日本脳炎ワクチン接種小児におけるリンパ球検出のためのフローサイトメーター間ラボ間移入の標準化

フローサイトメーターの標準化方法は、検査結果の相互認定のための実行可能なアプローチを提供し、複数のセンターにわたる研究プロジェクトとの結果の一貫性を保証します。時間の消費を最小限に抑える方法は、実行が簡単で、テンプレートを自動化し、分析し、データ分析の要件を大幅に減らすことができます。サイトメーターAのソフトウェアで、転送ラボからサイトメーターボタンをクリックし、構成の表示を選択して、新しい構成の作成を開始します。

構成リストで基本構成フォルダーを右クリックし、[新しいフォルダー] を選択して名前を変更します。次に、基本構成を右クリックしてコピーし、新しい構成を作成します。新しいフォルダを右クリックし、新しい構成の名前を変更する前に基本構成を貼り付けます。 標準化されたメソッド転送」パラメータリストからFETCなどのパラメータ名を適切な検出器530/30にドラッグし、追加のパラメータも新しい構成に編集します。

トランスファーラボで実験を標準化するには、このサイトメーターAのセットアップを使用してパフォーマンスチェックを実行し、ビーズを追跡して、サイトメーターAが良好に機能していることを確認します。ソフトウェアブラウザウィンドウでサイトメーターA設定を右クリックし、アプリケーション設定を選択してワークシートを作成します。次に、染色されていないサンプルを使用して、前方散乱領域(FSC)、側方散乱領域(SSC)、およびすべての蛍光パラメータの光電子増倍管(PMT)電圧を調整します。

実験サイトメーターの設定を右クリックし、アプリケーションの設定を選択して、アプリケーションの設定を保存します。報酬コントロールを自動的に追加するには、実験ボタンをクリックし、報酬設定メニューを選択してから、[報酬コントロールの作成] を選択します。すべての補正制御ビーズのデータを記録します。

完了したら、実験をクリックして補正設定を選択し、補正を自動的に計算してから、単一細胞染色コントロールのデータ記録を行います。CD45 RAA APC を使用して R7-18 の補正値を 15%APC に変更し、CD19 BB700 を使用して APC H7 の補正値を 14%BB700 に変更し、CD8 R7-18 を使用して APC H7 の補正値を 60%R7-18 に変更します。CSTビーズのデータを記録した後、CST明るいビーズの目標値テンプレートのグローバルワークシートを作成し、完了したら、フローサイトメーターアレイでサンプルを実行し、25, 000リンパ球を収集します。

サンプルの分析テンプレートのグローバルワークシートを作成し、実験テンプレートをサイトメーターに保存します A.CD-ROMを使用して実験テンプレートをエクスポートします。実験テンプレートをテストラボのサイトメーターBに移すには、CSTビーズを使用して性能チェックを行い、サイトメーターBが良好に機能していることを確認します。サイトメーターAから実験テンプレートをインポートし、テンプレートを使用してサイトメーターBの実験を作成します。

同じロットのCSTビーズを使用して、各蛍光チャンネルの蛍光パラメータ電圧を以前のMFI装置と一致するように調整します。必要に応じて、染色されていないサンプルを使用してFSC電圧を調整します。実験サイトメーターの設定を右クリックし、アプリケーション設定を選択してアプリケーション設定を保存します。

次に、CD45 RA APCを使用してR7-18の補正値を15%APCに変更します。CD19 BB700を使用して、APC H7の補正値を24%BB700に変更します。また、CD8 R7-18を使用して、APC H7の補正値を60%R7-18に変更します。

補正値を変更した後、フローサイトメーターBでサンプルを実行し、25, 000個のリンパ球を収集します。サイトメーターのセットアップおよび追跡、またはCST明るいビーズのターゲット値テンプレートのグローバルワークシートにおいて、10個の蛍光チャネルのヒストグラムプロットが得られ、各パラメータのターゲット値がヒストグラムゲート内の中央値を示すことによって表示された。装置標準化後にサイトメーターAおよびBを使用して得られたサンプルのドットプロットは、自動分析テンプレートを使用して異なる機器間のデータの一貫性を実証しました。

6つのサンプルの結果を2つの異なる機器モデル間で比較しても、有意差は観察されませんでした。標準化された方法を使用して異なる機器から得られた15のリンパ系サブセットの結果は、非常に比較可能なデータを取得しました。同じ構成名、テンプレートの作成、および異なる機器での安全ビーズのエコテクノロジー値の作成は、このプロトコルの重要なステップです。