То, что мы представили сегодня, является упрощенным модифицированным и хирургически эффективным методом для установления ишемии задних конечностей у мышей ApoE. Этот метод может быть реализован в любом животноводческом учреждении. Основным преимуществом синовиального метода является низкая инвазивность, с использованием разреза менее пяти миллиметров.
Метод имеет обучающий хоф. Поэтому мы советуем практиковаться на микрохирургических моделях перед работой на животных, которые будут включены в окончательный анализ. Метод продемонстрирует Кайсюань Ян, доктор медицины и студент из моей лаборатории.
Начните с подготовки необходимого оборудования и инструментов для операции. После введения анестезии мыши нанесите эту мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость. Затем поместите мышь на грелку, чтобы поддерживать температуру тела на уровне примерно 37 градусов по Цельсию.
Используя ватный тампон и крем для удаления волос, аккуратно удалите волосы с кожи задних конечностей с правой стороны. Уложите мышь в лежачем положении на грелку под рассекающим микроскопом. Используйте спирт для дезинфекции кожи и протрите хлопком вдали от растительной стороны разреза.
С помощью заостренных щипцов и хирургических ножниц делают разрез примерно на три-четыре миллиметра в середине паховой области. Аккуратно удаляют подкожно-жировую клетчатку с помощью тонкоконечных щипцов, чтобы обнажить проксимальный бедренный нервно-сосудистый пучок. Используя ватный тампон, смоченный физиологическим раствором, осторожно отодвиньте бедренную артерию от бедренного нерва и бедренной вены.
Затем, используя кончик шва 7,0, аккуратно проткните мембрану бедренной оболочки. Затем проходят по 7-0 рассасывающихся швов через проксимальную бедренную артерию и делают двойные узлы с помощью пружинных ножниц. После этого трансекция бедренной артерии между двумя звеньями.
Пропустите рассасывающийся шов 6-0 через нижний край разреза и аккуратно перетащите разрез в область правой стороны колена задней конечности, чтобы обнажить дистальную бедренную артерию. Осторожно отодвиньте подкожную клетчатку в сторону, чтобы обнажить нервно-сосудистый пучок. Рассекните бедренную артерию от бедренной вены и бедренного нерва и используйте хлопок для защиты нерва.
Затем, используя кончик шва 7,0, проткните мембрану бедренной оболочки. Пропустите два рассасывающихся шва 7-0 через дистальную бедренную артерию и сделайте двойные узлы с помощью пружинных ножниц для перерезания бедренной артерии между двумя звеньями. После этого сшиваем разрез с помощью 6-0 рассасывающихся швов.
Поместите мышь на грелку в чистую клетку и продолжайте следить за ее жизненно важными параметрами до выздоровления. Определить успех двойной перевязки бедренной артерии или DLFA на следующий день с помощью МРТ. До процедуры DLFA вес мышей варьировался от 29,6 до 38,0 граммов.
Через семь дней после операции DLFA вес варьировался от 26,5 до 34,1 грамма, что значительно ниже, чем вес до DLFA. Проксимальная и дистальная области правой ФА не показали перфузии. Результаты по шкале Тарлова были значительно снижены через день после операции.
Хотя они медленно увеличивались в течение следующих дней, они все еще были ниже базового уровня до седьмого дня. Лапы ишемизированных задних конечностей у семи мышей не могли растягиваться естественным образом по сравнению с контралатеральной стороной. Кроме того, у четырех мышей наблюдалось незначительное обесцвечивание лап по сравнению с контралатеральной стороной.
Окрашивание H&E правой ГМ-мышцы выявило миофибры, которые демонстрировали нерегулярный ишемический некроз, где пролиферирующие клетки-сателлиты заменили некротические миофибры и распределялись в массе или с регулярной дисперсией. Миофибры, проявляющие воспалительную инфильтрацию многоядерными макрофагами, утратили свои нормальные морфологические характеристики, при этом присутствовало очень мало регенерированных миофиберов. Поперечные участки этих регенерированных миофибров были круглыми.
Цитоплазма была окрашена в красный цвет, и одно небольшое ядро или несколько ядер были расположены в центре. Однако такого рода воспалительная картина не наблюдалась в левом ГМ. Окрашивание антителом CD31, выполненное для наблюдения за плотностью микрососудистости, показало, что ишемизированные задние конечности проявляли значительно большую плотность микрососудистости, чем неишемическая сторона. Самое главное – рассечение бедренной артерии.
Оператор должен иметь опыт в микрохирургических техниках, а также быть знакомым с анатомией задних конечностей мыши. В принципе, этот метод также может быть использован для изучения ишемии-реперфузионной травмы в ноге. Таким образом, артерия может быть закупорена мягким зажимом сосуда, прежде чем разрешить реперфузию.
