Este método pode ajudar a responder perguntas sobre o estado efetivo ou motivacional dos animais em diferentes condições de dor. É um passo importante para melhorar a tradução da pesquisa pré-clínica. A principal vantagem dessa técnica é que ela é relativamente rápida e fácil de executar, mas ainda avalia motivações complexas que influenciam o comportamento relacionado à dor.
Comece construindo as paredes laterais, piso e teto da câmara um usando um acrílico branco opaco de três milímetros de espessura. Para a parede frontal, use um acrílico de três milímetros de espessura. Conecte a tampa da câmara um com uma dobradiça para que os ratos possam ser facilmente colocados e recuperados da câmara.
Em seguida, conecte a luz autoadesiva emitindo fita diodo na superfície interna da tampa para fornecer iluminação de cerca de 4.800 lux. Deslize uma folha de acrílico opaca para dentro e fora de posição para fechar a câmara um do resto do dispositivo MCA. Em seguida, construa uma câmara sem luz de 270 milímetros de comprimento, a câmara de teste MCA, usando acrílico vermelho escuro translúcido em todos os lados com uma tampa articulada em cima.
Em seguida, coloque uma grade 13 x 31 com dois milímetros de orifícios no chão da câmara através do qual uma matriz de sondas sem cortes com pontas de diâmetro de 0,5 milímetros pode se projetar. Ajuste a altura das sondas colocando folhas de acrílico adicionais sob a placa base da sonda. Usando esta abordagem, configure o dispositivo com alturas de zero, dois e cinco milímetros de sonda.
Como alternativa a pinos de mapa sem cortes ou materiais similares, use os arquivos da impressora 3D para imprimir o piso da câmara dois e a placa da sonda com um material lavável e biocompatível, como o plástico nylon 12. Finalmente, construa uma câmara escura três usando acrílico vermelho escuro translúcido em todos os lados com uma tampa articulada semelhante às câmaras um e dois. Coloque-o na extremidade oposta da câmara um para servir como uma área de fuga escurecida das sondas mecânicas na segunda câmara.
Um dia antes de agendar o teste da linha de base, aclimatar os ratos à unidade mca por 5 a 15 minutos com seus companheiros de gaiola para facilitar a exploração social de todo o dispositivo. Certifique-se de que os LEDs na câmara um estão desligados, a barreira entre as câmaras um e dois é mantida aberta e as sondas não estão salientes através do chão da câmara dois. Em seguida, configure uma câmera de vídeo capaz de gravar imagens de 1080 pixels em um tripé com uma visão lateral de todo o dispositivo MCA.
Ajuste o campo de visão de modo que o MCA preencha a imagem gravada. Uma vez que a gravação começa, segure uma placa de apagamento seco portátil na visão de campo da câmera para rotular o início do vídeo com informações de identificação sobre a execução de testes do animal. Para a primeira corrida, ajuste a altura da sonda como zero e transfira o mouse para ser testado de sua gaiola doméstica para a câmara um com a porta da barreira no lugar.
Inicie um temporizador visível nas imagens gravadas. Depois de 10 segundos, ligue os LEDs da câmara um. Depois que o rato estiver na câmara iluminada por 20 segundos, retire a barreira entre as câmaras um e dois.
Observe o animal por dois minutos e meça latências ou tempos de moradia com um cronômetro enquanto o teste estiver em andamento. Regissuça a latência da primeira entrada na câmara dois, latência para atravessar mais da metade da câmara dois, o tempo total de moradia na câmara dois, a latência para chegar à câmara três, e o tempo total de moradia em cada câmara dentro de dois minutos e convertê-los em proporções. Uma vez que o teste esteja completo, devolva o mouse para sua gaiola doméstica.
Limpe as câmaras mca com 70% de etanol e deixe secar completamente. Depois de executar todos os ratos na coorte com a altura da sonda definida como zero, insira uma folha de três milímetros de acrílico sob a placa base da sonda mecânica e repita a corrida com uma altura da sonda de dois milímetros. Depois de rodar todos os ratos com a altura da sonda definida para dois milímetros, insira outra folha de três milímetros de acrílico sob a placa base da sonda e repita a corrida com uma altura da sonda de cinco milímetros.
Realize uma limpeza final com um desinfetante no final da sessão de testes. No modelo completo de dor inflamatória induzida por adjuvante de Freund, uma injeção salina não muda a latência de fuga em comparação com a linha de base. Camundongos injetados com o adjuvante mostraram um aumento significativo na latência de fuga quatro dias após a injeção, mas apenas quando a altura da sonda foi elevada para cinco milímetros.
Esse aumento da latência não foi visto em camundongos que receberam carprofeno 90 minutos antes do início dos testes. O modelo de lesão nervosa poupada de dor neuropática aumentou significativamente a latência para escapar versus linha de base quando a altura da sonda foi definida para cinco milímetros. Esse aumento foi evitado pela administração da buprenorfina analgésico opioide 90 minutos antes do teste.
O aumento da latência de fuga também foi observado em camundongos que não foram submetidos a uma rodada de base de testes de MCA antes da lesão nervosa. A latência de fuga aumentada em camundongos com lesões nervosas poupadas a cinco milímetros foi evitada por gabapentina administrada 90 minutos antes do teste. No modelo de fratura ou fundição, a latência para escapar da câmara um aumentou proporcionalmente à altura da sonda antes da lesão.
Após a lesão, a latência permaneceu inalterada em zero milímetros, mas aumentou significativamente na altura da sonda de dois milímetros e cinco milímetros para os machos e a altura da sonda de cinco milímetros para as fêmeas quando comparada à linha de base. A coisa mais importante a ser lembrada ao tentar este procedimento é garantir que todos os ratos estejam habituados ao dispositivo MCA, e manter a randomização e a cegueira adequadas durante todo o estudo. Este método pode ser usado juntamente com outras medidas de sensibilidade à dor, incluindo von Frey ou preferência de lugar condicional.
