JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этой статье описано, как собрать устройство, которое можно использовать для сбора молока от лабораторных мышей. Это устройство является недорогим, портативным и позволяет собирать 0,1–0,5 мл молока одним обученным человеком. Также включен подробный протокол доения.

Аннотация

Модели грызунов широко используются в биологии с начала 20-го века для изучения базовой физиологии и биохимических механизмов. В исследованиях лактации и неонатального развития существует необходимость в отборе проб молока для определения состава и того, как экспериментальные манипуляции могут повлиять на молоко, тем самым влияя на развитие новорожденных. Сбор биожидкостей в достаточном количестве у мелких грызунов может быть затруднен. В нескольких исследованиях были продемонстрированы различные методы получения молока от мышей. Тем не менее, эти методы часто требуют как минимум двух обученных сотрудников, что в некоторых случаях может быть сложной задачей.

В этой статье мы демонстрируем модифицированную технику отбора проб молока, основанную на методе, опубликованном в 2009 году. С помощью этого доступного и простого в сборке метода один обученный человек может получить 0,1–0,5 мл молока из матери под анестезией менее чем за 10 минут. Используя этот метод, мы собрали достаточное количество молока на 2-й день после родов (PD2) и на 10-й день после родов (PD10). Мы измерили компоненты молочных макронутриентов и сравнили их с существующей литературой, чтобы проверить наш метод сбора.

Мы зафиксировали, что на PD2 молочный белок в среднем составлял 70,1 ± 5,2 г/л, молочный жир составлял 174,4 ± 7,1 г/л, а молочная лактоза составляла 12,3 ± 0,6 г/л. На PD10, в то время как молочная лактоза и белок оставались в тех же концентрациях, что и на PD2, молочный жир был значительно выше (224,4 ± 17,1 г/л). Мы также заметили, что относительное содержание отдельных молочных белков варьировало в диапазоне от PD2 до PD10. В частности, αS1-казеин и кислый белок сыворотки были выше, в то время как β-казеин был ниже PD10 по сравнению с PD2. В целом, мы демонстрируем эффективную технику отбора проб молока у мышей с помощью одного человека с помощью устройства, которое может быть легко собрано с помощью широко используемого лабораторного оборудования.

Введение

Сравнительная медицина относится к идее о том, что люди и другие животные имеют сходство в анатомии и физиологии; Таким образом, информация, полученная от одного вида, может быть использована для изучения аналогичных путей у другого 1,2. С начала 20-го века грызуны, особенно мыши и крысы, широко используются в биомедицинских исследованиях из-за относительно простых генетических манипуляций дляразработки моделей заболеваний. Кроме того, они относительно небольшие; Таким образом, для поддержания колоний требуется меньше ресурсов по сравнениюс другими моделями млекопитающих, не относящимися к грызунам. Тем не менее, их небольшие размеры тела также сопряжены с проблемами. Некоторые процедуры не могут быть легко выполнены на мышах. Например, артериовенозная разностная техника может быть выполнена на крысах 3,4,5, но она может быть сложной задачей для мышей, так как их мелкие кровеносные сосуды могут легко разорваться. Количество ткани, которое может быть взято у мыши, также ограничено. Например, у кормящих мышей висцеральная жировая ткань значительно уменьшается в размере 8,9 и в некоторых случаях до почти неопределяемых количеств. Кроме того, отбор проб биожидкости у мышей также ограничен по количеству; В зависимости от методики объем образца крови может варьироваться, новсегда несколько ограничен7, что ограничивает количество анализов, которые могут быть выполнены.

