Evidências experimentais e clínicas mostram que a reperfusão da isquemia hepática pode aumentar a formação de focos metastáticos através da circulação de células cancerígenas e o crescimento da doença micrometastática. Este modelo de murina reprodutível permite o estudo relevante tanto do estabelecimento de metástases quanto do crescimento do tumor pré-existente dentro do fígado. Cirurgia hepática, sangramento e choque séptico estão todos associados à reperfusão da isquemia hepática e podem afetar o crescimento da doença metastática.
Essas técnicas permitem o estudo desse fenômeno em um esforço para melhor diagnosticar e prevenir o efeito prejudicial da reperfusão da isquemia no crescimento do tumor em um ambiente clínico. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do dedo em um rato C57 preto C57 de 8 a 12 semanas, desinfete a pele da parede abdominal exposta com um esfoliante povidone-iodo e use fórceps dentuças para levantar a pele. Usando um bisturi cirúrgico, faça uma incisão midline na pele e levante o músculo abdominal e o peritônio para facilitar a criação de uma incisão de linha média de três centímetros para expor o conteúdo abdominal.
Depois de colocar um hemosta em ambos os lados da incisão e sob o processo xifoide, puxe e tape a cauda para baixo para estender o abdômen e use um aplicador de ponta de algodão estéril de seis polegadas para separar e expor o baço do tecido de gordura pancreática. Em seguida, o vórtice da célula cancerosa suspende o interesse de dissociar qualquer aglomerado celular e carregar as células em uma seringa de insulina de 0,5 mililitro equipada com uma agulha de calibre 28. Injete lentamente e cuidadosamente 100 microliters de células na ponta do baço, colocando uma ponta de algodão adjacente ao lado da punção da agulha para absorver qualquer possível derramamento de tumor na cavidade peritoneal, adicionando pressão suave para estabilizar o baço durante a injeção.
Uma injeção bem sucedida será evidente por uma mudança na cor do fígado. Quando todas as células tiverem sido entregues, coloque um pedaço de gaze estéril encharcada de PBS sobre a área dissecada e coloque o mouse em uma almofada de aquecimento por 15 minutos para permitir que as células cancerosas circulem dentro do sistema. Para induzir uma isquemia e lesão de reperfusão, use duas pontas de algodão umedecidas para mover suavemente o intestino da cavidade para expor a veia portal e colocar o rato sob um microscópio dissecando.
Levante os lóbulos de fígado laterais medianos e esquerdos contra o diafragma. Coloque um pequeno cotonete úmido entre o lobo mediano e o lobo lateral direito para criar espaço suficiente para fixação e passe cuidadosamente uma fórceps dilatadora de vasos atrás da tríade portal e, usando as fórceps dilatadores do vaso, use um pedaço de 10 centímetros de sutura de polipropileno de 4-0 para passar por trás e levantar a tríade portal. Use um aplicador de grampo de micro-serrifina com uma fechadura para colocar um grampo microvascular nos lobos hepáticos esquerdo e mediano para ocluir todas as estruturas da tríade portal.
Quando observar o branqueamento, remova a sutura de polipropileno 4-0 e o cotonete de algodão pequeno e devolva cuidadosamente o intestino à cavidade abdominal. Cubra a parede abdominal com um novo pedaço de gaze encharcada de PBS e cubra a gaze com plástico para minimizar a perda evaporativa. Em seguida, coloque o mouse de volta na almofada de aquecimento por 60 minutos.
Durante todo o intervalo isquêmico, visualize o branqueamento pálido dos lobos medial, medial esquerdo e lateral para confirmar evidências da lesão da isquemia. No final do período de lesão, remova o grampo. Para realizar uma esplenectomia, levante cuidadosamente o baço com fórceps lisos e use um dispositivo de cauteria portátil para cauterizar os vasos sanguíneos esplênicos para evitar sangramento excessivo.
Transecte os vasos na seção cauterizada para remover o baço e use imediatamente suturas de polipropileno 4-0 para fechar as incisões musculares e cutâneas em um padrão de sutura de dupla camada. Em seguida, coloque o mouse de volta em sua gaiola doméstica com monitoramento até a recuperação completa. O estresse cirúrgico aumenta significativamente a quantidade de micrometastases pré-estabelecidas dentro do fígado.
Essa diferença é observada mesmo duas semanas após a reperfusão da isquemia em comparação com camundongos não-isquemínia. A reperfusão da isquemia hepática e a injeção de células tumorais podem ser afetadas pela temperatura ambiente e viabilidade celular, por isso tome cuidado para controlar essas variáveis. Esta técnica facilita o estudo dos efeitos do estresse cirúrgico e da lesão hepática no crescimento da doença metastática.
Isso ajudará os pesquisadores a entender melhor o fenômeno do crescimento tumoral induzido pela cirurgia.
