Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
В данной статье описаны два быстрых и эффективных метода сбора спермы у мелкомодельных рыбок медака (Oryzias latipes), а также протокол достоверной оценки качества спермы с помощью компьютерного анализа спермы (CASA).
Японская медака (Oryzias latipes) — телеостная рыба и новая модель позвоночных для экотоксикологии, развития, генетики и физиологических исследований. Медака также широко используется для исследования размножения позвоночных, что является важной биологической функцией, поскольку оно позволяет виду увековечиваться. Качество спермы является важным показателем мужской фертильности и, таким образом, успешности размножения. Методы извлечения спермы и анализ спермы хорошо документированы для многих видов, включая телеостных рыб. Сбор спермы относительно прост у более крупных рыб, но может быть более сложным у мелких модельных рыб, поскольку они производят меньше спермы и являются более деликатными. В данной статье, таким образом, описаны два метода сбора спермы у маленькой образцовой рыбки, японской медаки: рассечение яичек и массаж живота. Эта статья демонстрирует, что оба подхода возможны для медаки и показывает, что массаж живота может быть выполнен повторно несколько раз, поскольку рыба быстро восстанавливается после процедуры. В данной статье также описан протокол компьютерного анализа спермы в медаке для объективной оценки нескольких важных показателей качества сперматозоидов медака (подвижность, прогрессивность, продолжительность подвижности, относительная концентрация). Эти процедуры, указанные для этой полезной модели малого телеоста, значительно улучшат понимание экологических, физиологических и генетических факторов, влияющих на фертильность у самцов позвоночных.
Японская медака - это небольшая, откладывающая яйца пресноводная рыба, родом из Восточной Азии. Medaka стала отличной модельной системой позвоночных для экотоксикологии, генетики развития, геномики и эволюционной биологии и физиологических исследований 1,2. Подобно популярным рыбкам данио, они относительно просты в разведении и очень устойчивы ко многим распространенным заболеваниям рыб 1,2. Существует несколько преимуществ использования медаки в качестве модели, включая короткое время генерации, прозрачные эмбрионы 1,2
Все эксперименты и обращение с животными проводились в соответствии с рекомендациями по благополучию экспериментальных животных в Норвежском университете естественных наук (NMBU). Эксперименты проводились с использованием взрослого (6-9-месячного) самца японской медаки (штамм Hd-rR), выращенного в NMBU (Ос, Норвегия). Методы также были кратко протестированы на 9-месячном самце японской медаки (штамм CAB), выращенном в Национальном научно-исследовательском институте сельского хозяйства, продовольствия и окружающей среды (INRAE, Ренн, Франция).
1. Подготовка инструмента и раствора
Тип полученных данных
Анализ подвижности сперматозоидов с помощью программного обеспечения SCA Evolution предоставляет данные о подвижности (процент подвижных и неподвижных сперматозоидов), а также о прогрессивности (процент прогрессивных и непрогрессирующих сперматозоидов) и .......
Осмоляльность является важным фактором активации сперматозоидов рыб36,37. Как правило, сперматозоиды являются бессодержательными в яичках и становятся подвижными в средах, которые являются гиперосмотическими относительно семенной жидкости для морских .......
Авторам нечего раскрывать.
Эта работа была профинансирована Норвежским университетом естественных наук и американской программой Фулбрайта. Авторы хотели бы поблагодарить Энтони Пелтье и Лурдес Карреон Г Тан в NMBU за обслуживание рыбного хозяйства и Гийома Гурмелина из ISC LPGP в INRAE (Франция) за предоставление рыбы и лабораторных помещений для дальнейшего тестирования этих методов.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.5 mL tubes | Axygen | MCT-150-C | Any standard brand can be used |
10 µL disposable calibrated glass micropipette and aspirator tube assembly | Drummond | 2-000-010 | |
10x objective with phase contrast | Nikon | MRP90100 | |
2 mL tubes | Axygen | MCT-200-c-s | Any standard brand can be used |
Blunt forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | |
Blunt smooth forceps | Millipore | XX6200006P | |
Disposable 20 micron counting chamber slide | Microptic | 20.2.25 | Leja 2 chamber slides |
Dissecting microscope | Olympus | SZX7 | Any standard brand can be used |
Fine forceps | Fine Science Tools | 11253-20 | |
HBSS | Sigmaaldrich | H8264-1L | |
Holding sponge | self-made | ||
Inverted microscope | Nikon | Eclipse Ts2R | |
SCA Evolution | Microptic | ||
Small dissecting scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
Sodium Chloride (NaCl) | Sigmaaldrich | S9888 | |
Tabletop vortex | Labnet | C1301B | |
Tricaine | Sigmaaldrich | A5040 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены