Сердечная нагрузка с использованием пассивного давления в левом предсердии и пассивной постнагрузки для оценки трансплантата

Резюме

Протокол описывает систему перфузии сердца ex vivo для свиней, в которой прямая нагрузка на левый желудочек может служить методом оценки здоровья трансплантата и одновременно обеспечивать целостную оценку функции трансплантата. Также приводится обсуждение конструкции системы и возможных метрик оценки.

Аннотация

Машинная перфузия ex vivo или нормотермическая машинная перфузия – это метод консервации, который приобрел большое значение в области трансплантации. Несмотря на огромные возможности для оценки из-за бьющегося состояния сердца, текущая клиническая практика зависит от ограниченных метаболических тенденций для оценки трансплантата. Гемодинамические измерения, полученные с помощью нагрузки на левый желудочек, привлекли значительное внимание в этой области благодаря их потенциалу в качестве объективных параметров оценки. По сути, этот протокол обеспечивает простой и эффективный способ включения возможностей нагрузки в существующие перфузионные системы Лангендорфа путем простого добавления дополнительного резервуара. Кроме того, это демонстрирует возможность использования пассивного давления в левом предсердии для нагрузки, подхода, который, насколько нам известно, ранее не демонстрировался. Этот подход дополняется пассивной базой Виндкесселя, которая действует как податливая камера для максимальной перфузии миокарда во время диастолы. Наконец, в нем подчеркивается возможность фиксации функциональных показателей во время сердечной нагрузки, включая пульсовое давление левого желудочка, сократимость и расслабление, для выявления дефицитов в функции сердечного трансплантата после длительных периодов сохранения (˃6 часов).

Введение

Ортотопическая трансплантация сердца в настоящее время является золотым стандартом лечения терминальной стадии сердечной недостаточности¹. К сожалению, эта область значительно ограничена из-за серьезного кризиса нехватки доноров, в результате чего ежегодно проводится всего 2000 операций по пересадке сердца, в то время как более 20 000 человек могли бы получить пользу^{от этой жизненно} важной процедуры. Ожидается, что эта нехватка органов усугубится, поскольку распространенность сердечной недостаточности только в Соединенных Штатах, по прогнозам, превысит 8 миллионов человек к 2030^году. Неуклонное увеличение времени выживаемости в листе ожидания - в результате улучшения медицинского ведения, достижений в области механической поддержки кровообращения и поправок к политике распределения UNOS - привело к дальнейшему увеличению числа пациентов, нуждающихся в трансплантации в^{любой данный момент4,5}.

Машинная перфузия ex vivo или нормотермическая машинная перфузия (NMP) является методом сохранения, который способствовал расширению пула поставок, позволяя использовать органы, пожертвованные после смерти от кровообращения (DCD), при одновременном некотором увеличении времени сохранения ^5,6,7,8. В отличие от статического холодного хранения, который в настоящее время является золотым стандартом для консервации, NMP поддерживает органы в метаболически активном состоянии, что создает возможность для мониторинга и оценки трансплантата в режиме реального времени, став стандартным методом консервации для трансплантатов DCD ^8,9. Тем не менее, устройства NMP, используемые в настоящее время в клинической практике, ограничены режимом перфузии Лангендорфа, в котором отсутствуют количественные метрики для прогнозирования результатов трансплантации и который не может фиксировать^{функциональные параметры.} Например, накопление лактата во время перфузии Лангендорфа было определено как лучший метаболический предиктор результатов после трансплантации и в настоящее время используется в клинических условиях в качестве^{показателя здоровья} сердечного трансплантата. Однако, даже будучи лучшим биомаркером оценки, он не в состоянии надежно предсказать потребность в механической поддержке кровообращения после трансплантации^11,12. Аналогичным образом, прогностические возможности широко используемых гемодинамических параметров (т.е. давления в аорте и коронарного кровотока) в значительной степени ограничены ретроградным характером современных клинически используемых конфигураций для перфузии сердечного аппарата.

Разработка протоколов оценки для точного и точного определения здоровья сердечного трансплантата во время NMP окажет огромное влияние в этой области, помимо улучшения результатов после трансплантации. Объективные прогностические инструменты позволили бы надежно оценить и вероятно использовать органы по маргинальным или расширенным критериям (т.е. длительная теплая (> 30 мин) и холодная ишемия (> 6 ч), увеличенный возраст донора (> 55 лет), другие сопутствующие заболевания и т.д.) как от ДКД, так и от доноров со смертью мозга (ДБД), которые в настоящее время отторгнуты для трансплантации из-за строгих критериев отбора¹³. Позволяя использовать пограничные сердца, NMP может способствовать увеличению поставок органов, поскольку, по оценкам, успешной трансплантации половины сердец, которые в настоящее время не используются, будет достаточно для ликвидации списка ожидания сердца в течение 2-3 лет^. Гемодинамические измерения, полученные из нагрузки на левый желудочек во время НМП, привлекли значительное внимание в этой области благодаря их потенциалу в качестве объективных параметров оценки. Предыдущие исследования показали, что эти параметры, такие как пульсовое давление левого желудочка, сократительная способность и расслабление, больше указывают на функцию сердечного трансплантата, чем метаболические тренды 15,16,17.

По сути, усилия были направлены на разработку и определение оптимальных методов загрузки для обеспечения максимальной точности оценки. Благодаря этим усилиям другие группы определили наиболее релевантный режим перфузии аорты во время нагрузки, при этом более сильная корреляция между гемодинамическими параметрами и посттрансплантационной функцией наблюдалась при реализации пассивной постнагрузки (т.е. отсутствие ретроградной перфузии аорты во время нагрузки) по сравнению с постнагрузкой с насосной поддержкой (т.е. ретроградная перфузия аорты во время нагрузки)¹⁸. Это указывает на то, что вспомогательная коронарная перфузия, вероятно, маскирует функциональные недостатки. В предыдущих исследованиях были успешно внедрены пассивные постнагрузки в перфузионные установки путем внедрения систем, имитирующих эффект Виндкесселя 18,19,20. Эффект Виндкесселя помогает ослабить колебания артериального давления, поддерживать непрерывный приток крови к тканям и улучшать коронарную перфузию. Этот протокол обеспечивает пассивную постнагрузку на основе Виндкесселя с использованием модифицированного внутривенного (IV) мешка, заключенного в две подпружиненные пластины, где коронарная перфузия зависит исключительно от выброса сердца (подана заявка на патент).

Использование пассивного наддува левого предсердия (ЛП) (т.е. гравитационно-зависимого наддува) во время нагрузки, хотя и является обычной практикой при перфузии сердца мелких животных, редко используется при нагрузке на большие сердца 21,22,23. Вместо этого подавляющее большинство методов, описанных в литературе, полагаются на вторичные насосы для повышения давления LA 18,24,25,26,27,28. Нагнетание давления в ЛА через гравитационный резервуар, а не с помощью насоса, значительно упрощает выполнение протоколов нагрузки. Использование силы тяжести обеспечивает постоянный источник давления, что значительно снижает потребность в сложных системах управления для достижения и поддержания адекватного давления LA. Кроме того, благодаря такому подходу к нагнетанию давления отпадает необходимость во вторичном насосе, что облегчает включение возможностей загрузки в существующие установки Langerdoff, поскольку требуется только дополнительный резервуар. Интеграция возможностей загрузки в клинически используемые системы машинной перфузии расширит применение сердечных устройств NMP, облегчив детальную оценку сердечных трансплантатов в течение периода хранения. По сути, максимизация полезности системы, которая требует значительных финансовых затрат на уход за пациентами из-за транспортировки и использования устройств²⁹.

Этот протокол демонстрирует возможность использования как пассивной постнагрузки, так и пассивного давления ЛП во время нагрузки на левый желудочек. Благодаря валидации пассивной последующей нагрузки/наддува LA в качестве метода нагрузки, этот протокол также обеспечивает простой и эффективный способ включения возможностей нагрузки в существующие системы перфузии Лангендорфа. Важно отметить, что в нем подчеркивается способность функциональной оценки выявлять различия между жизнеспособными и больными сердцами после длительных периодов сохранения (˃6 ч).

