JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этой статье описывается применение автоматизированного оборудования для легкого и эффективного отделения и сбора веществ, таких как бесклеточная ДНК и циркулирующие опухолевые клетки, из цельной крови.

Аннотация

В последнее время жидкие биопсии стали использоваться для диагностики различных заболеваний, в том числе рака. Жидкости организма содержат много веществ, включая клетки, белки и нуклеиновые кислоты, происходящие из нормальных тканей, но некоторые из этих веществ также происходят из больной области. Исследование и анализ этих веществ в жидкостях организма играют ключевую роль в диагностике различных заболеваний. Поэтому важно точно отделить необходимые вещества, и для использования с этой целью разработано несколько методик.

Мы разработали устройство и платформу типа «лаборатория на диске» под названием CD-PRIME. Это устройство автоматизировано и имеет хорошие результаты по загрязнению образца и стабильности образца. Кроме того, он имеет преимущества хорошей доходности приобретения, короткого времени работы и высокой воспроизводимости. Кроме того, в зависимости от типа диска, подлежащего установке, плазма, содержащая бесклеточную ДНК, циркулирующие опухолевые клетки, мононуклеарные клетки периферической крови или пушистые оболочки могут быть разделены. Таким образом, приобретение различных материалов, присутствующих в жидкостях организма, может быть сделано для различных последующих применений, включая изучение омики.

Введение

Раннее и точное выявление различных заболеваний, в том числе онкологических, является важнейшим фактором в установлении стратегии лечения 1,2,3,4. В частности, раннее выявление рака тесно связано с повышением шансов на выживаемость пациента 5,6,7,8. В последнее время жидкие биопсии находятся в центре внимания для раннего выявления рака. Солидные опухоли подвергаются ангиогенезу и выделяют в кровь различные вещества. В частности, вкрови больных раком обнаружены циркулирующие ДНК (ctDNAs), циркулирующие РНК (ctRNAs), белки, везикулы, такие как экзосомы, и циркулирующие опухолевые клетки (CTC). Хотя существуют различия в количестве этих веществ, они последовательно наблюдаются не только на ранних стадиях, но и на более поздних стадиях 6,10. Однако эти индивидуальные различия очень высоки; например, количество бесклеточной ДНК (cfDNA), содержащей ctDNA, составляет менее 1000 нг, а количество CTC составляет менее 100 в 10 мл цельной крови у больных раком 11,12,13. Многие исследования характеризуют рак с использованием этих веществ, присутствующих в меньших количествах (например, cfDNA, ctDNA и CTC). Для получения точных результатов важно точно отделить небольшие количества веществ с высокой чистотой13,14. Обычно используются обычные методы центрифугирования, но они сложны в обращении и имеют низкую чистоту в зависимости от навыков пользователя. С момента открытия CTC было разработано несколько методов разделения, таких как центрифугирование или разделение по плотности, иммуногранула и микрофлюидные методы. С момента открытия ЦОК было разработано несколько методов сдерживания. Однако эти методы часто ограничены, когда необходимо изолировать клетки из различных чипов и мембран, используемых для их выделения15. Кроме того, методы маркировки требуют такого оборудования, как FACS, и существуют ограничения на последующий процесс из-за загрязнения маркировки.

В последнее время возросло использование жидких биопсий, и проводятся различные исследования для раннего выявления рака. Хотя этот метод прост, все еще существуют трудности в последующем анализе, и различные исследования пытаются преодолеть эти трудности16,17. Кроме того, многие сайты, включая больницы, требуют автоматизированных, воспроизводимых и высокочистых методов, которые удобны в использовании. Здесь мы разработали лабораторию на диске для автоматического отделения веществ от образцов крови после жидкой биопсии. Эти устройства основаны на принципе центрифугирования, микрофлюидики и захвата клеток размером с пору. Существует три типа дисков: LBx-1 может приобретать плазму и пышную оболочку, в то время как LBx-2 может приобретать плазму и PBMC из цельной крови объемом менее 10 мл; FAST-auto также может приобретать CTC с помощью мембраны, которая снимается с диска. До четырех дисков можно использовать за один прогон. Прежде всего, преимущество этого устройства и метода заключается в том, что он может получать различные вещества, полученные из рака, из одного и того же образца, используя небольшое количество крови. Это означает, что кровь пациента должна быть взята только один раз. Кроме того, он имеет преимущество в исключении ошибок из-за различий в периоде забора крови. Эта платформа проста в использовании и обеспечивает точные результаты для жидких биопсий и последующих применений. В этом протоколе введено использование устройства и картриджа.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

