诱导眼表炎症和受累组织收集

眼表炎症会损害眼表组织并损害眼睛的重要功能。本协议描述了一种在睑板腺功能障碍（MGD）的小鼠模型中诱导眼部炎症和收集受损组织的方法。

眼表疾病包括一系列干扰角膜、结膜和相关眼表腺网络的功能和结构的疾病。睑板腺（MG）分泌脂质，形成覆盖层，防止泪膜水部分蒸发。中性粒细胞和细胞外DNA陷阱在过敏性眼病小鼠模型中填充MG和眼表。聚集的中性粒细胞细胞外陷阱（aggNET）形成由细胞外染色质组成的网状基质，可阻塞MG出口并调节MG功能障碍。本文提出了一种诱导眼表炎症和MG功能障碍的方法。详细描述了收集与眼表相关的器官的程序，例如角膜，结膜和眼睑。使用处理每个器官的既定技术，还显示了MG功能障碍的主要形态学和组织病理学特征。眼渗出物提供了评估眼表炎症状态的机会。这些程序能够在临床前水平上研究局部和全身抗炎干预。

每眨眼一下，就会补充分散在角膜上的光滑泪膜。眼表上皮有助于泪膜在眼表的分布和正确定向。粘蛋白由角膜和结膜上皮细胞提供，以帮助定位泪膜的水部分，这些泪膜来自眼睛表面的泪腺。最后，MG分泌脂质，形成覆盖层，防止泪膜¹，^2，3的水性部分蒸发。以这种方式，所有眼器官的协调功能保护眼表免受病原体入侵或伤害，并支持水晶般清晰的视力，而没有任何疼痛或不适。

在健康的眼表，眼流分泌物或眼部风湿可清除灰尘、死去的上皮细胞、细菌、粘液和免疫细胞。聚集的中性粒细胞细胞外陷阱（aggNET）配制由细胞外染色质组成的网状基质，并将这些成分掺入眼风湿中。AggNETs通过促炎细胞因子和趋化因子的蛋白水解降解来解决炎症⁴。然而，当它们变得功能失调时，这些异常的 aggNET 会驱动疾病的发病机制，例如 COVID-19⁵、胆结石⁶ 和唾液石症⁷ 中的血管闭塞。同样，眼表上的aggNETs起着保护作用，有助于解决高度暴露表面的炎症⁸。眼表过度形成或缺乏 aggNET 都会损害泪膜稳定性和....

所有涉及动物的程序均根据动物福利机构指南进行，并经埃尔朗根-纽伦堡弗里德里希-亚历山大大学（FAU）动物福利委员会批准（许可证号：55.2.2-2532-2-1217）。本研究使用年龄为7-9周的雌性C57Bl / 6小鼠。从商业来源获得小鼠（见 材料表），并以12小时昼夜循环保存在特定的无病原体条件下。

1.诱导小鼠眼表炎症

1. 进行免疫接种的免疫原准备。
   .......

本协议描述了建立眼表炎症小鼠模型的顺序步骤。这些协议旨在展示如何在局部应用治疗，获取眼部渗出物，并切除相关的辅助器官，如健康和发炎的眼睑（图2），角膜和结膜。解剖上眼睑时必须注意结膜的隔离，并且在角膜解剖期间必须将其储存在1x PBS中。这将防止结膜干燥，结膜可用于组织学、药代动力学和基因表达研究。

按照上述方案连续7天局.......

睑板腺的油性分泌物对健康的眼睛非常重要²²。然而，聚集的中性粒细胞细胞外陷阱（aggNET）阻塞这些皮脂腺，这些中性粒细胞细胞外陷阱（aggNET）排列成位于双眼睑睑板上的平行链，可以破坏泪膜²³。这种破坏导致睑板腺功能障碍（MGD）¹ 和加速泪液蒸发并调节眼表损伤²。该协议描述了建立导致MG梗阻的免疫介导的眼表炎症?.......

这项工作得到了德国研究基金会（DFG）2886 PANDORA项目-No.B3的部分支持;SCHA 2040/1-1;MU 4240/2-1;CRC1181（C03）;TRR241（B04），H2020-FETOPEN-2018-2020项目861878，并由大众基金会（授予97744）授予MH。