протокол

Это исследование было проведено в соответствии с Комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC), Массачусетской больницей общего профиля и рекомендациями Джоува для животных. Сердца (170 - 250 г) заготавливали от йоркширских свиней (30 - 35 кг, возраст 3-4 месяца, смешанный пол) по модели донорства после смерти мозга и перфузию ретроградно (Лангендорфа) в течение 6 ч перед загрузкой. Все трансплантаты подвергались воздействию холодной ишемии в течение примерно 1 часа во время инструментария.

1. Проектирование системы

1. Убедитесь, что система состоит из органной камеры (11,046 x 7,595 x 3,095 дюйма), двух резервуаров (4 л и 1 л), одного оксигенатора с двойной рубашкой и мешка Виндкесселя (WB). Убедитесь, что оба резервуара содержат встроенный пеногаситель, который исключает вспенивание.
2. Убедитесь, что компоненты надежно соединены силиконовыми трубками, при этом меньший резервуар, WB и камера органа находятся в двух различных конфигурациях (рис. 1A) в зависимости от модальности перфузии (т. е. Лангендорфа против нагрузки).
   1. Соедините основание камеры органа с верхней частью большого (венозного) резервуара с помощью трубки диаметром 3/8 дюйма. Поместите большой резервуар ниже камеры органа, чтобы сила тяжести могла циркулировать перфузат из камеры в резервуар.
   2. Соедините дно большого резервуара с впускным отверстием головки насоса с помощью трубки 3/8 дюйма.
   3. Подсоедините выпускное отверстие головки насоса к трубке 3/8 дюйма, оснащенной редуктором от 3/8 дюйма до 1/4 дюйма и трубкой 1/4 дюйма на другом конце. Подсоедините 1/4 дюйма к впускному отверстию оксигенатора.
   4. Установите выходное отверстие оксигенатора с помощью трубки диаметром 1/4 дюйма с Y-образным разъемом на конце. Установите оба конца Y-образного соединителя с помощью трубки 1/4 дюйма.
   5. Последовательность 1 - Схема течения перфузата во время перфузии по Лангендорфу (синяя пунктирная линия на рисунке 1A)
      1. Установите на первый конец Y-образного разъема расширитель от 1/4 дюйма до 3/8 дюйма со встроенным люэровским соединением. Подсоедините трубку 3/8 дюйма к первому порту в нижней части белого. Прикрепите трехходовой люэровский клапан к люэровскому соединению на экспандере и используйте его для капельной подачи аденозина.
   6. Последовательность 2 - Схема течения перфузата во время нагруженной перфузии (оранжевая пунктирная линия на рисунке 1A)
      1. Прикрепите второй конец Y-образного соединителя к верхней части меньшего (загрузочного) резервуара. Прикрепите хомут Хоффмана к трубке и используйте его для контроля наполнения резервуара.
      2. Проложите линию перелива от верхней части загрузочного резервуара к большему резервуару.
      3. Установите на дно загрузочного резервуара трубку диаметром 1/4 дюйма и подключите к порту в основании камеры органа. Добавьте трехходовой люэровский клапан на полпути по длине трубки для доставки аденозина и односторонний клапан прямо перед тем, как достичь камеры органа.
      4. Присоедините другой конец порта камеры органа к канюле под прямым углом.
   7. Поместите мешок Windkessel (WB) прямо над камерой органа. Установите второй переливной порт в нижней части белого пузыря с помощью трубки 3/8 дюйма и подсоедините к любому входному отверстию венозного резервуара. Прикрепите зажим Хоффмана и полностью закройте его, чтобы остановить подачу жидкости через этот порт во время Лангендорфа, и отрегулируйте в режиме нагрузки для модуляции давления в аорте.
   8. Подсоедините трехходовой клапан Люэра к перепускному отверстию в верхней части ВБ и с помощью трубки 1/4 дюйма подсоедините ББ к любому входному отверстию в венозном резервуаре. Прикрепите зажим Хоффмана к трубке диаметром 1/4 дюйма. Держите зажим полностью закрытым во время перфузии Лангендорфа и регулируйте в режиме нагрузки для модуляции давления в аорте.
   9. Подключите третье отверстие оттока на белом выключателе к порту аорты в камере органа через трубку 3/8 дюйма с прерыванием нижней 3/4 длины для датчика температуры.

2. Подготовка перфузатной системы

1. Приготовьте базовый перфузат, состоящий из 0,96% буфера Кребса-Хенселеита, 9,915 мМ декстрана, 25 мМ бикарбоната натрия, 1,054 мМ бычьего сывороточного альбумина, 1% стрептококка Пена, 0,13% инсулина, 0,02% гидрокортизона, 0,5% гепарина и 2,75 мМ хлорида кальция. Доведите объем до 4 л с помощью дистиллированной воды.
2. Настройка системы перфузии
   1. Промойте все трубки, компоненты системы и резервуары дистиллированной водой и снова подключите их в правильной последовательности (рис. 1A).
   2. Поместите мешок Windkessel между двумя акриловыми пластинами и затяните его с помощью винтовой пружины (дополнительный рисунок 1).
   3. Присоедините трехходовой люэровский клапан к люэровскому соединению аортального порта и предсердного порта камеры органа (рис. 1B). Подключите два датчика давления к органному ящику, один на клапане, подключенном к аортальному порту в верхней части органной камеры, и один на клапане, подключенном к предсердному порту в нижней части органной камеры.
   4. Откалибруйте датчики давления, открыв их для доступа воздуха (давление 0 мм рт.ст.) и установив это показание на 0 в записывающем устройстве.
   5. Подключите два датчика расхода к трубке системы. Подключите датчик, измеряющий расход в аорте, к трубке 3/8 дюйма, соединяющей ББ с аортальным портом. Подключите датчик, измеряющий расход предсердий, к трубке, соединяющей загрузочный резервуар с предсердным портом.
   6. Подсоедините датчик температуры к трубке диаметром 3/8 дюйма, соединяющей белый к аортальному порту. Подсоедините трубку для удаления воздуха к третьему порту клапана, прикрепленного к порту аорты, и всегда держите его открытым. Подсоедините другой конец магистрали к любому притоку венозного резервуара.
   7. Подключите теплообменник к оксигенатору и установите его на 38 °C. Подсоедините линию 100% кислорода к порту впуска газа на оксигенаторе. Включите кислород до 0,5 л/мин.
3. Грунтовка системы
   1. Добавьте в систему 2 л перфузата с помощью камеры органа. Включите пульсирующий насос и дайте перфузату циркулировать (минуя загрузочный резервуар) до тех пор, пока перфузат не насытится кислородом до минимального pO₂ 400 мм рт.ст., а температура не достигнет ~35 °C.
   2. Дайте перфузату циркулировать и заполните все компоненты системы для удаления воздуха. Массируйте трубки, содержащие остатки пузырьков воздуха, чтобы удалить их. Затем удалите воздух, попавший в аортальный порт, увеличив давление за счет частичной блокировки оттока жидкости и увеличения скорости потока насоса. Это увеличение давления приведет к тому, что воздух будет проходить через продувочную/вентиляционную трубку.
   3. Дайте перфузату циркулировать до тех пор, пока он не достигнет желаемой температуры (37 °C, постоянно контролируемой с помощью температурного зонда), проведите первичную оценку биохимических параметров, чтобы обеспечить правильную концентрацию ионов (Таблица 1) и адекватное насыщение кислородом.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Считывайте уровни ионов и pH после того, как раствор был доведен до температуры (37 °C) и должным образом насыщен кислородом.