Все образцы цельной крови были получены от пациентов с раком легких. Исследования и анализ в Clinomics проводятся Научно-исследовательским институтом геномики рака, а одобрение исследований IRB правительством возглавляется Комитетом по институциональному обзору Медицинского центра Асана (IRB NO. 2021-0802) с номером IRB, зарегистрированным для исследований в Clinomics.

1. Пробоподготовка

  1. Соберите 9 мл цельной крови в ЭДТА или cfDNA-стабильную пробирку для сбора крови.
  2. Хорошо перемешайте, перевернув трубку вверх и вниз примерно 10 раз.
  3. Хранить образцы при комнатной температуре (RT; для кратковременного хранения) или 4 °C (для длительного хранения). Не замораживать и не оттаивать.

2. Подготовка устройства

  1. Нажмите выключатель питания, чтобы включить прибор.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На сенсорной панели появляется экран загрузки, и инструмент инициализируется. Держите руки подальше от инструмента во время инициализации. Экран выбора картриджа появится после завершения инициализации прибора.
  2. Выберите режим примера, который будет использоваться. Измените количество образцов, нажав стрелку.

3. Работа устройства и сбор образцов

  1. Загрузка патрона LBx-1
    1. Выберите тип картриджа на сенсорной панели прибора. Измените количество образцов, нажав кнопку со стрелкой.
    2. Откройте дверцу прибора и вставьте все картриджи, которые будут использоваться, в порядке количества на держателе картриджа. Убедитесь, что картридж правильно вставлены и держатель картриджа. Если картридж вставлен неправильно, это может привести к значительному повреждению инструмента.
    3. В общей сложности четыре картриджа поместите фиктивный картридж в пустое пространство держателя картриджа.
    4. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его.
    5. Закройте дверь и нажмите кнопку RUN на экране сенсорной панели. Прибор закрывает клапаны на картриджах, что занимает примерно 30 с.
    6. Следуйте сообщению, чтобы открыть дверцу, снять опорное колесо и извлечь закрытый клапан картридж из держателя картриджа.
    7. Положите картридж на стол и подготовьтесь к введению образца цельной крови. Пипетка максимум 10 мл образца цельной крови с использованием серологической пипетки.
      ВНИМАНИЕ: Опасность обращения с кровью. Во время всей процедуры обращения с образцами крови и реагентами важно носить лабораторный халат и лабораторные перчатки. Предоставленный MSDS должен быть тщательно изучен работниками лаборатории.
    8. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите образец цельной крови.
      ПРИМЕЧАНИЕ При использовании более или равного 9 мл образца цельной крови добавление фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS) не требуется. При использовании менее 9 мл образца цельной крови добавьте PBS, чтобы сделать общий объем до 9 мл. Например, при использовании 7,2 мл цельной крови, пожалуйста, добавьте 1,8 мл PBS во входное отверстие образца. Серологическая пипетка или наконечник пипетки могут быть использованы для инъекций цельной крови и PBS. При использовании менее 8 мл образца цельной крови пышная оболочка не может быть восстановлена даже путем добавления 1 мл PBS. Для подготовки к гДНК используйте 200 мкл цельной крови, которая была отделена до этого этапа.
    9. Вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке количества на держателе картриджа. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Закройте дверь и нажмите кнопку OK .
      ПРИМЕЧАНИЕ: Плазма и пышная оболочка отделяются от цельной крови автоматически, что занимает около 30 минут.
      ОСТОРОЖНО Опасность во время работы. Открытие двери или прикосновение к инструменту во время высокоскоростных операций вращения может привести к серьезным травмам. Также существует риск получения травмы из-за асимметричной нагрузки ротора. Если необычные вибрации и шумы возникают, когда инструмент запускается в режиме вспомогательного обогащения клеток или экспертном режиме, размещение картриджа может быть асимметричным. Немедленно нажмите клавишу питания, чтобы остановить и правильно установить картридж.
    10. Ищите сообщение на экране, сопровождаемое звуком тревоги, который появляется, когда разделение плазмы и пышного пальто завершено.
    11. Остановите сигнал тревоги, открыв дверь или нажав кнопку STOP . Откройте дверцу, извлеките картридж и положите его на стол.
    12. Извлеките 3 мл плазмы из плазменного выхода с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл. Извлеките пушистый слой объемом 3 мл из выходного отверстия для пальто с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл.
  2. Загрузка картриджа LBx-2
    1. Выберите имя картриджа на сенсорной панели прибора. Измените количество образцов, нажав кнопку со стрелкой.
    2. Откройте дверцу и вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке номера на держателе картриджа.
    3. В общей сложности четыре картриджа поместите фиктивный картридж в пустое пространство держателя картриджа.
    4. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Убедитесь, что картридж правильно вставлен в держатель картриджа. Если картридж вставлен неправильно, это может привести к значительному повреждению инструмента.
    5. Закройте дверь и нажмите кнопку RUN на экране сенсорной панели. Прибор закрывает клапаны на картридже, что занимает примерно 30 с.
    6. Следуйте сообщению, чтобы открыть дверцу, снять опорное колесо, а также извлечь закрытый клапан картридж из держателя картриджа и поместить его на стол.
    7. Положите картридж на стол и подготовьтесь к введению раствора градиента плотности и образца цельной крови. Проверьте объем раствора градиента плотности и PBS, подлежащего инъекции, в зависимости от объема образца цельной крови (дополнительная таблица 1).
    8. Пипетка градиентного раствора плотности с помощью серологической пипетки. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите раствор градиента плотности.
    9. После инъекции раствора градиента плотности пипетку образца цельной крови с помощью серологической пипетки. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите образец цельной крови.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При использовании менее 9 мл образца цельной крови добавьте PBS, ссылаясь на эту таблицу (Дополнительная таблица 1).
    10. Вставьте картриджи для использования в соответствии с номером на держателе картриджа. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Закройте дверь и нажмите кнопку OK .
    11. Плазма и PBMC отделяются от цельной крови автоматически, что занимает примерно 30 минут. Ищите сообщение, которое появляется, сопровождаемое звуком тревоги, когда разделение плазмы и PBMC завершено.
    12. Остановите сигнал тревоги, открыв дверь или нажав кнопку STOP . Откройте дверцу, извлеките картридж и положите его на стол.
    13. Извлеките 3 мл плазмы из плазменного выхода с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл. Извлеките 3 мл PBMC из розетки PBMC с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл.
  3. Загрузка картриджа FAST-auto
    1. Выберите картридж на сенсорной панели прибора. Измените количество образцов, нажав кнопку со стрелкой.
    2. Откройте дверцу и вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке номера на держателе картриджа. В общей сложности четыре картриджа поместите фиктивный картридж в пустое пространство держателя картриджа.
    3. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его.
    4. Закройте дверь и нажмите кнопку RUN на экране сенсорной панели. Прибор закрывает клапаны на картридже, что занимает примерно 30 с.
    5. Следуйте сообщению, чтобы открыть дверцу, снять опорное колесо и извлечь закрытый клапан картридж из держателя картриджа.
    6. Поместите картридж на стол и подготовьтесь к инъекции раствора PBS и образца цельной крови. Пипетка 6 мл раствора PBS с использованием серологической пипетки. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа PBS и медленно введите 6 мл раствора PBS.
    7. После инъекции раствора PBS пипетку 3 мл цельной крови или образца PBMC, полученного из LBx-2 с использованием серологической пипетки, которую предварительно промывали 1% BSA для предотвращения прилипания остатка. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите образец цельной крови.
    8. Вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке количества на держателе картриджа. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Закройте дверь и нажмите кнопку OK .
    9. ЦОК обогащаются цельной кровью автоматически, что занимает примерно 15 минут. Найдите сообщение, которое появляется в сопровождении звукового сигнала тревоги, когда обогащение CTC завершено. Остановите сигнал тревоги, открыв дверь или нажав кнопку STOP .
    10. Откройте дверцу, извлеките картридж и положите его на стол. Вставьте устройство для удаления задней пластины (BPR) в четыре отверстия на передней панели картриджа. Нажмите на темно-синее крыло большими пальцами обеих рук, а затем нажимайте на светло-голубое тело, пока оно не щелкнет.
    11. Осторожно извлеките корпус картриджа, подняв его вверх. Очень аккуратно подберите фильтрующую мембрану за край с помощью пинцета. Пожалуйста, убедитесь, что вы используете внешний обод (крайняя часть шириной 1 мм) фильтрующей мембраны, чтобы зажать и удерживать фильтрующую мембрану.
    12. Осторожно поместите фильтрующую мембрану (на которой находятся обогащенные ЦОК) в трубку объемом 1,5 мл для приготовления нуклеиновых кислот. При необходимости восстановите отфильтрованную кровь к выходу крови с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл.

