Uma cultura de explanta de cauda 3D para estudar segmentação de vertebrados em zebrafish

Explantas de cauda de zebrafish 3D vamos explorar a transparência dos embriões de zebrafish em toda a sua extensão durante o desenvolvimento de somite e segmentação de vertebrados. Encha um tanque de acasalamento vazio com água do sistema de peixes. Limpe o filtro com água do sistema.

Levante as barreiras entre pares de acasalamento. Mova seletivamente o par de peixes para o reservatório de água doce. Colete embriões no coador através de transferências de água com um tanque vazio.

Enxágüe os embriões coletados com água do sistema de peixes e vire em uma placa de Petri. Ferramentas de dissecção de esmalte de etanol. Faça duas camadas de fitas em slides.

Corte os lados horizontais de câmaras profundas. Cortes completos da câmara com lados verticais. Tire a fita da superfície da câmara.

Despeje a mídia da cultura celular em um tubo. Misture cloreto de cálcio 2,8 mililitros de concentração final. Adicione solução antibiótica.

Mídia de dissecção de aliquot em um tubo separado. Elogie o soro bovino fetal para tornar a cultura tecidual meio. Embriões desarmados com agulhas.

Enxágüe os embriões em um prato de água doce e colete-os para explanagem. Estabilize o embrião com agulha e comece a desobrilá-lo. Corte os tecidos que sobraram.

Transfira as explantes para o deslizamento de cobertura. Achate o tecido e suge o excesso de mídia com pipeta. Coloque a mancha de cobertura no meio de crescimento contendo câmara de slides.

Coloque o tecido da explanta em uma limpeza de tecido. Aplique óleo de imersão ao objetivo. Monte a câmara de slides no microscópio.

Ajuste os canais laser para aquisição de imagens. Verifique os limites da camada z da amostra. Configuração de imagens de tempo e camadas z.

O sistema de explant 3D mantém a integração celular ao broto da cauda e o excesso de alongamento intactos como embriões inteiros. Também é possível parar o excesso de alongamento ativando quimicamente a superfície com colágeno tipo um. O sistema de explanações de cauda de zebrafish 3D nos permite explorar a transparência dos embriões de zebrafish, permitindo-nos tirar imagens de microscopia de alta resolução e quase objetivas.

Além disso, permite-nos desacoplar o excesso de alongamento da sinalização de morfógeno e também controlar as fontes de sinalização de morfógeno com métodos simples de dissecção.