3. Заготовка сердечного трансплантата

1. Усыпляют животных внутримышечными инъекциями атропина (0,04 мг/кг), телазола (4,4 мг/кг) и ксилазина (2,2 мг/кг).
2. После введения седативных препаратов переведите животных в операционную и получите венозный доступ с помощью капельницы, установленной в любом ухе.
3. Ввести болюс пропофола (0,16-0,33 мг/кг) через внутривенную капельницу и испытать вредные стимулы через 3 минуты после инъекции. Если рефлексы отсутствуют, интубируйте животное и поддерживайте анестезию путем непрерывной ингаляции изофлурана (3-5%) и внутривенного введения фентанила (5-20 мкг/кг/ч) по мере необходимости.
4. После интубации поместите манжету давления в любую из передних конечностей и подключите датчик ЭКГ на вершине нижней губы для мониторинга насыщения кислородом.
5. Инициируйте капельницу с физраствором и введите ее через внутривенную капельницу уха. Наложите хирургическую простыню на брюшную сторону животного.
6. Введение болюса фентанилцитрата (5 мкг/кг) внутривенно для подготовки к стернотомии.
7. Сделайте вертикальный разрез между грудной выемкой и мечевидным мечом скальпелем с 10 лезвиями (~25 см). После разреза с помощью электрокаутеризации разделите подкожно-жировую клетчатку и фасцию до грудины.
8. После обнажения отделите адгезивный перикард от грудины с помощью тупого рассечения пальцами в каудальной части грудины. Для этого поместите палец на тыльную сторону грудины и отделите любую прилегающую ткань между грудиной и внутренними органами.
9. Вставьте зубило в каудальную сторону грудины. Прикладывая силу к долоту в небо, используйте молоток, чтобы протолкнуть долото через грудную кость.
10. После того, как срединная стернотомия будет завершена, определяется полным отделением грудины (от мечевидной кости до грудинной выемки), установите стернальный ретрактор и откройте его до полного обнажения.
11. Надрезайте перикард черепно ножницами Метценбаума до тех пор, пока не станут видны аорта и легочная артерия.
12. Наложите на аорту два швов из кисетного пучка (4-0 Prolene) и закрепите жгутом из петли. Следите за тем, чтобы швы проходили через медиаслой аорты, а не через просвет. Поверхностные швы не смогут удержать канюлю корня аорты на месте, а глубокие швы вызовут кровотечение из аорты.
13. Введите болюс гепарина (100 ЕД/кг) через внутривенное ухо и дайте ему циркулировать в течение 3 минут.
14. Вставьте канюлю корня аорты 9F перпендикулярно аорте между кисетными швами и закрепите, аккуратно затянув петлю жгута. Убедитесь, что вокруг места канюляции не протекает. Позвольте линии кардиоплегии корневой канюли аорты оступиться, позволив крови течь из аорты.
15. Подсоедините мешок с кардиоплегическим раствором к соединению замка Люэра. Нагнетайте давление в мешок для кардиоплегии с помощью мешка под давлением, чтобы во время промывки было 80 мм рт.ст. Подключите перистальтический насос ко второй линии канюли корня аорты и с его помощью извлекайте 1 л крови непосредственно из аорты.
16. Отделение эритроцитов с помощью устройства для сбора крови (эритроциты центрифугируются и промываются физиологическим раствором). Добавляйте эритроциты в систему перфузии после того, как она достигнет нужной температуры.
17. Как только будет собрано достаточное количество крови, используйте трансторакальный крест, чтобы пережать аорту и открыть кардиоплегическую линию, чтобы промыть орган.
18. Сразу после наложения перекрестного зажима и начала промывки необходимо провести вентиляцию сердца через 5-сантиметровый разрез на придатке левого предсердия и полностью перерезать нижнюю полую вену. Добавьте в это время в грудную полость лед, чтобы помочь снизить температуру органа.
19. После успешного проветривания сильно перевяжите верхнюю полую вену, чтобы теплая кровь из головы не поступала к охлажденному сердцу.
20. После того, как сердце было промыто 1 л раствора кардиоплегии, разделите магистральные сосуды, включая аорту, главную легочную артерию, верхнюю и нижнюю полые вены, а также двусторонние легочные вены. На этом сердечный эксплант завершен. Извлеките сердце из полости.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поддерживайте как можно большую длину больших сосудов, прикрепленных к трансплантату. Перережьте легочные вены как можно ближе к легким.
21. Оберните орган лапаротомической губкой и положите его на лед.

