Este protocolo nos dá uma melhor compreensão do que os peixes querem, olhando para as escolhas que eles fazem em relação às preferências de habitat, o que é fundamental para o seu bem-estar. Este protocolo pode ser facilmente adaptado para olhar para uma variedade de diferentes fatores ambientais, incluindo substrato de cascalho versus areia, plantas vivas versus plásticas, ou mesmo em diferentes espécies aquáticas. Para configurar um aparelho de preferência, utilize um tanque experimental feito de plástico branco opaco, dividido em quatro zonas com paredes feitas de acrílico, fixadas no lugar com selante de silicone.
Coloque os materiais de enriquecimento apropriados em cada zona de acordo com os parâmetros específicos de habitat a serem testados. Por exemplo, incluem substratos arenosos versus rochosos, plantas artificiais versus abrigos, ou fluxo de água versus plantas artificiais. Se o fluxo de água for usado como parâmetro de interesse, coloque pequenas bombas para fornecer jatos de água no tanque e coloque as bombas em uma velocidade específica, de modo que forneçam um fluxo constante e direcionado de água com base na ecologia e história de vida das espécies de interesse.
No meio do tanque experimental, tenha uma Arena Central onde a comida será entregue. O acesso à Arena Central de cada zona deve ser através de uma pequena abertura nas paredes de separação que é grande o suficiente, para as espécies de interesse, para se mover entre as zonas sem obstáculos, mas pequena o suficiente para reduzir quaisquer pistas visuais que o peixe possa experimentar de outras zonas. Coloque um biofiltro e um aquecedor em cada canto do tanque fora da área experimental, para não perturbar o fluxo de água e garantir uma temperatura constante da água em todas as zonas.
Configure quaisquer tanques experimentais adicionais como ditam o espaço, garantindo que todos os tanques de réplica tenham condições uniformes. Coloque câmeras em tripés, diretamente acima de cada tanque experimental, para que todas as zonas sejam visíveis. Depois de confirmar que os cartões de memória têm espaço suficiente para gravação, coloque a iluminação da sala em um ciclo gradual de 12 horas, claro/escuro, para simular o nascer e o pôr do sol.
E definir a temperatura da água para 25, mais ou menos um grau Celsius. Mantenha os peixes em tanques domésticos quando eles não estão sendo testados. No dia do experimento, use duas redes para capturar rapidamente todos os peixes de teste de seus tanques domésticos, e colocá-los na Arena Central do tanque experimental dentro de 30 segundos de captura.
Nos dias um a quatro, os peixes passarão tempo aclimatando e explorando as diferentes zonas. Não colete dados sobre esses dias. Durante a aclimatação, realize testes regulares de qualidade da água, substituindo a água se algum problema for detectado.
Para alimentar os peixes, use um anel de alimento flutuante, preso à parede da Arena Central na superfície da água, para entregar alimentos de peixes em flocos aos peixes. Após 30 minutos de acesso ad libitum, use uma rede de mergulho para remover os restos de alimentos do tanque. Nos dias cinco a sete, ligue as câmeras e regise os comportamentos dos peixes por duas horas após cada alimentação programada de manhã e tarde.
No oitavo dia, use a rede de mergulho para transferir todos os peixes de volta para seus tanques domésticos. Dependendo de quanta água está disponível, substitua pelo menos um terço da água, no tanque experimental, por água fresca para reduzir quaisquer efeitos dos hormônios do estresse nos peixes e subsequentes réplicas. Em seguida, configure os tanques experimentais de acordo com o cronograma de rotação da zona para essa semana, e inicie o processo de teste com um novo lote de peixes.
No final de cada dia de gravação, baixe os vídeos para um computador. E use o software de vídeo para contar manualmente o número de peixes em cada zona, em intervalos de cinco minutos, em cada período de gravação de duas horas. Para analisar as preferências do habitat, calcule o número médio de peixes por zona para cada tanque de réplica.
Para obter uma pontuação de preferência para o uso da estrutura, calcule o índice de preferência de Jacobs usando a fórmula conforme indicado. Considere um peixe ter entrado em uma zona, quando todo o corpo do peixe atravessa a abertura entre as zonas. Para determinar se há alguma alteração na taxa em que o peixe alterna entre as zonas, durante um período de observação, calcule o número de vezes que um peixe entra em cada zona a partir da Arena Central, dividido pelo número total de peixes no primeiro e último cinco minutos de cada período de observação.
E calcule uma taxa de partida e uma taxa média de acabamento para cada tanque de réplica. Utilizando software estatístico, realize análises estatísticas relevantes, como um ANOVA unidirecional, com um índice de preferência como variável dependente e a zona como variável preditor, e um teste t emparelhado na taxa média de partida e acabamento para cada tanque. Para comparar cada zona com a outra, aplique o teste pós-hoc de comparação múltipla de Tukey.
Neste experimento representativo, o zebrafish demonstrou a maior preferência pela zona enriquecida e de fluxo, e evitou as zonas Flow Only and Plain, passando mais tempo na Arena Central. Além disso, os zebrafish se moviam entre as diferentes zonas de habitat com mais frequência no início do período de observação do que no final. É fundamental que condições uniformes, como ruído externo, ou movimento, química da água ou níveis de luz sejam mantidos em tanques de replicação.
O teste de preferência se estende à tentativa de entender como diferentes aspectos do enriquecimento ambiental influenciam as decisões de um indivíduo. Mas também é útil para estudos comparativos de enriquecimento ambiental.
