Методика внутрибрюшинной инъекции взрослым рыбкам данио, которая сводит к минимуму повреждение организма и связанную с ним смертность

Резюме

Описан новый метод внутрибрюшинного (IP) введения взрослым рыбкам данио. При работе с токсичными соединениями, такими как доксорубицин, эта процедура более эффективна, чем два ранее описанных метода IP. Этот метод разработан таким образом, чтобы его можно было легко использовать исследователям с ограниченным опытом работы с моделью рыбок данио.

Аннотация

Взрослая рыбка данио рерио (Danio rerio), которая генетически доступна, используется в качестве ценной модели позвоночных для изучения заболеваний человека, таких как кардиомиопатия. Внутрибрюшинная инъекция (ВП) является важным методом, который доставляет соединения в организм либо для тестирования терапевтических эффектов, либо для создания моделей заболеваний, таких как доксорубицин-индуцированная кардиомиопатия (ДВС-синдром). В настоящее время существует два метода внедрения IP. Оба метода имеют ограничения при работе с токсичными соединениями, такими как доксорубицин, что приводит к побочным эффектам, проявляющимся в виде серьезного повреждения формы тела и гибели рыб. Несмотря на то, что эти недостатки могут быть преодолены путем обширной подготовки следователей, желателен новый метод инъекции IP, который имеет минимальные побочные эффекты. В этой статье сообщается об уникальном методе инъекции IP, который способен работать с токсичными соединениями. Постоянное снижение сердечной функции может привести к значительному падежу рыбы. Методику могут легко освоить исследователи, имеющие минимальный опыт работы со взрослыми рыбками данио.

Введение

Рыбка данио-рерио (Danio rerio) привлекла внимание в качестве экспериментальной модели для изучения болезней человека, потому что это животное включает в себя высокую гомологию генов и органов человека, внешнее оплодотворение, простоту генетических манипуляций и прозрачность тела в раннем возрасте, что облегчает^{множество приложений} визуализации. В отличие от простого процесса доставки лекарств непосредственно в воду для эмбрионов и личинок данио-рерио, введение лекарств взрослым рыбкам данио представляет собой более сложную и трудную задачу^.

У взрослых рыб соединения могут доставлятьс....

протокол

Все проводимые процедуры были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию клиники Майо в соответствии со стандартами, изложенными в «Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных» (National Academies Press, 2011). Все рыбки данио, участвовавшие в исследовании, относятся к штамму дикого индийского кариотипа (WIK). Подробная информация о реактивах и оборудовании, использованном для исследования, приведена в Таблице материалов.

1. Приготовление и хранение стокового раствора доксорубицина

1. Получите запас доксорубицина из коммерческого источника.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Доксорубицин ....

Результаты

Ранее для введения доксорубицина^{взрослым рыбкам} данио ^4,10 применяли два внутрибрюшинных (ВП) метода. В методе I, также известном как классический метод инъекции IP, описанный Kinkel et ^al.4, игла вводилась под углом 45° к средней линии между брюшными п.......

Обсуждение

В отличие от двух существующих способов внедрения IP ^4,10, новый способ внедрения IP характеризуется следующими отличительными особенностями. Во-первых, используется уникальный угол проникновения иглы (близкий к нулю); во-вторых, игла проникает в рыбу чер?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL NanoFil-syringe	World Precision Instruments, Inc	NANOFIL	injection tool
34 G needle	World Precision Instruments, Inc	NI34BV-2	injcetion tool
60 mm Petri dish	fisher scientific/fisherbrand	FB0875713A	placing the sponge
Dissecting microscope	Nikon	SMZ800	Injceting the Dox
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG	drug for creating DIC model
Echocardiography	VISUAL SONICS	Vevo 3100	measuring cardiac function
Foam Sponge	Jaece Industries	L800-D	placing the fish
Hank's balanced salt solution (HBBS)	Thermo Fisher	14025076	Vehicle for Dox
Microcentrifuge	southernlabware	MyFuge/C1012	collect the Dox solution
Precision Balance Scale	Torbal	AD60	Digital scales
Tricaine	Argent	MS-222	Anesthetizing fish
Tube	Eppendorf	1.5 mL	storage
vevo LAB  software	FUJIFILM VISUAL SONICS	5.6.0	quantification of the heart