4. Обслуживание системы

  1. Подготовка к очистке и дезинфекции инструмента
    1. Очищайте все доступные поверхности инструмента и аксессуаров раз в неделю, используя этанол и высушенные ткани, а также сразу при загрязнении.
    2. Регулярно очищайте чашу и вал ротора, используя спирт (этанол и изопропанол) или дезинфицирующие средства на спиртовой основе.
  2. Очистка и дезинфекция инструмента
    ПРИМЕЧАНИЕ: Общие сведения об устранении неполадок и другие примечания на устройстве см. в Дополнительной таблице 2.
    1. Выключите прибор с помощью главного выключателя питания. Отсоедините вилку питания от блока питания.
    2. Откройте дверцу и очистите и продезинфицируйте все доступные поверхности инструмента, включая кабель питания, используя влажную ткань и рекомендуемые чистящие средства.
    3. Проверьте вал ротора на наличие повреждений. Осмотрите прибор на предмет коррозии и повреждений.
    4. Подключайте прибор к блоку питания только в том случае, если он полностью высох внутри и снаружи.
  3. Отсоедините основную вилку питания и извлеките держатель предохранителя. Держатель предохранителя расположен над розеткой. Замените использованный предохранитель на запасной из контейнера.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Целью этой методики является легкое и автоматическое выделение связанных с раком веществ из цельной крови. В частности, любой желающий может использовать эту технику во всех подходящих областях исследований и анализа. Одновременное и воспроизводимое разделение нескольких веществ в о...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Количество и концентрация cfDNA и CTC зависит от индивидуальности, стадии и типа рака. Это также зависит от состояния больного 2,4,5,10,20. В частности, на ранних или предраковых стадиях рака концентрации св...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, связанного с данной работой.

