Эта двухкамерная аппаратная установка используется для изучения температурных предпочтений насекомых и может быть модифицирована для изучения других ситуаций предпочтения бинарного выбора, таких как свет против темноты или высокая или низкая влажность. Основными преимуществами этой техники являются простая настройка, просторная площадь, которая позволяет насекомым проявлять свою летающую природу при выборе предпочтительной температуры, и легкая оценка без внешнего оборудования. Самой сложной частью протокола является удаление акрилового бреши после эксперимента.
Это связано с тем, что существует высокая вероятность побега насекомых. Таким образом, для нас крайне важно использовать углекислый газ для обезболивания насекомых. Демонстрировать процедуру будут Кинга Стобирска и Лорна Гленн, оба магистранты из моей лаборатории.
Для начала подготовьте 2 пустые клетки для комаров с 12-сантиметровыми отверстиями рукавов и убедитесь, что нет отверстий или других повреждений. Затем с помощью механического аспиратора переведите 30 насекомых в отдельную клетку для облегчения обращения и утилизации после эксперимента. Установите инкубаторы на нужные температуры и дайте им нагреться и стабилизироваться.
Для достижения температуры в диапазоне от 25 до 30 градусов по Цельсию требуется примерно 30 минут. Затем поместите пустую клетку от комаров в инкубатор и подайте рукава клетки через переднее отверстие инкубатора. Подтвердите внутреннюю температуру воздуха инкубатора с помощью температурного зонда.
Затем поместите открывающуюся заслонку, подготовленную клейкой лентой, над отверстием в акриловой трубке. Засучите рукав, выступающий через отверстие перед первым инкубатором, и закрепите его над одним концом акриловой трубки эластичной лентой. Затем поместите инкубаторы лицом друг к другу и вставьте один конец акриловой трубки в рукав второго отверстия инкубатора.
Убедитесь, что диаметр акриловой трубки больше, чем отверстие в передней части инкубаторов, чтобы она полностью закрывала отверстие. Убедитесь, что акриловая трубка не свободна и не болтается между инкубаторами. Если это так, потяните за рукава клетки, чтобы удалить лишний материал между клеткой и резинкой.
Чтобы поместить комаров внутрь, откройте клапан клейкой ленты. Поместите воронку в отверстие акриловой трубки, а затем опорожните насекомых в трубку через воронку. После опорожнения насекомых снимите воронку и закройте отверстие трубки клапаном клейкой ленты.
Оставьте на 30 минут, чтобы насекомые выбрали предпочтительную камеру. В конце времени успокоения визуально наблюдайте и записывайте количество насекомых, замеченных в акриловом трубчатом мосту. Затем постучите или сдуйте всех насекомых в мосту по обе стороны инкубатора или выпустив углекислый газ в мост.
Далее зажмите и закройте рукава от акриловой трубки с обеих сторон, быстро скрепив их тугим узлом. Затем выньте клетки из обоих инкубаторов и визуально подсчитайте насекомых в каждой клетке. Убедитесь, что номера обоих инкубаторов и моста составляют до 30.
В настоящем исследовании температурные предпочтения комаров и плодовых мушек были определены с использованием двухкамерной модели. Результаты не показали существенной разницы, когда обе клетки поддерживались на уровне 27 градусов по Цельсию, что указывает на способность комаров свободно выбирать между клетками, демонстрируя свое естественное поведение. И наоборот, когда две камеры были установлены при разных температурах, комары последовательно выбирали оптимальную температуру 27 градусов по Цельсию над 30 градусами Цельсия.
Аналогичным образом, когда установка была протестирована с Drosophila Melanogaster, другой эктодермной моделью плодовых мушек избегала более теплой камеры и предпочитала их оптимальную температуру 25 градусов по Цельсию. Убедитесь, что установка полностью герметизирована без укрытий и сетки, нарушающей зону полета, чтобы насекомые могли свободно выбирать между 2 камерами.
