El método de estandarización del citómetro de flujo proporciona un enfoque factible para la acreditación mutua de los resultados de laboratorio y garantiza la coherencia de los resultados con los proyectos de investigación en múltiples centros. El método de minimizar el consumo de tiempo es fácil de ejecutar, está equipado para automatizar, analiza la plantilla y puede reducir drásticamente el requisito de análisis de datos. Comience a crear una nueva configuración en el software del citómetro A, desde el laboratorio de transferencia, haciendo clic en el botón del citómetro y eligiendo ver configuraciones.
Haga clic con el botón derecho en la carpeta de configuraciones base en la lista de configuración, elija nueva carpeta y cámbiele el nombre. A continuación, cree una nueva configuración haciendo clic con el botón derecho en la configuración base y copiándola. Haga clic derecho en la nueva carpeta y pegue la configuración base antes de cambiar el nombre de la nueva configuración, Transferencia de método estandarizado"Arrastre el nombre del parámetro, como FETC de la lista de parámetros, al detector 530/30 apropiado, también edite parámetros adicionales a la nueva configuración.
Para estandarizar el experimento en el laboratorio de transferencia, ejecute una verificación de rendimiento utilizando esta configuración de citómetro A y realice un seguimiento de las perlas para verificar que el citómetro A esté funcionando bien. Haga clic con el botón derecho en la configuración del citómetro A en la ventana del navegador de software y cree una hoja de trabajo seleccionando la configuración de la aplicación. Luego use una muestra sin teñir para ajustar el tubo fotomultiplicador, o voltajes PMT, del área de dispersión directa, o FSC, y el área de dispersión lateral, o SSC, y todos los parámetros de fluorescencia.
Guarde la configuración de la aplicación haciendo clic con el botón derecho en la configuración del citómetro del experimento y seleccionando la configuración de la aplicación. Para agregar controles de compensación automáticamente, haga clic en el botón del experimento y seleccione el menú de configuración de compensación, antes de seleccionar crear controles de compensación. Registre los datos de todas las perlas de control de compensación.
Una vez hecho esto, haga clic en el experimento y seleccione la configuración de compensación, calcule la compensación automáticamente, antes de registrar los datos para los controles teñidos de una sola célula. use CD45 RAA APC para modificar el valor de compensación de R7-18 a 15%APC, use CD19 BB700 para modificar el valor de compensación de APC H7 a 14%BB700 y use CD8 R7-18 para modificar el valor de compensación de APC H7 a 60%R7-18. Después de registrar los datos para las perlas CST, cree una hoja de trabajo global de la plantilla de valor objetivo para las perlas brillantes CST, una vez hecho esto, ejecute las muestras en la matriz de citómetros de flujo y recoja 25, 000 linfocitos.
Cree una hoja de cálculo global de la plantilla de análisis para las muestras y guarde la plantilla experimental en el citómetro A.Exporte la plantilla experimental utilizando el CD-ROM. Para transferir la plantilla experimental al citómetro B en el laboratorio de pruebas, realice una verificación de rendimiento utilizando perlas CST para verificar que el citómetro B esté funcionando bien. Importe la plantilla experimental del citómetro A y cree un experimento para el citómetro B utilizando la plantilla.
Usando el mismo lote de perlas CST, ajuste los voltajes de los parámetros fluorescentes para cada canal de fluorescencia para que coincida con el instrumento MFI anterior. Si es necesario, ajuste el voltaje FSC usando la muestra sin teñir. Haga clic derecho en la configuración del citómetro experimental y seleccione la configuración de la aplicación para guardar la configuración de la aplicación.
A continuación, modifique el valor de compensación de R7-18 a 15% APC utilizando CD45 RA APC. Utilice CD19 BB700 para modificar el valor de compensación de APC H7 al 24%BB700. Y use CD8 R7-18 para modificar el valor de compensación de APC H7 al 60%R7-18.
Después de la modificación del valor de compensación, ejecute las muestras en el citómetro de flujo B y recoja 25, 000 linfocitos. En una hoja de trabajo global de la plantilla de valor objetivo para la configuración y seguimiento del citómetro, o perlas brillantes CST, se obtuvieron los gráficos de histograma de 10 canales de fluorescencia, el valor objetivo para cada parámetro se mostró mostrando la mediana dentro de las puertas del histograma. los diagramas de puntos de la muestra obtenida utilizando el citómetro A y B después de la estandarización del instrumento, demostraron la consistencia de los datos entre diferentes instrumentos utilizando una plantilla de análisis automático.
No se observaron diferencias significativas cuando se compararon los resultados de seis muestras en dos modelos de instrumentos diferentes. Los resultados de 15 subconjuntos linfoides obtenidos de diferentes instrumentos utilizando el método estandarizado adquirieron datos altamente comparables. El mismo nombre de configuración, la creación de la plantilla y la creación de los valores ecotecnológicos de las perlas de seguridad en diferentes instrumentos son pasos críticos en este protocolo.