В исследованиях лактации и неонатального развития существует необходимость в отборе проб молока для оценки состава и надоев. В исследованиях, проведенных на мышах, из-за ограниченного объема молока образцы часто объединяют с нескольких матерей для получения достаточного количествамолока. В ряде исследований продемонстрированы методы сбора достаточных аналитических объемов молока от одной мыши 11,12,13. Эти методы, однако, обычно требуют двух обученных сотрудников11,12: один для удержания животного во время ручного сцеживания молока, а другой для сбора молока с помощью пипетки; или они требуют оборудования и инструментов, которые не всегда доступны в лаборатории. Здесь мы демонстрируем модификацию техники, разработанной ДеПетерсом и Хови14. Устройство, используемое в этой процедуре, может быть легко собрано с помощью оборудования, имеющегося в лаборатории, или легко приобретено у обычных поставщиков. Используя это устройство, один человек может получить 0,1–0,5 мл мышиного молока менее чем за 10 минут для использования в большинстве анализов. Мы собрали молоко на 2-й день после родов (PD2, ранняя лактация) и на 10-й день после родов (PD10, пик лактации) и измерили содержание макронутриентов в молоке для валидации метода.

протокол

Все процедуры по уходу за животными и экспериментальные процедуры соответствовали федеральным рекомендациям и получили одобрение Комитета по уходу за животными и их использованию в учреждении Университета Рутгерса. Самки мышей (фон C57BL/6) спаривались в возрасте 8 недель. Их кормили стандартным племенным кормом ad libitum и содержали в регулярном цикле свет:темнота 12:12 часов. День доставки засчитывался как 1-й день после доставки (PD1). На PD2 (ранняя лактация) и PD10 (пик лактации) образцы молока отбирали, как описано ниже.

1. Сборка доильного аппарата

  1. Прикрепите один конец трубки из поливинилхлорида (ПВХ) с внутренним диаметром 5/32 дюйма к вакуумному насосу и закрепите крепление с помощью ленты (обозначено как a на рисунке 1A).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вакуумный насос может быть заменен любым подходящим насосом или центральным вакуумом (иногда называемым «домашним вакуумом»), доступным в лаборатории.
  2. Прикрепите другой конец трубки из ПВХ с внутренним диаметром 5/32 дюйма к трубке из ПВХ с внутренним диаметром 1/8 дюйма с помощью прямого соединителя с зазубринами.
  3. Прикрепите другой конец трубки из ПВХ с внутренним диаметром 1/8 дюйма к игле для подкожных инъекций 18G с помощью соединителя (обозначен b на рисунке 1A).
  4. Отрежьте конец наконечника пипетки P200 на ~0,2 см, чтобы создать большее отверстие. Вставьте наконечник пипетки P200 через отверстие стопора перегородки так, чтобы наконечник был направлен вверх (рис. 1B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Меняйте наконечники пипеток между животными.
  5. Прикрепите пробку перегородки к стерильной собирательной трубке. Сделайте прокол через пробку перегородки иглой для подкожных инъекций 18 G.
  6. Проверьте давление всасывания, включив вакуумный насос и приложив палец (закрытый лабораторной перчаткой) к отверстию наконечника пипетки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вы должны почувствовать легкое всасывание, если он собран правильно. Собирательная трубка, игла для подкожных инъекций 18 G и наконечники пипетки P200 должны быть стерильными.

figure-protocol-2338
Рисунок 1: Доильное устройство. (A) Доильное устройство с вакуумным насосом, прикрепленное к игле для подкожных инъекций 18 G с помощью трубки из ПВХ. Игла проходит через пробку перегородки, которая прикреплена к сборной трубке микроцентрифуги. Перевернутый наконечник пипетки P-200, который используется для забора молока из соски, вводится через отверстие в пробке перегородки. (B) Схема поперечного сечения доильного аппарата. (C) Доение плотины с использованием описанного метода. (D) Репрезентативная аликвота (0,3 мл) молока, собранного у матери на пике лактации. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

2. Отделение матери от щенков

  1. В день дойки отделите мать от ее щенков, чтобы молоко накапливалось в железах.
  2. Держите детенышей в тепле в гнезде.
  3. Подождите 2 часа для сепарации, если молоко собрано в период ранней лактации (например, PD2 в этом исследовании).
  4. Подождите 30–45 минут для сепарации, если молоко собрано в период пика лактации (например, PD10 в этом исследовании).

3. Обезболивание плотины

  1. Когда самка будет готова к доению, введите инъекцию раствора кетамина/ксилазина (внутрибрюшинно, внутривенно) в одну сторону брюшинной полости между4-й и5-й парой сосков.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Количество вводимого анестетика рассчитывается по весу плотины (80–100 мг/кг кетамина, 5–12 мг/кг ксилазина, согласно протоколу IACUC Ратгерского университета). Эта доза усыпляет мышь в течение 45–60 минут, обеспечивая достаточное время для сбора молока.
  2. Подтвердите анестезию, сильно сдавливая ногу, но не травмируя ее, чтобы проверить восприятие животного ощущений и боли. На адекватную анестезию указывает отсутствие каких-либо движений.
  3. Нанесите ветеринарную офтальмологическую мазь на глаза матери, чтобы предотвратить сухость во время пребывания под анестезией.

4. Сбор молока

  1. Поместите обезболенную дамбу на ее спину на твердую рабочую поверхность. Аккуратно протрите область молочных желез стерильной спиртовой салфеткой, чтобы очистить область перед доением.
  2. Ввести 1–2 единицы окситоцина (в/в) между4-й и5-й парой сосков на стороне брюшинной полости, которая не получала никаких инъекций.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Окситоцин - это небольшая молекула, которая может быстро усваиваться и имеет короткий период полураспада 14,15. Доение должно начаться в течение минуты после инъекции.
  3. Удерживайте плотину, аккуратно потирая область ее шеи недоминирующей рукой.
  4. Вручную сцеживайте молоко из соска, сжимая ткань молочной железы от основания до кончика соска до тех пор, пока не станет видна бусинка молока.
  5. Включите вакуумный прибор, включив кнопку включения.
  6. Начните доение, аккуратно приложив перевернутый наконечник пипетки P200 к соску. Легкими тянущими движениями вытяните молоко (рисунок 1C).
  7. Повторяйте шаги 4.4–4.6 на всех сосках до тех пор, пока не будет собрано достаточное количество молока.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Во время доения молоко может быть случайно втянуто в иглу для подкожных инъекций 18 G или трубку из ПВХ вакуумной линии. Это можно легко исправить, заменив иглу или трубку из ПВХ перед доением следующего животного.

5. Восстановление матери после сбора молока

  1. Верните наркозированную самку в клетку вместе с ее щенками и согревайтесь. Следите за животным, пока оно не придет в сознание.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мать может отказаться от кормления снова, если ей позволят проснуться в отдельной клетке самостоятельно, прежде чем вернуться к своим щенкам. Это чаще всего происходит, когда сбор молока происходит в период ранней лактации (PD2).
  2. Пусть самки отойдут от ее щенков, чтобы они полностью восстановились, когда она начнет просыпаться; Это нормальное поведение.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы наблюдаем, как самки периодически возвращаются к своим щенкам и полностью возвращаются к кормлению через несколько часов.

6. Анализ молока

  1. Используйте коммерческий набор для анализа лактозы (см. Таблицу материалов) для измерения лактозы в молоке. Разбавьте молоко в 75 раз стерильной водой и проведите анализ в соответствии с протоколом набора.
  2. Измерьте содержание молочного жира с помощью метода крематокрита, продемонстрированного в других публикациях16,17.
  3. Оцените содержание молочного белка с помощью анализа белкаБрэдфорда 18 с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта19. Перед проведением анализа молоко центрифугирует при концентрации 4 000 × г в течение 15 минут при 4 °C. Извлеките инфранатант с помощью пипетирования и разбавьте его до соотношения 1:10 стерильной водой перед анализом.
  4. Провести электрофорез в полиакриламидном геле (ПЕЙДЖ); отделите 10 г белка на сборном 4%–12% геле Bis-Tris в соответствии с инструкциями производителя. Перенесите белки на мембраны из поливинилиденфторида (PVDF) и окрасьте их Coomassie Blue R-250.

Результаты

Используя эту методику, мы успешно отбираем достаточное количество проб молока в разное время в течение 21-дневного лактации. Днем родов мы считаем послеродовой день 1 (PD1), и в данной работе мы брали образцы молока на PD2 (ранняя лактация) и PD10 (пиковая лактация), n = 4 каждый. Мы комфортно получали 0,1–0,5 мл молока от каждой матери (рис. 1D). Чтобы проверить этот метод, мы измерили валовой состав макронутриентов в этих образцах молока и сравнили различия между молоком, собранным в начале и на пике лактации, с помощью t-критерия Стьюдента.

Установлено, что концентрация лактозы в молоке в среднем составляла 12,3 ± 0,6 г/л на PD2 и 12,0 ± 0,9 г/л на PD10 (табл. 1). Процент молочного жира составил 26,0 ± 1,0% и 33,4 ± 2,5% на PD2 и PD10 соответственно. Концентрация жиров составила 174,4 ± 7,1 г/л на PD2 и значительно выше, 224,4 ± 17,1 г/л на PD10 (табл. 1). Среднее содержание белка составляло 70,1 ± 5,2 г/л на PD2 и 75,1 ± 2,6 г/л на PD10 (табл. 1). Хотя общее содержание молочного белка не отличалось между PD2 и PD10, относительное содержание отдельного молочного белка отличалось. В частности, αS1-казеин и кислый белок сыворотки были выше в молоке PD10, чем в молоке PD2 (p < 0,05), в то время как β-казеин (p < 0,05) показал более высокую концентрацию в PD2, чем в PD10 (рис. 2).

figure-results-1639
Рисунок 2: Анализ молочного белка. (A) Анализ молока, собранного в PD2 и PD10, с окрашиванием в синий цвет Coomassie. Идентификацию белка проводили, как описано ранее14. (B) Отдельные белковые сигналы анализировали в ImageJ и нормализовали до окрашенного общего белка. Результаты были выражены в виде среднего значения со стандартными полосами погрешностей и отдельными точками данных в виде точек. Среднее содержание каждого белка на PD2 и PD10 сравнивали с помощью двухстороннего t-критерия Стьюдента. *p < 0,05, n = 4. Сокращения: PAGE = электрофорез в полиакриламидном геле; PDn = день доставки n. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

СреднийСЭМp-значение
Лактоза
(г/л)		ПД212.30.60.75
ПД1012.00.9
Жир
(г/л)		ПД2174.47.10.04
ПД10224.417.1
Белок
(г/л)		ПД270.15.20.42
ПД1075.12.6

Таблица 1: Макронутриентный состав молока, собранного на PD2 и PD10. Результаты, выраженные в виде средней и стандартной ошибки среднего значения (SEM), были проанализированы для изучения влияния дня лактации на состав молока с использованием двухстороннего t-критерия Стьюдента, n = 4.

Обсуждение

Мы продемонстрировали модифицированную технику доения, которую может выполнять один человек с помощью устройства, которое легко собирается и переносится. Традиционно молоко грызунов собирают с помощью капиллярных трубок 10,17, стеклянных пипеток Пастера12 или микропипеток11. Эти методы требуют, чтобы один человек сдерживал плотину и вручную сцеживал молоко, а другой собирал молоко. Иногда это может быть непросто, особенно когда отбор проб молока происходит в выходные или праздничные дни. Собранное этими методами молоко необходимо переложить в стерильные пробирки для хранения. Поскольку молоко грызунов имеет относительно высокое содержание жира (как показано здесь и в других исследованиях20,21) и, следовательно, вязкое, процесс передачи молока, вероятно, приводит к потере объема молока, ограничивая его количество для анализов. Описанное здесь устройство может быть собрано менее чем за 5 минут с помощью инструментов, доступных в лаборатории. Он может быть легко использован одним человеком для отбора проб достаточного объема молока в течение 10 минут. Подход к непрерывному щадящему отсасыванию, связанный с этим методом, снижает проблему потери пробы из-за перекачки, поскольку молоко постоянно втягивается прямо в сборную трубу. Сведение к минимуму потерь проб особенно важно при сборе молока уже на PD2, поскольку известно, что на этой стадии надои молока относительнонизкие. Более того, одно и то же устройство и протокол были использованы для успешного сбора молока от другой линии мышей (фон FVB/N), что позволяет предположить, что этот метод, вероятно, одинаково хорошо работает для всех линий мышей.

