Модель резервуарного илеита у крыс после проктоколэктомии и подвздошно-анального анастомоза с использованием декстрана сульфата натрия

Резюме

В этом протоколе описан метод создания крысиной модели резервуарного илеита. Модель подвздошного мешка была создана путем проведения операции подвздошно-анального анастомоза (IPAA) с использованием микрохирургических методов. После операции крысу обрабатывали 4% декстрана сульфатом натрия (ДСС) в течение 4 дней.

Аннотация

Язвенный колит (ЯК) – это хроническое иммуноопосредованное заболевание, поражающее всю толстую и прямую кишку с рецидивирующим и ремиттирующим течением, вызывая пожизненную заболеваемость. Когда медикаментозное лечение неэффективно, особенно в случаях массивного желудочно-кишечного кровотечения, перфорации, токсического мегаколона или канцерогенеза, хирургическое вмешательство становится последней линией обороны для лечения ЯК. Тотальная колоректальная резекция и анальный анастомоз подвздошной кишки (IPAA) дают наилучшие шансы на долгосрочное лечение. Резервуарный илеит является наиболее распространенным и проблемным послеоперационным осложнением. В этом исследовании микрохирургия используется для создания модели подвздошного мешка у экспериментальных крыс с помощью хирургии IPAA. Впоследствии была создана устойчивая модель резервуарного илеита на крысах путем индуцирования воспаления подвздошной кишки декстрансульфатом натрия (DSS). Успешное установление яленого мешка у крыс подтверждается анализом послеоперационного общего состояния, веса, потребления пищи и воды, данных кала, а также патологии тканей мешка, иммуногистохимии и анализа факторов воспаления. Эта экспериментальная животная модель резервуарного илеита обеспечивает основу для изучения патогенеза и лечения этого состояния.

Введение

Резервуарный илеит является неспецифическим воспалением, которое поражает подвздошный мешок и является распространенным осложнением после тотальной проктоколэктомии и анального анастомоза подвздошной кишки (ИПХА) у лиц с язвенным колитом (ЯК)^1,2,3. Это состояние имеет относительно высокую частоту встречаемости до 50% и может вызывать различные клинические проявления, включая диарею, боли в животе, потерю каловой крови и лихорадку. Точная причина резервуарного илеита остается неясной, хотя некоторые исследователи считают, что сдвиг в флоре меш....

протокол

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с политикой этических комитетов Больницы общего профиля Тяньцзиньского медицинского университета. Для этого исследования были использованы самцы крыс Sprague-Dawley в возрасте от 9 до 12 недель и весом примерно 320-360 г. Подробная информация об используемых реагентах и оборудовании приведена в Таблице материалов.

1. Отбор и содержание животных

1. Выберите здоровое животное (масса тела ~220-240 г).
2. Убедитесь, что они соответствуют критериям специфического уровня отсутствия патогенов (SPF)

Результаты

Общая оценка состояния крыс с модельным подвздошным мешком после приживления
После того, как оператор прошел кривую хирургического обучения IPAA, крысы хорошо переносили операцию, продолжительность операции составила 192,94 мин ± 27,15 мин, и возникло меньше пос?.......

Обсуждение

Язвенный колит (ЯК) – это хроническое воспаление кишечника, характеризующееся периодическими болями в эпигастрии, диареей и кровавым стулом со слизью. В первую очередь он поражает прямую кишку и может поражать прогрессирующую толстую кишку в разной степени. Хирургич.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anhydrous ethanol	Tianjin Fengchuan Chemical Reagent Technology Co., Ltd	China	Hematoxin-eosin Staining
Dextran Sulfate Sodium	Yeasen	60316ES76	Used to induce pouch inflammation
Formaldehyde solution	Tianjin Zhiyuan Reagent Company	China	Hematoxin-eosin Staining
Gauze	Jiangxi Zhonggan Medical Equipment Company	China	Used for animal microsurgery
Hematoxylin	Beijing Zhongshan Jinqiao Company	China	Hematoxin-eosin Staining
Interferon γ  Detection reagent kit	Cloud-clone	SEA049Ra	Detecting inflammatory factors
Interleukin-10 detection kit	Cloud-clone	SEA056Ra	Detecting inflammatory factors
Interleukin-17 detection kit	Cloud-clone	SEA063Ra	Detecting inflammatory factors
Interleukin-6 detection kit	Cloud-clone	SEA079Ra	Detecting inflammatory factors
Iodophor	Tangpai Medical Equipment Co., Ltd	China	Used for animal microsurgery
Microscopic manipulation instruments	Aesculap	Germany	Used for animal microsurgery
Occludin	abcam	ab216327	Immunohistochemical testing
Sewing needle	Yangzhou Fuda Medical Equipment Co., Ltd	China	Used for animal microsurgery
tumor necrosis factor α Detection reagent kit	Cloud-clone	SEA133Ra	Detecting inflammatory factors
Two person binocular surgical microscope	OPTON	Germany	Used for animal microsurgery
Xylene	Tianjin Yingda Rare and Precious Reagent Factory	China	Hematoxin-eosin Staining