Esta configuração de aparelho de duas câmaras é usada para estudar a preferência de temperatura de insetos e pode ser modificada para estudar outras situações de preferência de escolha binária, como luz versus escura ou alta versus baixa umidade. As principais vantagens desta técnica são a configuração simples, a área espaçosa que permite que os insetos exibam sua natureza voadora ao escolher sua temperatura preferida e a fácil pontuação sem equipamentos externos. A parte mais difícil do protocolo é remover a violação de acrílico após o experimento.
Isso ocorre porque há uma grande chance de os insetos escaparem. Assim, é crucial para nós usar o dióxido de carbono para anestesiar os insetos. Demonstrando o procedimento estarão Kinga Stobierska e Lorna Glenn, ambas mestrandas do meu laboratório.
Para começar, prepare 2 gaiolas de mosquito vazias com aberturas de manga de 12 centímetros e certifique-se de que não haja buracos ou outros danos. Em seguida, usando um aspirador mecânico, transfira 30 insetos para uma gaiola separada para facilitar o manuseio e o descarte após o experimento. Ajuste as incubadoras para as temperaturas desejadas e deixe-as aquecer e estabilizar.
Demora aproximadamente 30 minutos para atingir uma temperatura na faixa de 25 a 30 graus Celsius. Em seguida, coloque uma gaiola de mosquito vazia em uma incubadora e alimente as mangas da gaiola através do orifício frontal da incubadora. Confirme a temperatura interna do ar da incubadora com uma sonda de temperatura.
Em seguida, coloque uma aba aberta preparada com fita adesiva sobre o orifício no tubo de acrílico. Arregace a manga saliente através do orifício em frente à primeira incubadora e prenda-a sobre uma extremidade do tubo acrílico com um elástico. Em seguida, coloque as incubadoras de frente uma para a outra e insira uma extremidade do tubo de acrílico na manga do segundo orifício da incubadora.
Certifique-se de que o diâmetro do tubo de acrílico é maior do que o orifício na frente das incubadoras, de modo que cubra completamente o orifício. Certifique-se de que o tubo de acrílico não esteja solto e pendurado entre as incubadoras. Se estiver, puxe as mangas da gaiola para remover o excesso de material entre a gaiola e o elástico.
Para colocar os mosquitos dentro, abra a aba da fita adesiva. Coloque um funil no orifício do tubo de acrílico e, em seguida, esvazie os insetos no tubo através do funil. Depois de esvaziar os insetos, remova o funil e cubra o orifício do tubo com uma aba de fita adesiva.
Deixe por 30 minutos para os insetos selecionarem a câmara preferida. No final do tempo de assentamento, observe visualmente e anote o número de insetos vistos na ponte tubular de acrílico. Em seguida, toque ou sopre todos os insetos na ponte para ambos os lados da incubadora ou liberando dióxido de carbono na ponte.
Em seguida, aperte e feche as mangas do tubo de acrílico em ambos os lados, prendendo-as rapidamente com um nó apertado. Em seguida, remova as gaiolas de ambas as incubadoras e conte visualmente os insetos em cada gaiola. Certifique-se de que os números das incubadoras e da ponte somem 30.
No presente estudo, a preferência de temperatura dos mosquitos e moscas da fruta foi determinada pelo modelo de duas câmaras. Os resultados não mostraram diferença significativa quando ambas as gaiolas foram mantidas a 27 graus Celsius, indicando a capacidade dos mosquitos de escolher livremente entre gaiolas exibindo seus comportamentos naturais. Por outro lado, quando as duas câmaras foram definidas em temperaturas diferentes, os mosquitos selecionaram consistentemente a temperatura ideal de 27 graus Celsius sobre 30 graus Celsius.
Da mesma forma, quando a configuração foi testada com Drosophila Melanogaster, outro modelo ectoderma as moscas da fruta evitou a câmara mais quente e preferiu sua temperatura ideal de 25 graus Celsius. Certifique-se de que a configuração esteja completamente selada, sem esconderijos e sem malha interrompendo a área de voo para que os insetos possam escolher livremente entre as 2 câmaras.