В этом исследовании мы также наблюдали, что время разделения может отличаться в зависимости от стадии лактации. В предыдущих исследованиях сообщалось, что матери должны быть отделены от своих детенышей по крайней мере за 2 ч до 16 ч до сбора молока для получения достаточного объема молока11,13. При использовании этого метода мы обнаружили, что отделение матерей от их детенышей на 2 ч в начале лактации (PD2) и всего на 30–45 мин в пик лактации (PD10) было достаточным для получения адекватного объема молока. Поскольку матери требуется дополнительное время для восстановления после анестезии, минимизация продолжительности отделения не только сокращает время отбора проб, но и уменьшает потенциальное воздействие, которое оно может оказать на самку и ее детенышей.

Кроме того, мы обнаружили, что сбор молока уже на уровне PD2 может негативно повлиять на последующий рост детенышей из-за длительного времени разделения и восстановления матери, что приводит к периоду недостаточного кормления. Этого не наблюдалось при отборе проб молока на пике лактации (PD10). Поэтому, если исследователь заинтересован в отборе проб молока в разные моменты времени в течение 21-дневного периода лактации, рекомендуется отбирать пробу молока ранней лактации у отдельного набора матерей. Сбор молока, однако, может быть выполнен на одной и той же самке несколько раз во время пика и поздней лактации для лонгитюдных исследований.

В качестве альтернативы исследователи могут выбрать другие анестетики, чтобы свести к минимуму время восстановления плотины. Например, ингаляция изофлурана может помочь сократить время восстановления, поскольку животные обычно быстро восстанавливаются после прекращения приема изофлурана22. Хотя такой выбор анестезии выполняется многими13,23, сообщается, что ингаляция изофлурана может негативно сказаться на объеме собранногомолока13. Кроме того, ингаляция изофлурана требует соответствующего оборудования для обеспечения точного контроля дозы. Исследования влияния анестетиков, таких как кетамин/ксилазин и изофлуран, на лактацию и состав молока, а также их потенциальной передачи в грудное молоко ограничены 24,25,26. В связи с этим рекомендуется тщательно выполнять интерпретацию данных при сравнении исследований с использованием различных вариантов анестезии. Другой альтернативой является проба молока без анестезии, как описывают другие исследователи 14,27,28,29. Эта процедура, однако, потенциально может вызвать чрезмерную нагрузку на плотину и потребовать дополнительного человека для сдерживания животного.

Это исследование также показало, что анализ макронутриентов может быть выполнен с использованием образцов молока, при этом излишек остается для большего количества процедур, таких как омиксный анализ. Уровни лактозы, белка и жира в молоке были измерены и сравнены с опубликованными данными для валидации описанного метода. Концентрация лактозы в молоке составляла ~1,2% от молочного компонента, что аналогично таковому показателю у мышей на контрольной диете, о котором сообщалось в других исследованиях 30,31,32. Было подтверждено, что мышиное молоко имеет высокий процент жира, колеблющийся от 26% до 33%, как сообщалось ранее20,30. Общая концентрация белка, о которой сообщалось здесь, была аналогична той, о которой сообщали Chen et al.30, но ниже, чем в других исследованиях31,32. Что касается изменений от ранней до пиковой лактации, мы обнаружили, что уровни лактозы и белка оставались относительно постоянными, но процент молочного жира увеличивался от ранней до пиковой лактации. Это не согласуется с Ragueneau32, но расхождение может быть связано с различиями в размере выборки. Несмотря на то, что общая концентрация белка была одинаковой между ранней и пиковой лактацией, мы обнаружили, что индивидуальное содержание белка (αS1-казеин, β-казеин и сывороточный кислый белок) варьировалось, предположительно отражая изменения в потребностях новорожденных на разных стадиях развития.

