa durante o curso da retirada.
Após a coleta de sangue, pressione o local da punção suavemente por um a dois minutos para parar de sangrar. Prepare os materiais necessários, incluindo 75% de etanol, fita adesiva, agente de depilação, tubos, seringa de 1,0 mililitro conectada com agulha, balança eletrônica, heparina e soro fisiológico. Após anestesia geral satisfatória, coloque o mouse sobre a mesa de operação em posição supina, e de dois a quatro centímetros de distância da borda da mesa para facilitar a punção venosa.
Fixar os membros em uma posição confortável, como mostrado na Figura 2. Não foi necessária intubação ou ventilação mecânica em todo o procedimento. Aplique agente depilação ao redor do espaço infraclavicular com cotonete.
Três minutos depois, lave o agente de depilação com cotonete molhado, para remover a pele e qualquer sujeira visível. Esterilize o espaço infraclavicular com 75% de etanol e, em seguida, seque com gaze limpa. Identifique a localização do osso da clavícula e fossae suprasternal com um dedo.
Localize o local da punção, perto do meio do osso da clavícula, e preso nele. Coloque o dedo indicador esquerdo lateral no local da punção para fixar a pele e o tecido subcutâneo. Mova a agulha para cima em um cranial deitado em direção ao fossae suprasternal.
Uma vez que a agulha entre no tecido subcutâneo, o dedo anelar da mão direita deve mover-se para trás para formar pressão negativa. Mova-se para a frente da seringa por três a quatro milímetros, mas pare se não houver drenagem de sangue na seringa. Em seguida, lentamente retirar a seringa, e manter a pressão negativa nele.
Na maioria das ocasiões, o sangue entrará na seringa no curso do recuo. Uma vez que o sangue entre na seringa, conserte a seringa, e mantenha pressão negativa, até que o volume de sangue seja coletado na seringa. Após a coleta de sangue, retire a agulha de perfuração, e pressione o local da punção com cotonete ligeiramente por um a dois minutos para parar de sangrar, em seguida, enviar ratos de volta para gaiolas.
Transfira a amostra de sangue para o nosso tubo de heparina. Repetimos este procedimento em 10 ratos Quimi. Nove procedimentos foram bem sucedidos no lado direito.
Um caso falhou em três tentativas no lado direito, e a coleta de sangue foi bem sucedida no lado esquerdo. O tempo de curso variou entre 35 e 126 segundos. O volume de coleta de sangue foi definido para cerca de 200 microliters.
A coleta de sangue foi sucedida com uma a quatro tentativas. A amostragem de sangue teve sucesso na primeira tentativa em dois camundongos, e em quatro tentativas em um rato, em duas ou três tentativas em outros camundongos. Todos os dados foram ilustrados na Tabela 1.
Todos os animais sobreviveram e se recuperaram 30 minutos após a amostragem de sangue. Não houve diferença significativa entre sexo para todos os parâmetros observados. Em conclusão, a punção venosa subclávia é um método seguro e eficaz para a coleta de sangue em camundongos.
Além do corte da veia da cauda e da coleta de sangue plexo retro-orbital, este método é viável e adequado para pesquisas observacionais em vários pontos de tempo em camundongos.
