Сбор спермы и компьютерный анализ спермы в модели Teleost японская медака (Oryzias latipes)

Резюме

В данной статье описаны два быстрых и эффективных метода сбора спермы у мелкомодельных рыбок медака (Oryzias latipes), а также протокол достоверной оценки качества спермы с помощью компьютерного анализа спермы (CASA).

Аннотация

Японская медака (Oryzias latipes) — телеостная рыба и новая модель позвоночных для экотоксикологии, развития, генетики и физиологических исследований. Медака также широко используется для исследования размножения позвоночных, что является важной биологической функцией, поскольку оно позволяет виду увековечиваться. Качество спермы является важным показателем мужской фертильности и, таким образом, успешности размножения. Методы извлечения спермы и анализ спермы хорошо документированы для многих видов, включая телеостных рыб. Сбор спермы относительно прост у более крупных рыб, но может быть более сложным у мелких модельных рыб, поскольку они производят меньше спермы и являются более деликатными. В данной статье, таким образом, описаны два метода сбора спермы у маленькой образцовой рыбки, японской медаки: рассечение яичек и массаж живота. Эта статья демонстрирует, что оба подхода возможны для медаки и показывает, что массаж живота может быть выполнен повторно несколько раз, поскольку рыба быстро восстанавливается после процедуры. В данной статье также описан протокол компьютерного анализа спермы в медаке для объективной оценки нескольких важных показателей качества сперматозоидов медака (подвижность, прогрессивность, продолжительность подвижности, относительная концентрация). Эти процедуры, указанные для этой полезной модели малого телеоста, значительно улучшат понимание экологических, физиологических и генетических факторов, влияющих на фертильность у самцов позвоночных.

Введение

Японская медака - это небольшая, откладывающая яйца пресноводная рыба, родом из Восточной Азии. Medaka стала отличной модельной системой позвоночных для экотоксикологии, генетики развития, геномики и эволюционной биологии и физиологических исследований ^1,2. Подобно популярным рыбкам данио, они относительно просты в разведении и очень устойчивы ко многим распространенным заболеваниям рыб ^1,2. Существует несколько преимуществ использования медаки в качестве модели, включая короткое время генерации, прозрачные эмбрионы ^1,2

протокол

Все эксперименты и обращение с животными проводились в соответствии с рекомендациями по благополучию экспериментальных животных в Норвежском университете естественных наук (NMBU). Эксперименты проводились с использованием взрослого (6-9-месячного) самца японской медаки (штамм Hd-rR), выращенного в NMBU (Ос, Норвегия). Методы также были кратко протестированы на 9-месячном самце японской медаки (штамм CAB), выращенном в Национальном научно-исследовательском институте сельского хозяйства, продовольствия и окружающей среды (INRAE, Ренн, Франция).

1. Подготовка инструмента и раствора

1. Готовят раствор анестетика (0,6% тр....

Результаты

Тип полученных данных
Анализ подвижности сперматозоидов с помощью программного обеспечения SCA Evolution предоставляет данные о подвижности (процент подвижных и неподвижных сперматозоидов), а также о прогрессивности (процент прогрессивных и непрогрессирующих сперматозоидов) и .......

Обсуждение

Осмоляльность является важным фактором активации сперматозоидов рыб^36,37. Как правило, сперматозоиды являются бессодержательными в яичках и становятся подвижными в средах, которые являются гиперосмотическими относительно семенной жидкости для морских .......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Axygen	MCT-150-C	Any standard brand can be used
10 µL disposable calibrated glass micropipette and aspirator tube assembly	Drummond	2-000-010
10x objective with phase contrast	Nikon	MRP90100
2 mL tubes	Axygen	MCT-200-c-s	Any standard brand can be used
Blunt forceps	Fine Science Tools	11000-12
Blunt smooth forceps	Millipore	XX6200006P
Disposable 20 micron counting chamber slide	Microptic	20.2.25	Leja 2 chamber slides
Dissecting microscope	Olympus	SZX7	Any standard brand can be used
Fine forceps	Fine Science Tools	11253-20
HBSS	Sigmaaldrich	H8264-1L
Holding sponge	self-made
Inverted microscope	Nikon	Eclipse Ts2R
SCA Evolution	Microptic
Small dissecting scissors	Fine Science Tools	14090-09
Sodium Chloride (NaCl)	Sigmaaldrich	S9888
Tabletop vortex	Labnet	C1301B
Tricaine	Sigmaaldrich	A5040