Nosso protocolo fornece um método detalhado para uma indução confiável e classificação abrangente de dyskinesia induzida por levodopa em um modelo de rato da doença de Parkinson. A principal vantagem da nossa escala de classificação de dyskinesia é que ela permite quantificar tanto a intensidade de um dado movimento involuntário anormal quanto a quantidade de tempo gasto exibindo esse comportamento. Modelos animais confiáveis de dyskinesia induzida por levodopa são fundamentais para perceber o objetivo final de encontrar tratamentos eficazes para reduzir ou eliminar o efeito colateral em indivíduos com doença de Parkinson.
Inicie a preparação para o experimento pesando ratos semanalmente para calcular a quantidade de droga apropriada com base nas mudanças de peso. Forneça aos ratos guloseimas nutricionalmente completas e altamente palatáveis. No primeiro dia de tratamento L-DOPA, os ratos de transferência para habitação única fornecidos com o Comitê institucional de Cuidados e Uso de Animais aprovaram o enriquecimento.
E manter ratos na única carcaça durante todo o estudo para evitar interferências por pares nas avaliações comportamentais. Nos dias de classificação da dyskinesia, remova garrafas de água, racks de alimentos e o enriquecimento na gaiola para evitar interferências nas avaliações comportamentais, e coloque as gaiolas em um rack de arame de aço em um ângulo de aproximadamente 45 graus, em seguida, vire as etiquetas de identificação para cima. Antes da injeção L-DOPA, adicione o volume apropriado de soro fisiológico estéril à mistura L-DOPA pré-alumíniofilizada e benserazida no frasco âmbar e agite bem por 10 segundos.
Imediatamente após a preparação, encha o volume necessário da mistura L-DOPA-Benserazida para cada animal em seringas individuais montadas com uma agulha de calibre 26 e rotule cada seringa com uma identificação animal individual. Depois de trazer a primeira gaiola para o banco de injeção, remova o rato de sua gaiola para colocá-lo na superfície de injeção. Use a mão nondominante para conter a cabeça e os ombros do rato com a palma contra a superfície e esfolar a pele nas costas sobreopendo a escápula com o polegar e o dedo indicador.
Use a mão dominante para injetar o volume L-DOPA no espaço subcutâneo entre os dedos, mantendo a agulha paralela ao corpo para evitar a injeção intramuscular. Após a injeção, mova o rato para a gaiola. Em seguida, defina o temporizador por um a dois minutos e repita o procedimento injetando um rato a cada um a dois minutos até que todos os ratos sejam injetados.
No dia da classificação, posicione um temporizador próximo à gaiola para observar a intensidade de comportamento induzida por levodopa ou LID, enquanto estima a frequência de qualquer comportamento durante o período de classificação. Avalie a intensidade e a frequência dos movimentos de dystônica e hipercinética da discinese, incluindo o início inicial do comportamento do LID, o comportamento de pico e a fase de declínio no número desejado de pontos de tempo. Se usar intervalos de classificação de um minuto, defina um temporizador por um minuto para classificar o primeiro rato e continuar a classificação através de todos os ratos em intervalos de um minuto.
A classificação LID para comportamentos involuntários anormais nos ratos parkinsonianos foi categorizada para incluir intensidade e frequência dos comportamentos. Uma série de movimentos involuntários anormais, incluindo comportamentos tísônicos, hipercinéticos e estereotipados foram observados em ratos. A análise representativa fornece um exemplo dos dados apresentados como lid de dose máxima sobre todo o cronograma experimental e cronograma de dosagem.
A dose máxima LID foi definida como um momento em que a pontuação lid média do grupo foi a maior. Além disso, os dados de classificação LID foram examinados ao longo de cada curso diário de tempo de classificação em diferentes concentrações de L-DPOA com os grupos combinados e plotados como animais individuais. O tecido pós-morte de sujeitos avaliados comportamentalmente pode ser usado para explorar mecanismos moleculares associados a dyskinesias induzidas por levodopa, e o impacto das intervenções terapêuticas nesses mecanismos moleculares.
Modelos animais de dyskinesia induzida por levodopa têm sido úteis para elucidar vários mecanismos pensados para sustentar essa doença comportamental. Tal entendimento levou à avaliação pré-clínica e clínica de vários alvos.
