Este estudo relata amostragem sanguínea da veia da cauda em camundongos usando um sistema de tubo de extração de vácuo com lupa de óculos. Nosso método é fácil de praticar e pode ser usado para repetir a amostragem de sangue em camundongos. Um rato é colocado no suporte de contenção de plástico no início.
A cauda é limpa e limpa com 70% de etanol. Em seguida, o operador usa a lupa de óculos para melhorar a visualização da cauda do rato. Uma ponta de agulha borboleta é então inserida em uma das veias laterais dilatadas da cauda, e o sangue é coletado no tubo de coleta de vácuo através da extremidade de borracha da agulha borboleta.
Finalmente, a agulha é removida e o processo de coleta de sangue é concluído. A veia da cauda é um local preferido para amostragem de sangue. Este método de amostragem de sangue está relacionado com lesões mínimas para camundongos, porém a veia da cauda dos camundongos é muito fina, de modo que às vezes é difícil de perfurar, aqui descrevemos um método simples de amostragem de sangue da veia da cauda em ratos de teste de laboratório usando um sistema de tubo de extração de vácuo.
Este método é simples e eficiente e pode ser usado para obter sangue necessário repetidamente em camundongos. O procedimento será demonstrado por dois membros do nosso laboratório, Xiaoyan Liu e Wusong Zou Para começar, colocamos um suporte de contenção de plástico, tubos de vácuo com rolha de borracha, e uma agulha pontiaguda dupla, e lupa de óculos em uma superfície estéril. Em seguida, coloque um rato no suporte de contenção de plástico.
As patas dianteiras e traseiras do mouse devem estar em uma posição confortável. Para obter a amostra de sangue, lave a cauda com água morna de 20 a 30 graus Celsius, limpe a cauda com 70% de etanol de bolas de algodão saturadas para expandir a veia. Selecione a veia da cauda direita ou esquerda para amostragem de sangue.
Segure a porção inferior da cauda suavemente e mantenha a cauda reta durante a coleta da amostra de sangue. Use a lupa dos óculos para melhorar a visualização para facilitar a perfuração da veia da cauda. Insira a ponta da agulha borboleta de 22 bitolas em uma das veias laterais da cauda em torno de meio distal da ponta da cauda em ângulo de aproximadamente 10 graus, movendo-se em direção à base da cauda para múltiplas amostras.
Colete sangue no tubo de coleta de vácuo inserindo a extremidade de borracha da agulha borboleta no tubo de coleta de sangue de vácuo. A cauda dos camundongos pode ser usada para várias coletas de sangue, quantas vezes for necessário, de acordo com o protocolo aprovado. Nem sempre é fácil obter volume sanguíneo suficiente da fina e baixa veia da cauda de fluxo sanguíneo dos camundongos com o método tradicional.
Nosso método é simples e eficiente e pode ser usado para obter volume sanguíneo adequado repetidamente em camundongos. Relata-se que até 10% do volume sanguíneo total pode ser removido com segurança de um animal saudável em intervalos de duas semanas, de modo que cerca de 175 microliters amostra de sangue de camundongos foram coletados cada vez de acordo com os princípios éticos. Segundo, é vital estender a cauda para evitar seu movimento no processo de amostragem de sangue.
Para evitar a coagulação sanguínea na agulha, outra posição de punção deve ser selecionada se o sangue parar de fluir ao longo de 15 segundos. A coleta de sangue bem sucedida foi definida como obtenção de 175 microliters de sangue cada vez. Os tempos de perfuração máxima foram definidos para três testes.
Se o volume sanguíneo total foi menor que 175 microliters após a terceira punção, foi definido como uma coleta de sangue falhada. Quando for coletado o volume amostral adequado, retire a agulha da veia e aplique brevemente pressão no local de inserção para parar o sangramento. Para coletar plasma, use tubos que contenham EDTA, um anticoagulante, inverta suavemente o tubo várias vezes para misturar anticoagulante com o sangue e coloque as amostras no gelo verticalmente.
Gire tubos inteiros de coleta de amostras de sangue na centrífuga refrigerada por 10 minutos. Extrair o plasma, tomando cuidado para não perturbar as camadas de glóbulos vermelhos e brancos. Para coletar serina, use tubos sem anticoagulante.
Ambos os tipos de amostras podem ser usadas imediatamente ou armazenadas a menos de 80 graus Celsius por até um ano. Este estudo teve como objetivo investigar a superioridade da coleta repetida de amostras de sangue da veia da cauda de camundongos através do sistema de coleta de sangue a vácuo e da lupa de óculos. Grupo experimental em comparação com o método convencional de amostragem de sangue.
O grupo convencional, por iniciantes e especialistas, respectivamente, coletou volume sanguíneo e duração amostral semelhante entre dois grupos para especialistas, porém, o aumento do volume sanguíneo coletado e a menor duração amostral foram observados em grupo experimental em comparação com o grupo convencional para iniciantes. A maior taxa de sucesso também foi observada no grupo experimental em comparação com o grupo convencional para iniciantes. Este método de amostragem de sangue é fácil de dominar e tem uma alta taxa de sucesso.
O número de punções falhas poderia ser reduzido a um comparado ao uso do método tradicional. Além disso, este procedimento só causa lesões mínimas aos camundongos, é apenas a fita traseira dos camundongos sem a necessidade de anestésicos, que a influência da resposta ao estresse em anestésicos na amostra de sangue poderia ser evitada.
