Il metodo di standardizzazione del citometro a flusso fornisce un approccio fattibile per l'accreditamento reciproco dei risultati di laboratorio e garantisce la coerenza dei risultati con i progetti di ricerca in più centri. Il metodo minimizza il consumo di tempo è facile da eseguire, è attrezzato per automatizzare, analizzare il modello e può ridurre drasticamente la necessità di analisi dei dati. Iniziare a creare una nuova configurazione nel software del citometro A, dal laboratorio di trasferimento, facendo clic sul pulsante del citometro e scegliendo le configurazioni di visualizzazione.
Fare clic con il pulsante destro del mouse sulla cartella delle configurazioni di base nell'elenco di configurazione, scegliere la nuova cartella e rinominarla. Quindi, creare una nuova configurazione facendo clic con il pulsante destro del mouse sulla configurazione di base e copiandola. Fare clic con il pulsante destro del mouse sulla nuova cartella e incollare la configurazione di base prima di rinominare la nuova configurazione, Trasferimento metodo standardizzato"Trascinare il nome del parametro, ad esempio, FETC dall'elenco dei parametri, sul rilevatore appropriato 530/30, modificare anche parametri aggiuntivi per la nuova configurazione.
Per standardizzare l'esperimento nel laboratorio di trasferimento, eseguire un controllo delle prestazioni utilizzando questa configurazione del citometro A e tenere traccia delle perline per verificare che il citometro A funzioni correttamente. Fare clic con il pulsante destro del mouse sulle impostazioni del citometro A nella finestra del browser del software e creare un foglio di lavoro selezionando le impostazioni dell'applicazione. Quindi utilizzare un campione non colorato per regolare il tubo moltiplicatore fotografico, o le tensioni PMT, dell'area di diffusione diretta, o FSC, e dell'area di diffusione laterale, o SSC, e tutti i parametri di fluorescenza.
Salvare le impostazioni dell'applicazione facendo clic con il pulsante destro del mouse sulle impostazioni del citometro dell'esperimento e selezionando le impostazioni dell'applicazione. Per aggiungere automaticamente i controlli di compensazione, fai clic sul pulsante dell'esperimento e seleziona il menu di impostazione della retribuzione, prima di selezionare Crea controlli di retribuzione. Registrare i dati per tutte le perle di controllo della retribuzione.
Una volta fatto, fai clic sull'esperimento e seleziona l'impostazione della compensazione, calcola automaticamente la compensazione, prima di registrare i dati per i controlli colorati a cella singola. utilizzare CD45 RAA APC per modificare il valore di compensazione di R7-18 al 15%APC, utilizzare CD19 BB700 per modificare il valore di compensazione di APC H7 al 14%BB700 e utilizzare CD8 R7-18 per modificare il valore di compensazione di APC H7 al 60%R7-18. Dopo aver registrato i dati per le perle CST, creare un foglio di lavoro globale del modello di valore target per le perle luminose CST, una volta fatto, eseguire i campioni sull'array di citometri a flusso e raccogliere 25.000 linfociti.
Creare un foglio di lavoro globale del modello di analisi per i campioni e salvare il modello sperimentale sul citometro A.Esportare il modello sperimentale utilizzando il CD-ROM. Per trasferire il modello sperimentale al citometro B nel laboratorio di prova, eseguire un controllo delle prestazioni utilizzando perline CST per verificare che il citometro B funzioni bene. Importare il modello sperimentale dal citometro A e creare un esperimento per il citometro B utilizzando il modello.
Utilizzando lo stesso lotto di sfere CST regolare le tensioni dei parametri fluorescenti per ciascun canale di fluorescenza in modo che corrispondano allo strumento MFI precedente. Se necessario, regolare la tensione FSC utilizzando il campione non macchiato. Fare clic con il pulsante destro del mouse sulle impostazioni del citometro sperimentale e selezionare le impostazioni dell'applicazione per salvare le impostazioni dell'applicazione.
Quindi, modificare il valore di compensazione di R7-18 al 15% APC utilizzando CD45 RA APC. Utilizzare CD19 BB700 per modificare il valore di compensazione di APC H7 al 24%BB700. E utilizzare CD8 R7-18 per modificare il valore di compensazione di APC H7 al 60%R7-18.
Dopo la modifica del valore di compensazione, eseguire i campioni sul citometro a flusso B e raccogliere 25.000 linfociti. In un foglio di lavoro globale del modello di valore target per l'impostazione e il monitoraggio del citometro, o perline luminose CST, sono stati ottenuti i grafici dell'istogramma di 10 canali di fluorescenza, il valore target per ciascun parametro è stato visualizzato mostrando la mediana all'interno delle porte dell'istogramma. i grafici a punti del campione ottenuto utilizzando il citometro A e B dopo la standardizzazione dello strumento, hanno dimostrato la coerenza dei dati tra diversi strumenti utilizzando un modello di analisi automatico.
Nessuna differenza significativa è stata osservata quando i risultati di sei campioni sono stati confrontati tra due diversi modelli di strumenti. I risultati di 15 sottogruppi linfoidi ottenuti da diversi strumenti utilizzando il metodo standardizzato hanno acquisito dati altamente comparabili. Lo stesso nome di configurazione, la creazione del modello e la creazione dei valori ecotech delle perline di sicurezza in diversi strumenti sono passaggi critici in questo protocollo.