Хотя этот метод не позволяет количественно оценить производство молока, это можно рассчитать с помощью индекса производительности (IOP), предложенного Фальконером в 1947-33 годах. Выработка молока во многом зависит от размера помета и дня отбора проб. Этот индекс может быть использован в качестве измерения производства молока с учетом разницы в размерах помета. Например, весь помет может быть взвешен по PD10 (когда материнка отделяется для отбора проб молока). Затем ВГД матери рассчитывается путем деления веса ее помета на средний вес пометов того же размера на PD10. В заключение мы демонстрируем эффективный метод отбора проб молока у лабораторных мышей с помощью одного человека с использованием устройства, которое может быть легко собрано с помощью относительно недорогого и легкодоступного оборудования. Этот метод позволяет стабильно собирать достаточное количество молока для большинства анализов.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Эта работа была поддержана NJAES Hatch Project 14190 и NIH R21HD 108496.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1 mL cryogenic vialsCorning430658Preferred for early milk collection
1 mL syringeExel26048
2 mL microcentrifuge collecting tubeFisher Scientific02-681-344Preferred for peak and late milk collection
18 G hypodermic needleBD PrecisionGlide305195
27 G hypodermic needleBD PrecisionGlide305109
Alcohol prep wipeHoneywell154818
Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent ConcentrateBio-Rad5000006
Bovine Serum AlbuminSigma-AldrichA2153
Immobilon -P PVDF MembraneImmobilonIPVH00010
KetamineDechra1000001250Purchased via Veternarian Office 
Laboratory labeling tapeVWR International89097
Lactose Assay KitSigma-AldrichMAK487
Mini Barbed polypropylene fittingsCole-Parmer Instrument Company6365-90
Mouse dietLab Diet5015
NuPAGE Bis-Tris Mini Protein Gels, 4–12%InvitrogenNP0335BOX
Optixcare Eye LubeAventixN/APurchased via Veternarian Office 
OxytocinBimeda1OXY015Purchased via Veternarian Office 
P200 pipette tipsGilsonF1733001
PVC tubing: 1/8'' IDVWR InternationalMFLX07407-75 
PVC tubing: 5/32'' IDVWR InternationalMFLX07407-77
Septum stopperChemglass Life SciencesCG-3022-91
Vacuum pumpDrummond Scientific Co.P-103635
XylazineAkorn Animal HealthNDC 59399-110-20Purchased via Veternarian Office 

