Этот протокол имеет важное значение, так как PIVEC позволяет непосредственное воздействие клеточной культуры на реальные аэрозоли. Систему можно предупредить, чтобы попробовать тот же воздух, которым дышит человек, что позволяет новый тип мониторинга качества воздуха. Основным преимуществом этого метода является простота захвата аэрозолей на культурные клетки легких в местах, недоступных для скамейки верхней системы, например, у источника приема или в пределах дыхательной зоны.
Демонстрация процедуры будет д-р Линн Secondo, недавний выпускник моей лаборатории, и Натаниэль Wygal, студент из моей лаборатории. Для этого эксперимента хранились тестовые материалы и контролируемая среда в течение 24 часов до теста. Чтобы собрать сухую систему рассеивания, подключите шариковый клапан к одному концу четырехдюймовой трубы длиной 1/8 размера.
Это служит в качестве бункера частиц. Через открытый конец бункера частиц, положить в нужное количество медных наночастиц. Затем закройте бункер частиц другим шаром клапана.
Подключите двухдюймовую длину трубу размером 1/8 к клапану. Поместите три дюйма длиной, 1 / 2 дюйма внешнего диаметра труб вокруг двух дюймов трубы. Вставьте фильтр HEPA внутри короткой трубки, гарантируя направление потока через шариковой клапан.
Используя резьбу, подключите вакуумный генератор к другому шариковому клапану. Затем подключите вакуумный генератор к воздушному баку. Положите 1 /4 дюйма наружного диаметра труб над розеткой вакуумного генератора, чтобы подключить его к экспериментальной установки.
Включите основной клапан и регуляторные клапаны на воздушном баке, чтобы установить желаемый поток. Откройте шариковой клапан, ближайший к фильтру HEPA, затем откройте шаровой клапан, ближайший к вакууму генератору. Держите их открытыми во время характеристики или экспозиции, прежде чем закрыть их.
Сначала мяч клапан ближе всего к вакууму генератора, а затем мяч клапан ближе всего к фильтру HEPA. Закройте основные и регуляторные клапаны на воздушном баке, чтобы остановить поток. Для очистки используйте 70% этанола для мытья шариковых клапанов и вакуумного генератора.
Поместите металлические трубы в автоклав для стерилизации. После культивирования клеток в воздушном жидком интерфейсе, позволяют клеткам эквилибрировать в течение 24 часов. Чтобы собраться, возьмите базу PIVEC с хорошо обращенной вверх и соедините адаптер вставки культуры клеток сверху.
Добавьте четыре миллилитров средств массовой информации клеточной культуры к колодец базы PIVEC с помощью микропипюты. Используйте пинцет, чтобы поместить вставку культуры клеток в адаптер. С узкой частью верхней части PIVEC вверх, подключиться к адаптеру.
Тщательно оберните PIVEC одним слоем клейкой лентой. Нажмите, чтобы соединить 37 миллиметровых частей кассеты сверху и снизу PIVEC. Поместите 1/4 дюймовые колючие адаптеры в кассету вход и розетку.
Оберните резисторный обогреватель вокруг PIVEC с проводами у основания. Лента для обеспечения безопасности. Оберните PIVEC восемью раундами алюминиевой фольги для изоляции и закрепите лентой.
Подключите 1/2 дюйма наружного диаметра трубки к адаптеру в верхней части PIVEC. Удалите пористые трубки из стерильной воды и поместите в трубы на вершине PIVEC. Передача системы дыма капот и зажим PIVEC на кольцо стенд и безопасной.
Подключите PIVEC к аэрозольной системе, подключив трубы диаметром 1/4 дюйма к выходу аэрозольного генератора к пористым трубам. Подключите выход PIVEC к трубе диаметром 1/4 дюйма, которая соединена с фильтром HEPA и вакуумным насосом разъемом Y. Включите клапаны и установите скорость потока насоса до 0,5 литра в минуту.
Выставить клетки на медные наночастицы в течение десяти минут, прежде чем закрыть клапаны и выключить насос. Удалите PIVEC из аэрозольной системы. Выньте вставить клеточной культуры с помощью пинцета и поместите его в стерильные пластины хорошо, чтобы начать желаемые биологические анализы.
Предлагаемые точки времени экспозиции, положить вставку обратно в инкубатор двуокиси углерода. Аспирировать средства массовой информации от PIVEC с помощью капельницы. Используйте 70% этанола для мытья PIVEC и стерилизовать его ультрафиолетовым светом, по крайней мере за 30 минут до следующего эксперимента.
PIVEC характеризовался использованием трех размеров медных наночастиц для определения эффективности осаждения. Увеличение осаждения наблюдается в целом для 24 хорошо дизайн, то шесть хорошо дизайн. Он немного уменьшается на 100 нанометров по сравнению с 40 нанометров и 800 нанометров медных частиц.
Концентрация частиц медных аэрозолей наночастиц определялась с помощью сканирующего с помощью фильтра средства передвижения частиц, а также оптических измерений сизера частиц. Пост-экспозиционый анализ может быть ускорен путем определения дозы между 37-миллиметровым фильтром и вставкой клеточной культуры. Сравнение показывает сильную корреляцию для 800 нанометровых частиц меди с значением p менее 0,05.
По сравнению с перпендикулярно-потоком систем воздействия в пробирке во всей литературе эффективность осаждения PIVEC по сравнению с диапазоном проверенных размеров частиц сопоставима или увеличена, чем сообщалось значения. Самое главное помнить, что, хотя этот протокол демонстрирует использование PIVEC в лабораторных условиях, он был разработан для измерения клеточных реакций на аэрозоли в месте воздействия. При проведении испытаний на месте важно охарактеризовать эффективность осаждения испытательного аэрозоля.
Эффективность осаждения определяет отложенную дозу частиц, которым подвергаются клетки. Дополнительные биологические анализы могут быть выполнены для изучения более клеточных конечных точек реагирования из-за воздействия. PIVEC был использован для оценки клеточной реакции из-за аэрозолей, образующихся в ходе процессов 3D-печати, таких как струя металлических связующих, и сплавленных нитей изготовления.
Использование наночастиц, особенно в аэрозольной форме, может быть опасным и любые воздействия должны быть выполнены в дымовой капот. Сотовая работа должна быть сделана в кабинете биобезопасности.