Благодарности

Эта рукопись была частично поддержана Корейским фондом разработки медицинских изделий (KMDF, грант No RS-2020-KD000019) и Корейским институтом развития индустрии здравоохранения (KHIDI, грант No HI19C0521020020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1% BSA (Bovine Serum Albumin)Sigma-AldrichA3059
1.5 mL Microcentrifuge TubeAxygenMCT-150-C-S
15 mL Conical TubeSPL50015
4150 TapeStation SystemAgilentG2992AACell-free DNA Screen Tape (Agilent, 5067-5630), Cell-free DNA Sample Buffer (Agilent, 5067-5633)
Apostle MiniMax High Efficiency Cell-Free DNA Isolation Kit ApostleA17622-2505 mL X 50 preps version
BD Vacutainer blood collection tubesBD367525EDTA Blood Collection Tube (10 mL)
BioViewCCBSClinomicsBioView Clinomics-Customized Bioview System. Allegro Plus microscope-based customization equipment
CD45 Monoclonal Antibody (HI30), PE-Alexa Fluor 610InvitrogenMHCD4522
FAST Auto cartridgeClinomicsCLX-M3001
LBx-1 cartridgeClinomicsCLX-M4101
LBx-2 cartridgeClinomicsCLX-M4201
OPR-2000 instrumentClinomicsCLX-I2001
Cover GlassMarienfeld SuperiorHSU-0101040
DynaMag 2 Magnet StandThermo Fisher Scientific12321D
Ficoll Paque SolutionGE healthcare17-1440-03density gradient solution
Filter Tip, 10 µLAxygenAX-TF-10Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.
Filter Tip, 200 µLAxygenAX-TF-200Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.
Filter Tip, 100 µLAxygenAX-TF-100Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.
Filter Tip, 1000 µLAxygenAX-TF-1000Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.
FITC anti-human CD326 (EpCAM) AntibodyBioLegend324204
FITC Mouse Anti-Human CytokeratinBD Biosciences347653
Formaldehyde solution (35 wt. % in H2O)Sigma Aldrich433284
Kimtech Science WipersYuhan-Kimberly41117
Latex gloveMicroflex63-754
Magnetic Bead Separation RackV&P ScientificVP 772F2M-2
Manual Pipetting  (0.5-10 µL)Eppendorf3120000020
Manual Pipetting  (2-20 µL)Eppendorf3120000038
Manual Pipetting  (10-100 µL)Eppendorf3120000046
Manual Pipetting  (20-200 µL)Eppendorf3120000054
Manual Pipetting  (100-1000 µL)Eppendorf3120000062
Mounting Medium With DAPI - Aqueous, Fluoroshieldabcamab104139
Normal Human IgG ControlR&D Systems1-001-A
OLYMPUS BX-UCBOlympus9217316
Pan Cytokeratin Monoclonal Antibody (AE1/AE3), Alexa Fluor 488Invitrogen53-9003-82
PBS (Phosphate Buffered Saline Solution)Corning21-040CVC
Portable Pipet AidDrummond4-000-201
Slide GlassMarienfeld SuperiorHSU-1000612
StainTray Staining boxSimportM920
Sterile Serological Pipette (10 mL)SPL91010
Triton X-100 solutionSigma Aldrich93443
TWEEN 20Sigma AldrichP7949
Whole BloodStored at 4-8 °C by collecting in EDTA or cfDNA stable tube : If the whole blood is insufficient in 9 mL, add PBS (phosphate buffered saline) as much as necessary.
X-Cite 120Q (Fluorescence Lamp Illuminator)Excelitas010-00157