Ссылки

  1. Ericsson, A. C., Crim, M. J., Franklin, C. L. A brief history of animal modeling. Mo Med. 110 (3), 201-205 (2013).
  2. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  3. Watford, M., Erbelding, E. J., Smith, E. M. Glutamine metabolism in rat small intestine: Response to lactation. Biochem Soc Trans. 14 (6), 1058-1059 (1986).
  4. Robinson, A. M., Williamson, D. H. Comparison of glucose metabolism in the lactating mammary gland of the rat in vivo and in vitro. Effects of starvation, prolactin or insulin deficiency. Biochem J. 164 (1), 153-159 (1977).
  5. Kowalski, T. J., Wu, G., Watford, M. Rat adipose tissue amino acid metabolism in vivo as assessed by microdialysis and arteriovenous techniques. Am J Physiol. 273 (3 Pt 1), E613-E622 (1997).
  6. Ashcroft, S. P., et al. Protocol to assess arteriovenous differences across the liver and hindlimb muscles in mice following treadmill exercise. STAR Protoc. 4 (1), 101985(2023).
  7. Hallemeesch, M. M., Ten Have, G. A., Deutz, N. E. Metabolic flux measurements across portal drained viscera, liver, kidney and hindquarter in mice. Lab Animal. 35 (1), 101-110 (2001).
  8. Le, H., Nguyen, M., Manso, H. E. C., Wang, M. D., Watford, M. Adipocytes are the only site of glutamine synthetase expression within the lactating mouse mammary gland. Curr Dev Nutr. 8 (6), 102168(2024).
  9. Giordano, A., Smorlesi, A., Frontini, A., Barbatelli, G., Cinti, S. White, brown and pink adipocytes: The extraordinary plasticity of the adipose organ. Eur J Endocrinol. 170 (5), R159-R171 (2014).
  10. Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number. Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 84 (1), 127-133 (1986).
  11. Willingham, K., et al. Milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer. J Vis Exp. (89), e51007(2014).
  12. Muranishi, Y., et al. Method for collecting mouse milk without exogenous oxytocin stimulation. Biotechniques. 60 (1), 47-49 (2016).
  13. Gómez-Gallego, C., et al. A method to collect high volumes of milk from mice (mus musculus). Anales de Veterinaria de Murcia. 29, 55-61 (2014).
  14. DePeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
  15. Oxytocin- oxytocin injection. , https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/fda/fdaDrugXsl.cfm?setid=a9b62187-4141-487c-a9da-f42ad7f9b408&type=display (2019).
  16. Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. Creamatocrit: Simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk. Br Med J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).
  17. Paul, H. A., Hallam, M. C., Reimer, R. A. Milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit. J Vis Exp. (106), e53476(2015).
  18. Ernst, O., Zor, T. Linearization of the Bradford protein assay. J Vis Exp. (38), e1918(1918).
  19. Hueso, D., Fontecha, J., Gomez-Cortes, P. Comparative study of the most commonly used methods for total protein determination in milk of different species and their ultrafiltration products. Front Nutr. 9, 925565(2022).
  20. Anderson, S. M., Rudolph, M. C., Mcmanaman, J. L., Neville, M. C. Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: It's not just about milk protein synthesis. Breast Cancer Res. 9 (1), 204(2007).
  21. Meier, H., Hoag, W. G., Mcburney, J. J. Chemical characterization of inbred-strain mouse milk. I. Gross composition and amino acid analysis. J Nutr. 85 (3), 305-308 (1965).
  22. Hohlbaum, K., et al. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in c57bl/6jrj mice-assessing the degree of distress. PLoS One. 12 (6), e0179588(2017).
  23. Weaver, S. R., et al. Serotonin deficiency rescues lactation on day 1 in mice fed a high fat diet. PLoS One. 11 (9), e0162432(2016).
  24. Statement on resuming breastfeeding after anesthesia. , Committee on Obstetric Anesthesia. https://www.asahq.org/standards-and-practice-parameters/statement-on-resuming-breastfeeding-after-anesthesia (2009).
  25. Lee, J. J., Rubin, A. P. Breast feeding and anaesthesia. Anaesthesia. 48 (7), 616-625 (1993).
  26. Reece-Stremtan, S., Campos, M., Kokajko, L. Academy of Breastfeeding, M. Abm clinical protocol #15: Analgesia and anesthesia for the breastfeeding mother, revised 2017. Breastfeed Med. 12 (9), 500-506 (2017).
  27. Oosting, A., Verkade, H. J., Kegler, D., Van De Heijning, B. J., Van Der Beek, E. M. Rapid and selective manipulation of milk fatty acid composition in mice through the maternal diet during lactation. J Nutr Sci. 4, e19(2015).
  28. Silverman, J., Stone, D. W., Powers, J. D. The lipid composition of milk from mice fed high or low fat diets. Lab Animal. 26 (2), 127-131 (1992).
  29. Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab Animal. 29 (4), 450-455 (1995).
  30. Chen, Y., et al. Effect of high-fat diet on secreted milk transcriptome in midlactation mice. Physiol Genomics. 49 (12), 747-762 (2017).
  31. Kucia, M., et al. High-protein diet during gestation and lactation affects mammary gland mrna abundance, milk composition and pre-weaning litter growth in mice. Animal. 5 (2), 268-277 (2011).
  32. Ragueneau, S. Early development in mice. Iv: Quantity and gross composition of milk in five inbred strains. Physiol Behav. 40 (4), 431-435 (1987).
  33. Falconer, D. S. Milk production in mice. J Agric Sci. 37 (3), 224-235 (1947).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE217

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены