Этот метод может помочь создать идеальную модель, которая точно имитирует естественный прогресс метастазирования в кости клеток рака предстательной железы in vivo. Этот метод имеет преимущество метастазирования в кости и представляет собой естественный процесс метастазирования в кости клеток рака предстательной железы in vivo. Этот метод полезен для изучения молекулярных механизмов и исследования терапевтических эффектов in vivo при метастазировании рака предстательной железы в кости.
В день инъекции возьмите от 80 до 90% сливающихся меченных люциферазой клеток PC3, культивируемых в 10-сантиметровой чашке для культивирования клеток, и начните подготовку клеток к инъекции, промыв их два раза холодным стерильным PBS. Трипсинизировать промытые клетки 1,5 миллилитрами 0,25% трипсина в течение трех минут, после чего погасить трипсин, добавив шесть миллилитров среды F12, содержащей 10% сыворотки, и соберите клетки в 15-миллилитровую центрифужную пробирку. Перенесите 20 микролитров собранной клеточной суспензии в планшет для подсчета клеток и рассчитайте концентрацию клеток с помощью автоматического счетчика клеток.
Затем центрифугируют клетки при комнатной температуре в течение пяти минут при 800 г. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки и ресуспендируйте гранулу ячейки в среде F12 для достижения желаемой конечной плотности клеток. Теперь отнесите клетки в операционную и выполните инъекцию клеток в течение двух часов. Держите клетки на льду до инъекции.
Чтобы начать операцию, поместите анестезированную мышь в положение лежа на спине и иммобилизуйте обе верхние конечности, перпендикулярно вытянув их от средней линии. С помощью хирургической клейкой ленты иммобилизуйте мышь от живота вниз, не надавливая сильно и не смещая внутренние органы. Продезинфицируйте кожу грудной клетки с помощью тампона с 70% этанолом.
Затем пальпируйте середину передней грудной стенки, чтобы найти мечевидный отросток мыши в углублении на нижнем конце средней грудины. Обозначьте самую нижнюю точку мечевидного отростка. Затем, пальпируя вверх от середины передней грудной стенки, найдите яремную выемку мыши в центральном углублении на верхней границе манубриума и отметьте самую нижнюю точку яремной выемки.
Теперь найдите и отметьте среднюю точку между двумя предыдущими отметками, немного правее и чуть выше сердца в третьем межреберье. Это точка впрыска. Тщательно перемешайте клеточную суспензию перед загрузкой 200 микролитров суспензии в одномиллилитровый шприц, установленный на игле 26 калибра.
Оставьте немного воздуха в шприце между поршнем и суспензией, чтобы обеспечить поступление пульсирующей крови во время инъекции. Чтобы выполнить инъекцию, вертикально введите иглу через место инъекции. Если кончик иглы правильно введен в левый желудочек, в втулке иглы будет видна ярко-красная пульсирующая кровь.
Повторите попытку инъекции, если пульсация крови не видна или кровь свертывается. После того, как игла введена правильно, введите 100 микролитров клеточной суспензии очень медленно в течение 40-60 секунд стабильной рукой. После завершения инъекции втяните иглу, надавливая на место инъекции сухим ватным тампоном в течение 15 секунд, чтобы обеспечить гемостаз.
Верните мышь в чистую клетку и следите за животным до тех пор, пока оно полностью не оправится от наркоза. Биолюминесцентная визуализация, выполненная через 24 часа после инъекции меченных люциферазой клеток PC3 мыши, показала сигналы от всего тела животного, указывающие на наличие раковых клеток в системном кровотоке. Метастатические поражения появились в задних конечностях мыши через две недели после инъекции.
Метастатические поражения со временем стали больше и начали появляться в других местах. Метастатические поражения в костях, вызванные клетками рака предстательной железы, были дополнительно обнаружены с помощью рентгеновской визуализации, которая показала разрушение кости в проксимальной большеберцовой кости животного. То же самое было подтверждено и микрокомпьютерной томографией.
Метастатические поражения были дополнительно подтверждены в парафиновых закладных тканях окрашиванием гематином и эозином. Точное место инъекции очень важно для обеспечения успеха этой модели. Этого можно добиться практикой.
