Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Простой метод для записи внеклеточных потенциалов поля в личиночной рыбок данио мозга описаны. Метод обеспечивает надежную В естественных условиях Чтение из захвата-подобную активность. Эта техника может быть использована с генетически модифицированными данио личинки проведения эпилепсии генов, связанных или судороги вызваны администрации судорожного наркотиков.
Эпилепсия затрагивает почти 3 миллиона человек в Соединенных Штатах и до 50 миллионов человек по всему миру. Определяется как возникновение спонтанной неспровоцированных припадков, эпилепсии могут быть приобретены в результате оскорбления в мозг или генетической мутации. Усилия по модели припадки у животных в первую очередь использовать приобретенные оскорбления (судорожного наркотики, стимуляцию или черепно-мозговой травмы) и генетических манипуляций (антисмысловой нокдаун, гомологичной рекомбинации или трансгенез) у грызунов. Данио рерио является моделью системы позвоночных 1-3, которые могут предоставить ценную альтернативу грызунов на основе исследования эпилепсии. Данио рерио широко используются в исследовании позвоночных генетики или развития, проявляют высокую степень генетического сходства с млекопитающими и выразить гомологов для ~ 85% известных человеческих одной мутации гена эпилепсии. Из-за своих небольших размеров (4-6 мм в длину), личинки данио рерио могут быть сохранены в объемах жидкости столь же низко как 100 мкл во время раннего развития и ARRAрый в мульти-луночных планшетах. Реагенты могут быть добавлены непосредственно в раствор, в котором развиваются эмбрионы, упрощения введения препарата и позволяет быстро в естественных условиях скрининга тестируемых соединений 4. Синтетические олигонуклеотиды (morpholinos), мутагенеза, цинкового пальца нуклеазы и трансгенных подходов может быть использован для быстрого создания нокдаун гена или мутации у рыбок данио 5-7. Эти свойства позволить себе рыбок данио исследования беспрецедентными статистического анализа преимуществ власть над грызунами в изучении неврологических расстройств, таких как эпилепсия. Потому что «золотым стандартом» для лечения эпилепсии исследований является мониторинг и анализ аномальных электрических разрядов, которые происходят в центральной структуры мозга (например, эпилептические припадки), метод эффективного записи активности мозга в личиночной рыбок данио описано здесь. Этот метод адаптации обычных внеклеточной методы записи и позволяет стабильный долгосрочный мониторинг активности мозга в неповрежденный личинки данио рерио. Sдостаточное записи показаны для острого шок, вызванный ванны применения судорожного наркотиков и спонтанных припадков, записанные в генетически модифицированной рыбы.
1. Производство яиц и коллекции
2. Микроэлектродные Тяговая и подготовка
3. Иммобилизация в агар
3. Внеклеточный поле записи
Примеры электрографических захвата типа разряда записаны в мозг из агар-встроенные личинки данио показано на рисунке 1. Большая амплитуда мульти-всплеск всплеск разряда в этих образцах был вызван ванны применения судорожного наркотиков, 40 мМ пилокарпин (в, 6 DPF) или 1 мм пикрото...
Внеклеточной метод записи, представленные здесь позволяет очень чувствительный и быстрый анализ активности мозга. Эти записи аналогичны электроэнцефалографии (ЭЭГ) мониторинг обычно используется для оценки наличия аномальных электрических разрядов (например, арест) в моделях г...
Нет конфликта интересов объявлены.
Автор хотел бы поблагодарить Питера Кастро и Мэтью Dinday к их скорейшему усилия по созданию данио рерио в лаборатории. Эта работа финансировалась Национальным институтом здоровья EUREKA гранта (# R01NS079214-01).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Название реагента | Компания | Номер в каталоге | Комментарии (по желанию) |
Низкой температурой плавления агарозы | Fisher-научным | BP1360-100 | Растворите в зародыше средств массовой информации на уровне 1,2% |
Носитель информации | Fisher-научным | BP3581, P330-3, BP410-1, BP214-500, D16-1, C77-500 | 1 мМ NaCl, 2,9 мМ KCl, 10 мМ HEPES, 1,2 мМ MgCl 2, 10 мМ глюкозы, 2,1 мМ CaCl 2 рН около 7,3 с 1 N NaOH |
Tricaine | Серебряный Labs | MS-222 | 0,02% |
α-bungarotoxin | Tocris Bioscience | 2133 | 1 мг / мл |
Капиллярная трубка стекла | Warner Instruments | G120TF-3 | Потяните, чтобы сопротивление 2 -7 МОм |
Усилитель патч зажим | Warner Instruments | PC-505B | Мы используем усилитель Warner в режиме текущего зажим; усиления устанавливается на 2 мВ / Па и фильтр Бесселя установлен на 2K. Сопоставимые модели могут быть использованы в соответствии с инструкцией завода-изготовителя. |
Фильтр / Усилитель | Лебедь технологии | FLA-01 | Мы используем Cygnus предварительного усилителя; Gain установлен на уровне 10-20; Частота среза установлен на 1-2К; Notch фильтр в. Сопоставимые модели могут быть использованы в соответствии с инструкцией завода-изготовителя. |
Axon A / D платы и программного обеспечения Axoscope | Molecular Devices | Axon Digidata 1320A; Axoscope 8,2 | Данные, собранные в Axoscope использование без зазоров приобретения режиме отбор проб на 10 кГц. Сопоставимые моделей и программ может быть использован в соответствии с инструкцией завода-изготовителя. |
Яйцо воды | Instant Ocean | 3 г мгновенных океана морской соли, 2 мл 0,1% метиленового синего в 10 мл деионизированной воды |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены