Этот протокол способен производить надежные аневризмы грудной аорты последовательного размера и расположения у мышей и служит в качестве руководства для безопасного доступа к груди мурина. Этот протокол является простым, последовательным методом для производства аневризм грудной аорты у мышей в течение разумного количества времени по сравнению с другими моделями. После подтверждения соответствующего уровня седации в восемь-десятинедельный мужчина c57 черный шесть мыши, поместите мышь в правом боковом положении decubitus и ленты правой рукой rostrally так передняя лапа находится в соответствии с носом.
Потяните хвост caudally создать линию напряжения между правой рукой и хвостом, производя расширение позвоночника, и ленты левой ногой в его естественном положении. Затем заклейте левую руку венралью, перекатив марлю. Перед началом процедуры используйте клиперы для бритья левого фланга от левого плеча до левого живота.
Используйте хлопчатобумажный аппликатор, чтобы почистить первый бетадиновый раствор, затем 70% этанола над хирургическим участком. Когда кожа высохнет, поместите стерильную драпировку над животным. Сделайте двухсантиметровый боковой разрез в середине гемоторакса и используйте ручную электрокаутерию, чтобы разделить мышечные слои до тех пор, пока ребра не будут видны.
Под 10 до 15x увеличение, непосредственно прижигать двухмиллиметровую часть между ребрами и использовать солевой мокрый, тонкий хлопок наконечником аппликатора в пространстве ребра для того, чтобы вскрыть в плевральном пространстве через прижигаемой части. Поместите солевой мокрый, три на два миллиметра губки в грудную клетку, чтобы помочь коллапс легких. Затем используйте ножницы, чтобы расширить торакотомию до тех пор, пока диафрагма не будет видна вентрали и разрез в нескольких миллиметрах от мышц параспина dorsally.
Чтобы разоблачить аорту, поместите ретраберные ретракторы в разрез торакотомии и тщательно удалите губку с поверхности легких. Обложка легких с солевым раствором, шесть на четыре миллиметра губки с концами указывая rostrally и caudally и место широкий, плоский ретрактор легких на губку. Затем аккуратно сдвиньте втягивающий вентрали до тех пор, пока нисходящая торакальная аорта не будет выставлена, и используйте типсы номер семь, чтобы вскрыть примерно пятимиллиметровый участок соединительной ткани и жира из аорты.
Для применения эластазы, во-первых, используйте микропайпт, чтобы насытить 0,5 на один миллиметр губкой с 12 микролитров свиной поджелудочной эластазы и поместить губку на открытой поверхности аорты. Через три-пять минут, используйте номер семь типсов, чтобы удалить губку эластазы и удалить ретрактор легких. Орошают грудную полость примерно половиной миллилитров стерильного солевого раствора.
Удалите легочную губку и используйте свернутый кусок марли два на два дюйма, чтобы поглотить оставшееся солевое орошение. Удалите ребра втягивающиеся и свергнуть ребра с тремя прерванными шесть-о не-поглощаемых швов, связывая свободный узел в каждом шве, не связывая швы вниз. После повторного перефляции легких, связать швы и повторного непосредственно мышечных слоев с работает пять-о абсорбируемых плетеные швы.
Закройте кожу с 7 до 10 прервано пять-о не-поглощаемых швов. Затем следите за животным до полной лежачих времени. В соответствующей экспериментальной конце точки, используйте ножницы, чтобы incise кожи medially от левого фланга до центрального живота, заботясь, чтобы не войти в брюшной полости.
Инциз кожи от спинного левого фланга rostrally к левому плечу и сделать разрез под углом 90 градусов через подмыгу к грудине. Используя прижигание, вскрыть лоскут кожи к брюшной аспект мыши подвергать левый hemothorax и использовать ножницы, чтобы войти в живот вдоль левой стоимости маржи от брюшной до спинного направления подвергать нижней части левой диафрагмы. Если боковой самый край диафрагмы не открывается, инцизуате диафрагму на ее самом боковом краю.
Размещение кончика прижига в этом отверстии, прижигать диафрагму от стоимости маржи к процессу xiphoid и использовать влажный, тонко наконечником хлопка наконечником аппликатор мягко освободить легкие от любых спаек на груди стенки. Обеспечивая легких в сторону, использовать электрокаутерии, чтобы прорезать ребра и грудную стенку от стоимости маржи до первого ребра, спинной до средней подмышки линии, но по крайней мере два миллиметра от аорты. Вырезать вдоль верхнего края первого ребра и отражают грудной клетки вентриальной подвергать hemothorax.
Поместите втягиватели на легкое и потяните medially. Поместите втягиваемую или соленую марлю на диафрагму и нарисуйте caudally, чтобы разоблачить как можно больше аорты. Используйте сухой, хлопчатобумажный аппликатор, чтобы удалить любые спайки из аневризмы аорты и незатронутый дистальный сегмент и использовать видео микрометрию для измерения диаметра незатронутого сегмента управления и наиболее широкой части аневризмы, обработанной эластазой.
Для сбора урожая аорты, схватить сосуд с вредом миппы просто дистальный к обработанной сегмента и использовать ножницы, чтобы сократить дисталь к типсам. Вскрыть аорту от позвоночника и сократить сосуд проксимальный для обработанного сегмента для удаления аневризмальной ткани. Затем, используя шприц-туберкулин и иглу, вымойте аорты люменом с солевым раствором и обработать образец в соответствии с запланированным вниз по течению экспериментального анализа.
Разработанные грудные аневризмы как фузиформы в форме и происходят только в обработанной части на аорте. В этом репрезентативном измерении микрометрии видео, расширение аорты было определено, чтобы быть 130%при сборе тканей. Действительно, в то время как тип elastase лечение мышей демонстрируют значительное увеличение аортального расширения в дни три, семь, 14 и 21 после лечения с максимальным расширением наблюдается в день 14 по сравнению с контролем диких мышей типа.
Гистологический анализ показывает, что аневризмы дикого типа имеют эластиновые волокна, тонкие и фрагментированные. Существует также менее гладкой мышечной клетки окрашивания с увеличением макрофагов и интерлукина одной бета-выражения. Мурин легких является чрезвычайно деликатным, и травмы, как правило, со смертельным исходом.
Примите максимальную осторожность с первоначальным входом в грудь и только манипулировать легких с солевыми губками. Эта модель помогла выяснить роль интерлукина одной бета и интерлукина шесть в патогенеза нисходящей грудной аневризмы аорты и как их блокада может облегчить нехирургическое управление этих аневризм.