4. Подготовка прививки

1. Обрежьте ветви дуги аорты так, чтобы получился один выходной тракт. Вставьте канюлю аорты через этот тракт и закрепите стяжкой на молнии и шелковым швом 4-0 (Рисунок 2).
2. Поместите биполярную электрокардиостимуляционную проволоку на заднюю стенку правого желудочка. Разрежьте легочные вены так, чтобы образовался единый входящий тракт в левое предсердие.
3. Создайте два кисетных шва 4-0 пролин по периметру левого предсердного тракта. Закрепите швы жгутовыми силками и оставьте развязанными до загрузки.
4. Закройте ушок левого предсердия с помощью простого непрерывного шва (4-0 Prolene). Запишите начальный вес сердца.

5. Реанимация сердечного трансплантата

1. Зажмите трубку 3/8 дюйма прямо перед аортальным портом, чтобы остановить поток перфузата. Расположите сердце задней стенкой лицом к оператору. Наклоните камеру органа примерно на 20°.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Такое положение перфузии трансплантата выбрано для усиления пассивного дренажа и согласуется с ранее опубликованными данными, демонстрирующими значительное улучшение функции по сравнению с висячим^{положением 26}.
2. Расположите аортальную канюлю под углом 90° от аортального порта и медленно разжмите аортальную капельницу. Обесцвечивайте аортальную канюлю за счет поступательного потока перфузата в нее.
3. Медленно уменьшайте угол в канюле аорты до тех пор, пока она не окажется на одной линии с аортальным портом и полностью не соединится с аортальной линией.
4. После полного подключения периодически мягко массируйте сердце, чтобы предотвратить вздутие из-за наполнения левого желудочка. В этот период следует провести вентиляцию левого желудочка через открытое левое предсердие.
5. Одновременно контролируйте давление в аорте и поддерживайте его в пределах допустимого диапазона (30 – 40 мм рт.ст.).
6. Инициируйте сбор данных и начните капельную обработку аденозина со скоростью 333 мкл/мин
   Примечание: Аденозин (2 мг/мл) добавляется в протокол перфузии для имитации современных условий клинической перфузии. Тем не менее, важно отметить, что связанная с этим вазодилатация может усугубить нежелательный отек органов 30,31,32.
7. Подсоедините провода для электростимуляции к коробке для электростимуляции и установите ее на 60 ударов в минуту в качестве резервной.
8. Если фибрилляция присутствует, дефибриллируйте сердце с помощью ракеток мощностью 30 Дж. Нанесите столько ударов, сколько необходимо, пока не достигнете ритмичных сокращений.
9. Как только появится организованный ритм (ритмичный или внутренний), прекратите ручное вентилирование и поместите провода ЭКГ непосредственно на сердце с помощью крючковых игл.
10. Затяните винты на мешке Windkessel до тех пор, пока форма волны, отображаемая датчиком давления в аорте, не будет имитировать синусоиду. Перфузионное сердце в конфигурации Лангендорфа в течение 6 часов, как описано ранее³³.

6. Нагрузка сердечным трансплантатом

1. Подсоедините прямоугольную канюлю к предсердному порту камеры органа. После подключения зажмите канюлю и пропустите жидкость в загрузочный резервуар, отпустив зажим Хоффмана на линии между оксигенатором и загрузочным резервуаром.
2. Заполняйте загрузочный бак до тех пор, пока давление не достигнет 15 - 20 мм рт.ст. Увеличьте мощность насоса, чтобы поддерживать давление как в аорте, так и в предсердии.
3. Вставьте половину прямоугольного металлического наконечника в левое предсердие так, чтобы кончик был направлен к придатку. Такое размещение наиболее последовательно способствует компетентности митрального клапана.
4. Вставьте датчик давления внутрь левого желудочка для регистрации давления в левом желудочке. Отпустите зажим на канюле и дайте левому предсердию заполниться.
5. После депроветривания используйте ранее наложенные швы и петли жгута, чтобы полностью закрыть отверстие левого предсердия. При необходимости отрегулируйте канюлю и силки, чтобы свести к минимуму утечку жидкости.
6. Закрепив канюлю в левом предсердии, полностью остановите ретроградную перфузию аорты, пережав магистраль от оксигенатора к ВБ.
7. Переместите аденозиновую капельницу от линии, ведущей к ВБ, к линии между нагрузочным резервуаром и предсердным портом.