Ссылки

  1. Babayan, A., Pantel, K. Advances in liquid biopsy approaches for early detection and monitoring of cancer. Genome Medicine. 10 (1), 21(2018).
  2. Crowley, E., Di Nicolantonio, F., Loupakis, F., Bardelli, A. Liquid biopsy: monitoring cancer-genetics in the blood. Nature Reviews Clinical Oncology. 10 (8), 472-484 (2013).
  3. Bardelli, A., Pantel, K. Liquid biopsies, what we do not know (yet). Cancer Cell. 31 (2), 172-179 (2017).
  4. Mattox, A. K., et al. Applications of liquid biopsies for cancer. Science Translational Medicine. 11 (507), (2019).
  5. Heitzer, E., Perakis, S., Geigl, J. B., Speicher, M. R. The potential of liquid biopsies for the early detection of cancer. NPJ Precision Oncology. 1 (1), 36(2017).
  6. Scudellari, M. Myths that will not die. Nature. 582 (7582), 322-326 (2015).
  7. Prasad, V., Fojo, T., Brada, M. Precision oncology: origins, optimism, and potential. The Lancet Oncology. 17 (2), 81-86 (2016).
  8. Prasad, V. Perspective: The precision-oncology illusion. Nature. 537 (7619), 63(2016).
  9. Siravegna, G., Marsoni, S., Siena, S., Bardelli, A. Integrating liquid biopsies into the management of cancer. Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (9), 531-548 (2017).
  10. Bettegowda, C., et al. Detection of circulating tumor DNA in early-and late-stage human malignancies. Science Translational Medicine. 6 (224), 24(2014).
  11. Udomruk, S., Orrapin, S., Pruksakorn, D., Chaiyawat, P. Size distribution of cell-free DNA in oncology. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 166, 103455(2021).
  12. Paterlini-Brechot, P., Benali, N. L. Circulating tumor cells (CTC) detection: clinical impact and future directions. Cancer Letters. 253 (2), 180-204 (2007).
  13. Loeian, M. S., et al. Liquid biopsy using the nanotube-CTC-chip: capture of invasive CTCs with high purity using preferential adherence in breast cancer patients. Lab on a Chip. 19 (11), 1899-1915 (2019).
  14. Rikkert, L. G., Van Der Pol, E., Van Leeuwen, T. G., Nieuwland, R., Coumans, F. A. W. Centrifugation affects the purity of liquid biopsy-based tumor biomarkers. Cytometry Part A. 93 (12), 1207-1212 (2018).
  15. Sharma, S., et al. Circulating tumor cell isolation, culture, and downstream molecular analysis. Biotechnology advances. 36 (4), 1063-1078 (2018).
  16. Bennett, C. W., Berchem, G., Kim, Y. J., El-Khoury, V. Cell-free DNA and next-generation sequencing in the service of personalized medicine for lung cancer. Oncotarget. 7 (43), 71013(2016).
  17. Lowes, L. E., et al. Circulating tumor cells (CTC) and cell-free DNA (cfDNA) workshop 2016: scientific opportunities and logistics for cancer clinical trial incorporation. International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1505(2016).
  18. Bryzgunova, O. E., Konoshenko, M. Y., Laktionov, P. P. Concentration of cell-free DNA in different tumor types. Expert Review of Molecular Diagnostics. 21 (1), 63-75 (2021).
  19. Park, Y., et al. Circulating tumour cells as an indicator of early and systemic recurrence after surgical resection in pancreatic ductal adenocarcinoma. Scientific Reports. 11 (1), 1-12 (2021).
  20. Heidrich, I., Ačkar, L., Mossahebi Mohammadi, P., Pantel, K. Liquid biopsies: Potential and challenges. International Journal of Cancer. 148 (3), 528-545 (2021).
  21. Celec, P., Vlková, B., Lauková, L., Bábíčková, J., Boor, P. Cell-free DNA: the role in pathophysiology and as a biomarker in kidney diseases. Expert Reviews in Molecular Medicine. 20, 1(2018).
  22. Thierry, A. R., et al. Origin and quantification of circulating DNA in mice with human colorectal cancer xenografts. Nucleic Acids Research. 38 (18), 6159-6175 (2010).
  23. Moreira, V. G., de la Cera Martínez, T., Gonzalez, E. G., Garcia, B. P., Menendez, F. V. A. Increase in and clearance of cell-free plasma DNA in hemodialysis quantified by real-time PCR. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM). 44 (12), 1410-1415 (2006).
  24. Gauthier, V. J., Tyler, L. N., Mannik, M. Blood clearance kinetics and liver uptake of mononucleosomes in mice. Journal of Immunology. 156 (3), 1151-1156 (1996).
  25. Meng, S., et al. Circulating tumor cells in patients with breast cancer dormancy. Clinical Cancer Research. 10 (24), 8152-8162 (2004).
  26. Alix-Panabières, C., Pantel, K. Challenges in circulating tumour cell research. Nature Reviews Cancer. 14 (9), 623-631 (2014).
  27. Zhou, J., et al. Isolation of circulating tumor cells in non-small-cell-lung-cancer patients using a multi-flow microfluidic channel. Microsystems & Nanoengineering. 5 (1), 8(2019).
  28. Sajay, B. N. G., et al. Towards an optimal and unbiased approach for tumor cell isolation. Biomedical Microdevices. 15 (4), 699-709 (2013).
  29. Bailey, P. C., Martin, S. S. Insights on CTC biology and clinical impact emerging from advances in capture technology. Cells. 8 (6), 553(2019).
  30. Ahn, S. M., Simpson, R. J. Body fluid proteomics: Prospects for biomarker discovery. Proteomics-Clinical Applications. 1 (9), 1004-1015 (2007).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

191

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены