Geração de Ratos Hipoparatireoides via Paratireoidectomia Assistida por Nanoparticle-Carbono

O objetivo geral deste protocolo é gerar um modelo de hipoparatireoidismo adquirido em ratos que seja fácil de estabelecer, de caráter estável e inofensivo para as glândulas tireoides. A principal vantagem deste modelo é a remoção precisa das glândulas paratireoides com o auxílio de nanopartículas de carbono. Esperamos que o modelo possa ajudar a resolver algumas questões no campo do hipoparatireoidismo.

Por exemplo, o uso pré-operatório de cálcio e vitamina D para reduzir o risco de hipocalcemia pós-tireoidectomia. Este método pode fornecer informações sobre como a remodelação óssea é afetada pelos análogos do PTH e como os análogos do PTH afetam o corpo em uso a longo prazo. Aqueles que realizam esta técnica pela primeira vez podem achar difícil micro-manipular sob o microscópio estéreo.

Algumas práticas sob microscópio estéreo podem ser úteis. Para começar, coloque o rato anestesiado em decúbito dorsal e raspe a pele da região ventral do pescoço. Após fazer uma incisão conforme descrito no manuscrito, localize os lóbulos da glândula tireoide.

Usando uma seringa de 10 microlitros equipada com uma agulha chanfrada de calibre 30, injete um microlitro da suspensão de nanopartículas de carbono na porção mesial da membrana da glândula tireoide. Após cinco minutos, irrigar a região com soro fisiológico para limpar qualquer suspensão extra. Certifique-se de que as glândulas tireoides ficaram pretas e observe a glândula paratireoide não manchada.

Cortar as glândulas paratireoides não coradas usando uma pinça e tesoura de microcirurgia e, em seguida, fechar a incisão com uma sutura de colchão horizontal interrompida. Após a cirurgia, coloque os ratos em uma manta elétrica termostática a 37 graus Celsius para manter sua temperatura corporal. Após sete dias, retire 10 microlitros de sangue usando a veia da cauda.

Medir o cálcio sérico, fósforo inorgânico sérico e hormônio paratireoidiano sérico usando kits comerciais. Os ratos paratireoidectomia apresentaram hipocalcemia e hiperfosfatemia estáveis durante o período de observação de quatro semanas. O paratormônio sérico não foi detectado nos ratos paratireoidectomia sete dias após a operação.

Os níveis séricos de ureia e creatinina foram comparáveis entre os grupos sham e paratireoidectomia após sete dias de pós-operatório. Níveis urinários reduzidos de íons cálcio e fosfato inorgânico foram observados duas semanas após a operação. Não foram observadas diferenças significativas no peso corporal entre os grupos paratireoidectomia e sham ao longo de 28 dias.

O C-telopeptídeo sérico diminuiu significativamente em ratos paratireoidectomia. Não houve diferenças significativas nos níveis séricos de osteocalcina. No entanto, a injeção em suspensão de nanopartículas é a coisa mais importante e uma injeção bem-sucedida é fundamental para a identificação e remoção atual das glândulas paratireoides.

Outros métodos incluem cirurgia guiada por fluorescência, injeção de toxina difteria em camundongos transgênicos PTHcre-iDTR e paratireoidectomia estéril, que poderia ajudar a responder a perguntas no campo do hipertireoidismo.