A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Данный протокол представляет собой экономичный и эффективный метод количественной оценки микроархитектуры костной ткани на мышиной модели остеопороза путем сочетания методов окрашивания гематоксилин-эозином (ГЭ) и микрокомпьютерной томографии (Микро-КТ).
Микроструктура кости относится к расположению и качеству костной ткани на микроскопическом уровне. Понимание костной микроструктуры скелета имеет решающее значение для понимания патофизиологии остеопороза и улучшения его лечения. Однако работа с образцами костей может быть сложной задачей из-за их твердых и плотных свойств. Во-вторых, специализированное программное обеспечение затрудняет обработку и анализ изображений. В этом протоколе мы представляем экономичное и простое в использовании решение для анализа микроструктуры трабекулярной кости. Подробно описаны шаги и меры предосторожности. Микро-КТ — это метод неразрушающей трехмерной (3D) визуализации, который позволяет получать изображения структуры трабекулярной кости с высоким разрешением. Он позволяет объективно и количественно оценить качество костной ткани, поэтому он считается золотым стандартом оценки качества костной ткани. Тем не менее, гистоморфометрия остается незаменимой, поскольку она предлагает важнейшие параметры на клеточном уровне, преодолевая разрыв между двумерной (2D) и 3D-оценкой образцов костей. Что касается гистологических методов, мы выбрали декальцинацию костной ткани, а затем традиционное введение парафина. Таким образом, сочетание этих двух методов может дать более полную и точную информацию о микроструктуре кости.
Остеопороз является распространенным метаболическим заболеванием костей, особенно среди пожилых людей, и связан с повышенным риском хрупких переломов. По мере того, как остеопороз становится все более распространеннымв Китае1, будет расти спрос на изучение костных структур мелких животных 2,3. Предыдущие методы измерения потери костной массы основываются на результатах двумерной двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии. Однако при этом не учитываются изменения в архитектурной микроструктуре трабекулярной кости, которая является ключевымфактором для прочно....
Протокол для животных был одобрен Комитетом по этике животных Университета традиционной китайской медицины Чэнду (рекордный номер: 2020-34). Самки мышей C57BL/6J (12 недель, n = 14) были случайным образом разделены на две группы: симуляционную (группа Sham, n = 7) и модельную группу (группа OVX, n = 7). Живот?.......
Микро-КТ анализ
Мы измерили трабекулярные микроархитектурные параметры у мышей из обеих групп и сообщили их средние значения и SD в таблице 1. Распределение некоторых параметров (т.е. отношение объема кости к общему объему ткани, трабекулярная толщи?.......
Остеопороз может приводить к частым переломам, которые являются дорогостоящими, могут вызывать боль, инвалидность или даже смерть и серьезно влиять на качество жизни пациентов20. На протяжении многих лет модель овариоэктомии была признана одним из стандартных методов изу?.......
Эта работа была поддержана Управлением традиционной китайской медицины провинции Сычуань (2021YJ0175) и Инновационным проектом аспирантуры Школы клинической медицины (LCYJSKT2023-11) Университета традиционной китайской медицины Чэнду.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
4% Paraformaldehyde | Biosharp | BL539A | |
Adobe Photoshop | Adobe Inc. | ||
Ammonia Solution | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
Analyze 12.0 | AnalyzeDirect, Inc | ||
Anatomical Forceps | Jinzhong surgical instrument Co., Ltd | J3C030 | |
Anhydrous Ethanol | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 | |
Automatic Dyeing Machine | Thermo scientific | Varistain™ Gemini ES | |
Bone Microarchitecture Analysis Add-on | AnalyzeDirect, Inc | ||
C57BL/6J mice | SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. | ||
Carrier Slides | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
Coverslips | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co. | 220518001 | |
Decalcification Solution | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | CR2203047 | |
Delicate Scissors | Jinzhong surgical instrument Co., Ltd | ZJA010 | |
Embedding box marking machine | Thermo scientific | PrintMate AS | |
Embedding Machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
Fiji: ImageJ | National Institutes of Health, USA | ||
Film Sealer | Thermo scientific | Autostainer 360 | |
Freezing Table | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
H&E Staining Kit | Leagene | DH0020 | |
Hydrochloric Acid Solution | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
ImageJ2 Plugin | BoneJ 7.0.16 | ||
Medical Gauze | Shandong Ang Yang Medical Technology Co. | ||
Mersilk 3-0 Silk Braided Non-Absorbable Sutures | Ethicon, Inc. | SA84G | |
Needle Holder | Jinzhong surgical instrument Co., Ltd | J32010 | |
Neutral Balsam | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd | 10004160 | |
Oven | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
PANNORAMIC Digital Slide Scanners | 3DHISTECH Ltd. | PANNORAMIC DESK/MIDI/250/1000 | |
PBS buffer | Biosharp | G4202 | |
Povidone-iodine solution 5% | Chengdu Yongan Pharmaceutical Co., Ltd | ||
Quantum GX2 microCT Imaging System | PerkinElmer, Inc. | ||
Rotary Microtome | Thermo scientific | HM325 | |
Scalpel | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
Scan & Browse Software | 3DHISTECH Ltd. | CaseViewer2.4 | |
Single-Use Sterile Rubber Surgical Gloves | Guangdong Huitong Latex Products Group Co., Ltd | 22B141EO | |
Sodium Chloride Solution 0.9% | Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd | ||
Sterile Hypodermic Syringes for Single Use | Shandong Weigao Group Medical Polymer Products Co., Ltd | ||
Sterile Medical Suture Needles | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | PW8068 | |
Tissue Processor | Thermo scientific | STP420 ES | |
Tissue Spreading and Baking Machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
Tribromoethanol | Nanjing Aibei Biotechnology Co., Ltd | M2920 | |
Wax Trimmer | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
Xylene | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved