Questo protocollo ci offre una migliore comprensione di ciò che i pesci vogliono, esaminando le scelte che fanno riguardo alle preferenze dell'habitat, che è fondamentale per il loro benessere. Questo protocollo può essere facilmente adattato per esaminare una varietà di diversi fattori ambientali, tra cui ghiaia contro substrato sabbioso, piante vive contro plastiche o persino attraverso diverse specie acquatiche. Per allestire un apparato di preferenza, utilizzare un serbatoio sperimentale in plastica bianca opaca, diviso in quattro zone con pareti in acrilico, fissate in posizione con sigillante siliconico.
Inserire i materiali di arricchimento appropriati in ciascuna zona in base ai parametri specifici dell'habitat da testare. Ad esempio, includere substrati sabbiosi rispetto a quelli rocciosi, piante artificiali contro rifugi o flusso d'acqua rispetto alle piante artificiali. Se il flusso d'acqua deve essere utilizzato come parametro di interesse, posizionare piccole pompe per fornire getti d'acqua nel serbatoio e impostare le pompe a una velocità specifica, in modo che forniscano un flusso d'acqua costante e diretto basato sull'ecologia e sulla storia della vita delle specie di interesse.
Nel mezzo del serbatoio sperimentale, avere un'Arena Centrale dove verrà consegnato il cibo. L'accesso all'Arena Centrale da ogni zona dovrebbe essere attraverso una piccola apertura nelle pareti di separazione che è abbastanza grande, per le specie di interesse, da spostarsi tra le zone senza restrizioni, ma abbastanza piccola da ridurre eventuali segnali visivi che il pesce potrebbe sperimentare da altre zone. Posizionare un biofiltro e un riscaldatore in ogni angolo del serbatoio al di fuori dell'area sperimentale, in modo da non disturbare il flusso d'acqua e garantire una temperatura costante dell'acqua in tutte le zone.
Impostare eventuali serbatoi sperimentali aggiuntivi come vuole lo spazio, assicurando che tutti i serbatoi replicati abbiano condizioni uniformi. Posizionare le telecamere sui treodi, direttamente sopra ogni serbatoio sperimentale, in modo che tutte le zone siano visibili. Dopo aver confermato che le schede di memoria hanno abbastanza spazio per la registrazione, impostare l'illuminazione della stanza su un ciclo graduale di 12 ore, chiaro / scuro, per simulare l'alba e il tramonto.
E impostare la temperatura dell'acqua su 25, più o meno un grado Celsius. Tenere il pesce nelle vasche di casa quando non sono in fase di test. Il giorno dell'esperimento, usa due reti per catturare rapidamente tutti i pesci di prova dai loro serbatoi di casa e posizionarli nell'Arena Centrale del serbatoio sperimentale entro 30 secondi dalla cattura.
Nei giorni da uno a quattro, il pesce passerà del tempo ad acclimatarsi ed esplorare le diverse zone. Non raccogliere dati in questi giorni. Durante l'acclimatazione, condurre regolari test di qualità dell'acqua, sostituendo l'acqua in caso di problemi rilevati.
Per nutrire il pesce, usa un anello alimentare galleggiante, attaccato al muro dell'Arena Centrale sulla superficie dell'acqua, per consegnare cibo per pesci in scaglie al pesce. Dopo 30 minuti di accesso ad libitum, utilizzare una rete di immersione per rimuovere il cibo rimasto dal serbatoio. Nei giorni da cinque a sette, accendi le telecamere e registra i comportamenti dei pesci per due ore dopo ogni alimentazione programmata mattutina e pomeridiana.
L'ottavo giorno, usa la rete da immersione per trasferire tutti i pesci nelle loro vasche di casa. A seconda di quanta acqua di ventosa è disponibile, sostituire almeno un terzo dell'acqua, nel serbatoio sperimentale, con acqua di ventosa fresca per ridurre eventuali effetti degli ormoni dello stress sul pesce e successive repliche. Quindi, impostare i serbatoi sperimentali in base al programma di rotazione della zona per quella settimana e iniziare il processo di test con un nuovo lotto di pesce.
Alla fine di ogni giornata di registrazione, scarica i video su un computer. E utilizzare il software video per contare manualmente il numero di pesci in ogni zona, a intervalli di cinque minuti, in ogni periodo di registrazione di due ore. Per analizzare le preferenze dell'habitat, calcolare il numero medio di pesci per zona per ogni serbatoio replicato.
Per ottenere un punteggio di preferenza per l'uso della struttura, calcolare l'indice delle preferenze di Jacobs utilizzando la formula come indicato. Considera un pesce entrato in una zona, quando tutto il corpo del pesce attraversa l'apertura tra le zone. Per determinare se vi sono cambiamenti nella velocità con cui il pesce passa da una zona all'altra, durante un periodo di osservazione, calcolare il numero di volte in cui un pesce entra in ogni zona dall'Arena Centrale, diviso per il numero totale di pesci nel primo e nell'ultimo cinque minuti di ogni periodo di osservazione.
E calcola una velocità di commutazione media iniziale e di finitura per ogni serbatoio replicato. Utilizzando un software statistico, condurre analisi statistiche rilevanti, come un ANOVA uni-way, con un indice di preferenza come variabile dipendente e la zona come variabile predittore, e un test t accoppiato sulla velocità di commutazione media iniziale e finale per ogni serbatoio. Per confrontare ogni zona tra loro, applicare il test post-hoc di confronto multiplo di Tukey.
In questo esperimento rappresentativo, il pesce zebra ha dimostrato la più alta preferenza per la zona arricchita e di flusso, ed ha evitato le zone Flow Only e Plain, trascorrendo più tempo nell'Arena Centrale. Inoltre, il pesce zebra si è spostato tra le diverse zone dell'habitat più spesso all'inizio del periodo di osservazione che alla fine. È fondamentale che le condizioni uniformi, come il rumore esterno, o il movimento, la chimica dell'acqua o i livelli di luce siano mantenute attraverso i serbatoi di replica.
Il test delle preferenze si estende al tentativo di capire in che modo i diversi aspetti dell'arricchimento ambientale influenzano le decisioni di un individuo. Ma è utile anche per studi comparativi sull'arricchimento ambientale.
