O método de padronização do citômetro de fluxo fornece uma abordagem viável para a acreditação mútua de resultados laboratoriais e garante a consistência dos resultados com projetos de pesquisa em vários centros. O método minimizar o consumo de tempo é fácil de executar, está equipado para automatizar, analisa o modelo e pode reduzir drasticamente a necessidade de análise de dados. Comece a criar uma nova configuração no software do citômetro A, a partir do laboratório de transferência, clicando no botão do citômetro e escolhendo as configurações de visualização.
Clique com o botão direito do mouse na pasta de configurações básicas na lista de configurações, escolha a nova pasta e renomeie-a. Em seguida, crie uma nova configuração clicando com o botão direito do mouse na configuração base e copiando-a. Clique com o botão direito do mouse na nova pasta e cole a configuração base antes de renomear a nova configuração, Transferência de método padronizado"Arraste o nome do parâmetro, como FETC da lista de parâmetros, para o detector apropriado 530/30, também edite parâmetros adicionais para a nova configuração.
Para padronizar o experimento no laboratório de transferência, execute uma verificação de desempenho usando essa configuração do citômetro A e rastreie as contas para verificar se o citômetro A está funcionando bem. Clique com o botão direito do mouse nas configurações do citômetro A na janela do navegador do software e crie uma planilha selecionando as configurações do aplicativo. Em seguida, use uma amostra não corada para ajustar o tubo multiplicador da foto, ou tensões PMT, da área de espalhamento para a frente, ou FSC, e da área de espalhamento lateral, ou SSC, e todos os parâmetros de fluorescência.
Salve as configurações do aplicativo clicando com o botão direito do mouse nas configurações do citômetro do experimento e selecionando as configurações do aplicativo. Para adicionar controles de compensação automaticamente, clique no botão experimento e selecione o menu de configuração de compensação antes de selecionar criar controles de compensação. Registre os dados de todas as contas de controle de compensação.
Uma vez feito, clique no experimento e selecione a configuração de compensação, calcule a compensação automaticamente, antes de registrar os dados para controles de coloração de célula única. use CD45 RAA APC para modificar o valor de compensação de R7-18 para 15%APC, use CD19 BB700 para modificar o valor de compensação de APC H7 para 14%BB700 e use CD8 R7-18 para modificar o valor de compensação de APC H7 para 60%R7-18. Depois de registrar os dados para as esferas CST, crie uma planilha global do modelo de valor alvo para as contas brilhantes CST, uma vez feitas, execute as amostras na matriz do citômetro de fluxo e colete 25.000 linfócitos.
Crie uma planilha global do modelo de análise para as amostras e salve o modelo experimental no citômetro A.Exporte o modelo experimental usando o CD-ROM. Para transferir o modelo experimental para o citômetro B no laboratório de teste, realize uma verificação de desempenho usando esferas CST para verificar se o citômetro B está funcionando bem. Importe o modelo experimental do citômetro A e crie um experimento para o citômetro B usando o modelo.
Usando o mesmo lote de grânulos CST ajustar as tensões de parâmetro fluorescente para cada canal de fluorescência para corresponder ao instrumento MFI anterior. Se necessário, ajuste a tensão do FSC usando a amostra não corada. Clique com o botão direito do mouse nas configurações do citômetro experimental e selecione as configurações do aplicativo para salvar as configurações do aplicativo.
Em seguida, modifique o valor de compensação de R7-18 para 15%APC usando CD45 RA APC. Use CD19 BB700 para modificar o valor de compensação de APC H7 para 24% BB700. E use CD8 R7-18 para modificar o valor de compensação do APC H7 para 60%R7-18.
Após a modificação do valor de compensação, execute as amostras no citômetro de fluxo B e colete 25.000 linfócitos. Em uma planilha global do modelo de valor alvo para a configuração e rastreamento do citômetro, ou esferas brilhantes CST, os gráficos de histograma de 10 canais de fluorescência foram obtidos, o valor alvo para cada parâmetro foi exibido mostrando a mediana dentro das portas do histograma. os gráficos de pontos da amostra, obtidos utilizando o citômetro A e B após a padronização do instrumento, demonstraram a consistência dos dados entre os diferentes instrumentos, utilizando um modelo de análise automática.
Nenhuma diferença significativa foi observada quando os resultados de seis amostras foram comparados em dois modelos de instrumentos diferentes. Os resultados de 15 subconjuntos linfoides obtidos de diferentes instrumentos utilizando o método padronizado adquiriram dados altamente comparáveis. O mesmo nome de configuração, a criação do modelo e a criação dos valores ecotech de contas de segurança em diferentes instrumentos são etapas críticas neste protocolo.