7. Окончание перфузии

1. Записывайте биохимические показания, частоту сердечных сокращений, кровоток в аорте/предсердиях и давление каждые 30 минут в течение всего эксперимента (10 часов). Получение биохимических показаний из предсердной магистрали для измерения притока и непосредственно из легочной артерии для измерения оттока.
2. По окончании перфузии остановите сбор данных, удалите сердце и утилизируйте его.
3. Мобилизуйте незакрепленные части системы в большую раковину, разберите, промойте и очистите большим количеством воды.
4. Как только в компонентах не будет видно остатков крови, соберите систему заново. Добавьте в систему большое количество воды через камеру органа и примерно 100 мл жидкого щелочного моющего средства для циркуляции с водой.
5. После того как моющее средство хорошо смешается с водой, зажмите системные линии, чтобы все резервуары были заполнены раствором моющего средства.
6. Отключите оксигенатор от остальной части системы и еще раз промойте водой, чтобы удалить все мыло.
7. После того, как мыло будет полностью удалено, высушите оксигенатор феном, продувая воздух через вход жидкости с максимально возможной скоростью.

Результаты

Сердца 4 йоркширских свиней (30 - 35 кг) были собраны и сохранены с помощью Langendorff NMP в течение 6 часов перед 4 часами непрерывной загрузки. Данное экспериментальное условие было выбрано в связи с тем, что средняя продолжительность клинической консервации составляет 6 ч (5,1 ±...

Обсуждение

Нормотермическая аппаратная перфузия является мощным методом сохранения и оценки органов, который оказал значительное влияние на область трансплантации сердца, расширив пул донорских сердец взрослого^{человека.} Это расширение является результатом возм...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
4- way Stopcock	Smiths Medical	MX9341L
4-0 Prolene sutures	Ethicon	8711
5-0 Suture	Fine Scientific Tools	18020-50
Aortic Connector	VentriFLO Inc		Custom Made
Aortic root cannula	Medtronic Inc	10012
Bovine Serum Albumin	Sigma	A7906
Calcium Chloride	Sigma	C7902
Cell Saver	Medtronic Inc	ATLG
Cell Saver cartridges	Medtronic Inc	ATLS00
Dextran	Sigma	31389
EKG epicardial leads	VentriFLO Inc		Custom Made
Equipment stand and brackets	VentriFLO Inc		Custom Made
External Pace maker	Medtronic Inc	5392
Falcon High Clarity 50mL conical tubes	Fisher Scientific	14-432-22
Flow Probes	TranSonic Sytems inc	1828
Heparin sodium Injection	Medplus	G-0409-2720-0409-2721
Hollow fiber oxygenator and Venous  Resevior	Medtronic Inc	BBP241	Affinity Pixie, 1L
HTP 1500  Heat Therapy Pump	HTP	6826619
Insulin	Humulin R		MGH Pharmacy
Iworx Data Acquisition System	Iworx	IX-RA-834
Krebs-Henseleit Buffer	Sigma	K3753
Leukocyte Filter	Haemonetics	SB1E
Organ Chamber	VentriFLO Inc		Custom Made
Pacing Wires Biopolar	Medtronic Inc	6495
Penicillin-Streptomycin	ThermoFisher Scientific	15140122
Pressure Trasnducers	Iworx	BP100
Pulsatile Pump	VentriFLO Inc	2100-0270
PVC Tubing	Medtronic Inc	HY10Z49R9
Right Angle Metal Tip Cannula 20F	Medtronic Inc	67318
Sodium Bicarobonate	Sigma	5761
Standard PHD ULTRA CP Syringe Pump	Harvard Aparatus	88-3015
Tourniquet kit 7in	Medtronic Inc	79006
Transonic Flow box	TranSonic Sytems Inc	T402
Venous Resevior	Medtronic Inc	CB841	Affinity Fusion, 4L
WIndKessel Bag	VentriFLO Inc		Custom Made
Y adapter	Medtronic Inc	10005