Este protocolo nos da una mejor comprensión de lo que los peces quieren, al examinar las decisiones que toman con respecto a las preferencias de hábitat, que es fundamental para su bienestar. Este protocolo se puede adaptar fácilmente para examinar una variedad de factores ambientales diferentes, incluyendo grava versus sustrato arenoso, plantas vivas versus plásticas, o incluso a través de diferentes especies acuáticas. Para configurar un aparato de preferencia, utilice un tanque experimental de plástico blanco opaco, dividido en cuatro zonas con paredes hechas de acrílico, fijadas en su lugar con sellador de silicona.
Coloque los materiales de enriquecimiento apropiados en cada zona de acuerdo con los parámetros de hábitat específicos a probar. Por ejemplo, incluyen sustratos arenosos frente a rocosos, plantas artificiales frente a refugios, o flujo de agua frente a plantas artificiales. Si el flujo de agua se va a utilizar como parámetro de interés, coloque pequeñas bombas para suministrar chorros de agua en el tanque y establecer las bombas a una velocidad específica, de modo que proporcionen un flujo constante y dirigido de agua basado en la ecología de las especies de interés y la historia de la vida.
En medio del tanque experimental, tener una Arena Central donde se entregará la comida. El acceso a la Arena Central desde cada zona debe ser a través de una pequeña abertura en los muros de separación que es lo suficientemente grande, para las especies de interés, para moverse entre las zonas sin obstáculos, pero lo suficientemente pequeña como para reducir cualquier señal visual que el pez pueda experimentar de otras zonas. Coloque un biofiltro y un calentador en cada esquina del tanque fuera del área experimental, para no perturbar el flujo de agua y para asegurar una temperatura constante del agua en todas las zonas.
Configura cualquier tanque experimental adicional como dicta el espacio, asegurando que todos los tanques replicados tengan condiciones uniformes. Coloque las cámaras en los trípodes, directamente encima de cada tanque experimental, para que todas las zonas sean visibles. Después de confirmar que las tarjetas de memoria tienen suficiente espacio para la grabación, ajuste la iluminación de la habitación en un ciclo gradual de 12 horas, claro/oscuro, para simular el amanecer y el atardecer.
Y ajuste la temperatura del agua a 25, más o menos un grado Celsius. Mantenga los peces en tanques caseros cuando no se estén probando. El día del experimento, usa dos redes para capturar rápidamente todos los peces de prueba de sus tanques de origen, y colóquelos en la Arena Central del tanque experimental dentro de los 30 segundos de la captura.
En los días uno a cuatro, los peces pasarán tiempo aclimatándose y explorando las diferentes zonas. No recopile datos en estos días. Durante la aclimatación, realice pruebas regulares de calidad del agua, reemplazando el agua si se detecta algún problema.
Para alimentar a los peces, utilice un anillo de comida flotante, unido a la pared de la Arena Central en la superficie del agua, para entregar alimentos de pescado escamas a los peces. Después de 30 minutos de acceso ad libitum, utilice una red de inmersión para eliminar los restos de comida del tanque. En los días cinco a siete, encienda las cámaras y grabe los comportamientos de los peces durante dos horas después de cada alimentación programada por la mañana y la tarde.
El día ocho, usa la red de inmersión para transferir todos los peces a sus tanques de origen. Dependiendo de la cantidad de agua de sumidero disponible, reemplace al menos un tercio del agua, en el tanque experimental, con agua de sumidero fresco para reducir los efectos de las hormonas del estrés en los peces y las repeticiones posteriores. A continuación, configure los tanques experimentales de acuerdo con el calendario de rotación de zona para esa semana, y comience el proceso de prueba con un nuevo lote de peces.
Al final de cada día de grabación, descargue los vídeos en un ordenador. Y utilice software de vídeo para contar manualmente el número de peces en cada zona, a intervalos de cinco minutos, en cada período de grabación de dos horas. Para analizar las preferencias de hábitat, calcule el número medio de peces por zona para cada tanque de réplica.
Para obtener una puntuación de preferencia para el uso de la estructura, calcule el índice de preferencias de Jacobs utilizando la fórmula como se indica. Considere que un pez ha entrado en una zona, cuando todo el cuerpo del pez cruza a través de la abertura entre las zonas. Para determinar si hay algún cambio en la velocidad a la que los peces cambian entre zonas, durante un período de observación, calcular el número de veces que un pez entra en cada zona desde la Arena Central, dividido por el número total de peces en el primer y último cinco minutos de cada período de observación.
Y calcule una tasa de interruptor media de arranque y de acabado para cada tanque de réplica. Utilizando software estadístico, realice un análisis estadístico relevante, como un ANOVA unidireccional, con un índice de preferencia como la variable dependiente y la zona como variable predictora, y una prueba t emparejada en la velocidad de conmutación media de inicio y acabado para cada tanque. Para comparar cada zona entre sí, aplique la prueba post-hoc de comparación múltiple de Tukey.
En este experimento representativo, el pez cebra demostró la mayor preferencia por la zona Enriquecido y Flujo, y evitó las zonas Flow Only y Plain, pasando más tiempo en la Arena Central. Además, el pez cebra se movía entre las diferentes zonas del hábitat con más frecuencia al comienzo del período de observación que al final. Es fundamental que se mantengan condiciones uniformes, como ruido externo, o movimiento, química del agua o niveles de luz en todos los tanques de réplica.
Las pruebas de preferencias se extienden a tratar de entender cómo los diferentes aspectos del enriquecimiento ambiental influyen en las decisiones de un individuo. Pero también es útil para estudios comparativos de enriquecimiento ambiental.
