Questa configurazione dell'apparato a due camere viene utilizzata per studiare la preferenza di temperatura degli insetti e può essere modificata per studiare altre situazioni di preferenza di scelta binaria come luce contro buio o alta o bassa umidità. I principali vantaggi di questa tecnica sono la semplice configurazione, l'ampia area che consente agli insetti di esibire la loro natura volante quando scelgono la loro temperatura preferita e un facile punteggio senza attrezzature esterne. La parte più difficile del protocollo è rimuovere la violazione acrilica dopo l'esperimento.
Questo perché c'è un'alta probabilità che gli insetti fuggano. Pertanto, è fondamentale per noi utilizzare l'anidride carbonica per anestetizzare gli insetti. A dimostrare la procedura saranno Kinga Stobierska e Lorna Glenn, entrambe studentesse del mio laboratorio.
Per iniziare, prepara 2 gabbie per zanzare vuote con aperture a maniche da 12 centimetri e assicurati che non ci siano buchi o altri danni. Quindi, utilizzando un aspiratore meccanico, trasferire 30 insetti in una gabbia separata per facilitare la manipolazione e lo smaltimento dopo l'esperimento. Impostare gli incubatori alle temperature desiderate e consentire loro di riscaldarsi e stabilizzarsi.
Ci vogliono circa 30 minuti per raggiungere una temperatura compresa tra 25 e 30 gradi Celsius. Quindi posizionare una gabbia antizanzara vuota in un'incubatrice e alimentare le maniche della gabbia attraverso il foro anteriore dell'incubatrice. Confermare la temperatura dell'aria interna dell'incubatore con una sonda di temperatura.
Quindi, posizionare un lembo apribile preparato con nastro adesivo sul foro nel tubo acrilico. Arrotolare la manica che sporge attraverso il foro davanti alla prima incubatrice e fissarla su un'estremità del tubo acrilico con un elastico. Quindi posizionare gli incubatori uno di fronte all'altro e inserire un'estremità del tubo acrilico nel manicotto del secondo foro dell'incubatore.
Assicurarsi che il diametro del tubo acrilico sia maggiore del foro nella parte anteriore degli incubatori in modo che copra completamente il foro. Assicurarsi che il tubo acrilico non sia allentato e penzolante tra gli incubatori. Se lo è, tirare i manicotti della gabbia per rimuovere il materiale in eccesso tra la gabbia e l'elastico.
Per mettere le zanzare all'interno, aprire il lembo del nastro adesivo. Posizionare un imbuto nel foro del tubo acrilico e quindi svuotare gli insetti nel tubo attraverso l'imbuto. Dopo aver svuotato gli insetti, rimuovere l'imbuto e coprire il foro del tubo con un lembo di nastro adesivo.
Lasciare agire per 30 minuti affinché gli insetti selezionino la camera preferita. Alla fine del tempo di assestamento, osservare visivamente e annotare il numero di insetti visti nel ponte del tubo acrilico. Quindi toccare o soffiare tutti gli insetti nel ponte su entrambi i lati dell'incubatore o rilasciando anidride carbonica nel ponte.
Quindi, pizzicare e chiudere le maniche dal tubo acrilico su entrambi i lati fissandole rapidamente con un nodo stretto. Quindi rimuovere le gabbie da entrambe le incubatrici e contare visivamente gli insetti in ciascuna gabbia. Assicurati che i numeri di entrambi gli incubatori e del ponte si sommano fino a 30.
Nel presente studio la preferenza di temperatura delle zanzare e dei moscerini della frutta è stata determinata utilizzando il modello a due camere. I risultati non hanno mostrato differenze significative quando entrambe le gabbie sono state mantenute a 27 gradi Celsius, indicando la capacità delle zanzare di scegliere liberamente tra le gabbie che mostrano i loro comportamenti naturali. Al contrario, quando le due camere sono state impostate a temperature diverse, le zanzare hanno costantemente selezionato la temperatura ottimale di 27 gradi Celsius su 30 gradi Celsius.
Allo stesso modo, quando la configurazione è stata testata con Drosophila Melanogaster, un altro modello di ectoderma, i moscerini della frutta hanno evitato la camera più calda e hanno preferito la loro temperatura ottimale di 25 gradi Celsius. Assicurati che la configurazione sia completamente sigillata senza spazi nascosti e senza reti che interrompono l'area di volo in modo che gli insetti possano scegliere liberamente tra le 2 camere.
