Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь представлена разработка для стабильного получения высококачественных срезов криостата ганглия заднего корешка.

Аннотация

Высококачественные криостатные срезы ганглия заднего корешка мыши (DRG) имеют решающее значение для правильного иммунохимического окрашивания и РНК-скопических исследований при исследовании воспалительной и нейропатической боли, зуда, а также других периферических неврологических состояний. Тем не менее, по-прежнему остается сложной задачей получение высококачественных, неповрежденных и плоских срезов криостата на предметных стеклах из-за крошечного размера образца ткани DRG. До сих пор нет статьи, описывающей оптимальный протокол криосекции DRG. Данный протокол представляет собой пошаговый метод разрешения часто встречающихся трудностей, связанных с криосекционированием DRG. В представленной статье объясняется, как удалить окружающую жидкость из образцов тканей DRG, разместить секции DRG на предметном стекле, обращенные к одной и той же ориентации, и сплющить срезы на предметном стекле, не искривляя его. Несмотря на то, что этот протокол был разработан для криосекции образцов DRG, он может быть применен для криосекции многих других тканей с небольшим размером образца.

Введение

Ганглий дорсального корешка (DRG) содержит первичные сенсорные нейроны, тканевые макрофаги и клетки-сателлиты, которые окружают первичные сенсорные нейроны 1,2,3,4. Он является ключевой анатомической структурой в обработке безобидных и вредных сигналов и играет решающую роль в боли, зуде и различных заболеваниях периферических нервов 5,6,7,8,9,10,11,12,13.

протокол

Для настоящего исследования эксперименты на животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию UCSF и проводились в соответствии с Руководством NIH по уходу и использованию лабораторных животных. Здесь использовали взрослых 8-12-недельных самцов и самок мышей C57BL/6 (собственного выведения).

1. Подготовка проб DRG

  1. Обезболивайте мышей 2,5% Авертином (см. таблицу материалов). Обеспечьте адекватную анестезию отсутствием реакции на болевую стимуляцию. Транскардиально проводят животным 1x фосфатно-солевой буфер (PBS) с последующим введением 4% формальдегида, как о....

Результаты

В текущем исследовании было собрано около 16 непрерывных, высококачественных срезов DRG от одной мыши L4 DRG. Полученные участки были без каких-либо искажений. На рисунке 1 изображена пошаговая процедура криосекции. Удаление лишней жидкости из срезов тканей показано на

Обсуждение

Этот протокол обеспечивает простую пошаговую процедуру криостатного секционирования DRG мыши для надежного получения высококачественных DRG срезов на предметных стеклах. В этом протоколе есть четыре критически важных шага. Во-первых, образец DRG и пинцет должны быть сухими, прежде чем по?.......

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Никакой.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
AvertinSigma-AldrichT48402-25GAnesthetize animal
Epredia Cryotome Cryostat Cryocassettes, 25 mm dia. CrosshatchedFisherbrand1910Hold the OCT section at the bottom 
Ergo TweezersFisherbrandS95310Using the end of a tweezer to gently touch the bottom (6 o’clock) of the section so that it sticks to the platform surface to prevent the section from curving back in a roll 
Fisherbrand Superfrost Plus Microscope SlidesFisherbrand1255015To collect the DRG section 
Marking pensFisherbrand133794 Mark the orientation of base OCT
Scigen Tissue-Plus O.C.T. CompoundFisherbrand 23730571Embedding medium for frozen tissue specimens to ensure optimal cutting temperature (O.C.T.).

Ссылки

  1. Guan, Z., et al. Injured sensory neuron-derived CSF1 induces microglial proliferation and DAP12-dependent pain. Nature Neuroscience. 19 (1), 94-101 (2016).
  2. Yu, X., et al.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

196

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены