Durante a última década, modelos de traumatismo cranioencefálico leve foram desenvolvidos em roedores com traumatismo cranioencefálico fechado. No entanto, a implementação desses modelos no desenvolvimento de roedores é escassa em comparação com a literatura de TCE em adultos. Para abordar com relevância clínica, este estudo desenvolveu um traumatismo cranioencefálico fechado com distúrbios de longa duração, ou modelo CHILD TBI.
Por muito tempo, a lesão cerebral traumática se concentrou nas consequências de lesões cerebrais graves. Nas últimas duas décadas, foram relatados efeitos leves do TCE, mas poucos estudos avaliaram as consequências a longo prazo. Com um novo desenvolvimento em neuroimagem, há um interesse crescente nos resultados de longo prazo que faltavam para os modelos pediátricos.
O CHILD foi projetado para preencher essa lacuna. Usando o modelo CHILD, caracterizamos mudanças progressivas e persistentes no cérebro, como mortes neuronais, ressonância magnética de difusão alterada, atividade neuronal e plasticidade modificadas, aumento da gliose, perturbações comportamentais progressivas e disfunção cardíaca com a idade. Nosso novo modelo CHILD apresenta a vantagem de ser realizado e reprodutível em diferentes laboratórios.
Com ampla adoção, poderíamos esperar uma extensão no conhecimento sobre as consequências a longo prazo da concussão pediátrica. Usando o modelo CHILD, continuamos a investigar os efeitos e consequências do estresse repetitivo. Já começamos a investigar como os efeitos combinados da infecção precoce após o nascimento e da CRIANÇA podem contribuir para os resultados a longo prazo.
Além disso, observamos proteção do leito vascular após estresse repetido, sugerindo que o pré-condicionamento após a infecção precoce pode estar ocorrendo, mas isso aguarda uma investigação mais aprofundada. Para começar, aqueça a câmara para indução anestésica e as gaiolas de recuperação com antecedência usando almofadas de aquecimento para evitar hipotermia. Regular o aparelho estereotáxico com o pêndulo montado num ângulo de 90 graus.
Verifique se todas as partes do aparelho estereotáxico estão devidamente apertadas e fixadas. Confirme se o pistão está firmemente aparafusado no impactor. Em seguida, corte uma folha de alumínio e enrole a estrutura estereotáxica com papel alumínio para criar uma almofada para o animal descansar.
Prenda a posição e a tensão da folha usando fita adesiva de laboratório para suportar o peso do animal. Em seguida, ligue o controlador do impactor e ajuste a velocidade do impacto para dois metros por segundo para o grau um ou três metros por segundo para o grau dois, com base na gravidade da lesão. Em seguida, pese os animais em uma balança.
Depois de anestesiar o mouse, posicione a cabeça do mouse sob o impactor. Certifique-se de que o filhote esteja totalmente esticado. Confirme se a ponta do impactor de três milímetros de diâmetro está coberta com borracha para minimizar o contato do metal com o crânio.
Agora, mude o botão para a posição Estender para abaixar o impactor. Abaixe aproximadamente o impactor, de modo que fique posicionado entre as orelhas do mouse. Em seguida, deslize o mouse para que a ponta do pistão seja movida para frente o equivalente a um comprimento de ponta de pistão e um comprimento de ponta para a esquerda do animal.
Coloque o impactor na posição Retrair. Em seguida, ajuste a posição do pistão para determinar a gravidade da lesão. Defina o tempo de permanência para 0,1 segundos, independentemente da gravidade da lesão.
Pressione Impact no botão direito para iniciar o impacto. Rapidamente, gire o botão esquerdo para a posição Desligado para evitar o superaquecimento do sistema. Em seguida, coloque o mouse em seu flanco direito em uma gaiola de recuperação.
Monitore e registre o tempo de escrita quando o mouse empina nas quatro patas. Observe o tempo em que ele retoma o comportamento exploratório. Depois de totalmente recuperado, retorne o mouse à sua gaiola inicial.
Lave as seções cerebrais quatro vezes por 10 minutos cada em PBS sob agitação. Transfira as seções cerebrais para a solução de bloqueio e incube por 10 minutos em temperatura ambiente. Pegue os anticorpos primários diluídos na solução de bloqueio e adicione as seções cerebrais.
Incube as seções durante a noite a quatro graus Celsius. Após a incubação, lave as seções quatro vezes por 10 minutos cada em PBS sob agitação. Transferir as secções para uma solução de bloqueio contendo anticorpos fluorescentes secundários diluídos de 1 a 1000 e incubar durante uma hora à temperatura ambiente.
Depois de lavar as seções quatro vezes em PBS, monte-as nas corrediças usando um meio de montagem. Adicione uma lamínula a cada slide antes de armazená-los a quatro graus Celsius até a aquisição da imagem. Adquira imagens de imunofluorescência usando um microscópio de epifluorescência e o software Micro-Manager.
Os camundongos fêmeas do grupo G2 exibiram tempo de permanência significativamente maior do que os machos do mesmo grupo, e ambos os sexos apresentaram tempos prolongados em comparação com os controles simulados, com maiores diferenças entre os níveis de gravidade do G1 e G2. Os camundongos fêmeas do grupo G2 exibiram um tempo significativamente maior para explorar em comparação com os machos e ambos os sexos tiveram tempos mais altos em comparação com os controles simulados, com aumentos significativos dependentes da gravidade entre G1 e G2. A astrogliose, evidenciada pelo aumento da coloração de proteínas ácidas fibrilares gliais, foi observada no córtex somatossensorial ipsilateral do grupo G2 em comparação com controles simulados um dia após a lesão. A imuno-histoquímica NeuN não mostrou perda neuronal significativa um dia após a lesão.
