Için Basitleştirilmiş Tekniği<em&gt; Yerinde</emİnsan Oküler Globe gelen Kornea ve Retina Doku Eviserasyon of&gt; eksizyonu

Özet

Kağıt kadavra donör oküler Dünya'dan retina dokuları içini temizlemek için basitleştirilmiş bir tüketim kornea tekniği ve açıklar. Tekniği oküler dünyanın diğer dokulara zarar vermeden nakli, cerrahi veya araştırma amaçlı kullanılmak üzere özel tüketim kaliteli dokular için yardımcı olacaktır Burada anlatılan.

Özet

Enükleasyon dünyanın geri kalanı rahat bırakmak, bir kadavra donörden oküler dünyanın alma işlemidir. Eksizyon oküler dünya onu ayrı keserek, oküler dokularda, özellikle kornea alma anlamına gelir. Eviserasyon retina gibi burada sözü edilen iç organlarının çıkarılması işlemidir. Oküler dünya kornea, sklera, vitreus, lens, iris, retina, koroid, kaslar vb (Ek Şekil 1) oluşur. Bir hasta kornea hasarı sorunum olduğunda, kornea kaldırılması gerekiyor ve sağlıklı bir keratoplastic ameliyatları tarafından nakledilen gerekir. Genetik bozukluklar veya retinal fonksiyon kusurları görme bozabilir. İnsan göz küreleri göz gibi bankacılık, insan kornea veya sklera nakli ve oküler dokular üzerinde araştırma gibi çeşitli cerrahi işlemler için kullanılabilir. Ancak, insan kornea kalınlığı ve retina eksizyon pek fazla bilgi Muhtemelen, l nedeni varinsan dokularına imited erişilebilirlik. Benzer prosedürler açıklayan çalışmaların çoğu hayvan modelleri üzerinde gerçekleştirilir. Araştırma bilim adamları, insan göz gelişimi, homeostasis ve işlevine bilgilerini genişletmek için uygun bir şekilde diseke ve iyi korunmuş oküler dokuların durumu güveniyor. Biz bunların yaklaşık% 40 (Tablo 1) araştırma amaçlı kullanılan vardır out oküler küreler yüksek miktarda aldıkça, tüketim teknikleri tanımlayarak, bu dokular üzerindeki deneylerin büyük miktarda gerçekleştirmek ve bunları düzenli olarak muhafaza edebiliyoruz.

Kornea retina üzerine ışık iletimi sağlar ve bu amaçla her zaman şeffaflık iyi derecede tutmalıdır avasküler bir dokudur. Kornea içinde, kök hücrelerin bir rezervuar olduğu limbus bölgede, epitel hücrelerinin yeniden yardımcı olur ve kornea şeffaflık ve açıklık korumak konjonktiva aşırı kısıtlar. Boyutu ve th bunlardan birini değişiklikler dalıp, belirsiz vizyon yol açabileceği gibi korneanın ickness, net görüş için önemlidir. Kornea 5 katmandan oluşur; endotelyum a) epitel, b) Bowman tabakası, c) stroma, d) Descemet membran ve E). Tüm katmanları net bir vizyon ^4,5,6 sağlamak için düzgün çalışması gerekir. Koroid Bruch membranı ile iç sınırlanmış sklera ve retina arasındaki ara tunik, ve gözün kan akışından sorumludur. Koroidin da retinanın ^5,6 dış tabakaları için sıcaklık ve malzeme besleme düzenleyen yardımcı olur. Bir photoreceptive parçası olmayan bir alıcı parçası: retinanın oküler küre (Ek Şekil 1) arka kapsar ve iki bölümden oluşur sinir dokusunun bir katmandır. Retina, kornea ve lens gelen ışığı almak için yardımcı olur ve sonunda optik sinir ^5,6 yardımı ile beyne iletilir kimyasal enerjiye dönüştürür. bu doku amaçlayan araştırma amaçlı vazgeçilmez olarak ove_content "> Bu yazının amacı, insan oküler küreler gelen kornea kalınlığı ve retina dokuların diseksiyonu için bir protokol sağlamaktır. komşu dokuları ile çapraz bulaşmayı önleme ve RNA bütünlüğünün korunması temel bir öneme sahiptir (i) oküler dokuların transcriptome, (ii) karakterize rejeneratif tıp projeleri için kök hücre izolasyonu, ve (iii) etkilenen / Normal bireylerden dokular arasındaki histolojik farklılıkları değerlendirmek. Bu yazıda tekniği tarif şu anda kaldırmak için kullanabileceğiniz kornea, bir göz Dünya'dan koroid ve retina dokularında. Burada insan göz küresi ve kornea kalınlığı ve retina dokularının eksize diseksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar. beraberindeki Video araştırmacılar alımı için uygun bir tekniği öğrenmek için yardımcı olacak düzenli bulması zor değerli insan dokularının.

Protokol

1. Kornea in situ olarak eksizyonu Oküler Küre gelen

1. Yaklaşık 15 dakika kullanmadan önce laminar hava akımı kabini açın. % 70 izopropil alkol kullanarak laminar akım temizleyin. Bu tür cerrahi kap ve maske gibi kişisel koruyucu giysiler giyin. El ve ön kol fırçalayın ve steril bir havlu ile kurulayın. Aseptik teknik kullanarak steril eldiven ve önlük veya kollu giyin.
2. Aseptik olarak steril bir alet tepsisine yerleştirerek steril alan ayarlayın. Aletler steril olduğundan emin olun. Steril alet paketi açın ve herhangi bir kontaminasyon kaçınarak steril bölgeye çevirin.
3. Bu kullanım kolaylığı için steril alanın kenarına bitişik olacak şekilde göz küreleri içeren şişelerde (göz kavanoz) ile birlikte tüm steril malzeme ve aletler (Tablo 2) yerleştirin.
4. Tablo 3'te belirtildiği gibi önceden hazırlanmış koruma / saklama ortamı ile şişeleri etiketlemek ve koyunI-PVP ile birlikte laminar hava akışı kapağı (iyot-polivinilpirrolidon), sodyum tiosülfat ve bir steril salin çözelti yüzeyinde m PBS (fosfat tamponlu tuzlu su).
5. Onlar 4 ° C'de buzdolabı korunur gibi oküler doku ve çözümleri normal oda sıcaklığına ulaşmasını sağlayın Tekrar ısınma / soğutma çevrimleri kaçının. Çözüm kapakları ve iç yüzü gözü kavanoz kavanoz kendi yanında bakacak tutun.
6. Steril forseps kullanarak göz kavanoz tüller ve süngerleri çıkarın. Oküler küreler dekontamine için 2 dakika süreyle steril I-PVP% 0.5 'lik dünya daldırın. Steril alanın dışında, steril tepsinin kapağındaki iki forseps yerleştirin. Steril forseps başka bir çift kullanarak 1 dakika boyunca sodyum tiyosülfat% 0.1 'dünya aktarın. Aynı forseps kullanarak, steril serum fizyolojik (PBS) içeren şişe için dünya transfer onu işletilmektedir kadar terk. T diğer oküler dünya için aynı işlemi tekrarlayıno Aynı donör.
7. Laminer hava akımı motor kapağının altında çalışarak, ortaya korneadan steril kornea bırakarak gazlı bez (bandaj) ve yaklaşık 5 mm sklera kullanarak dünyanın sarın. Göz ampul sadece yeterli basıncı muhafaza elinde olabilir. Doku tamamını cerrahisi sırasında nemli tutulmalıdır.
8. Forseps konjonktivanın tüm nihai kalıntıları çıkarmak için makas ile birlikte kullanılır. Diğer araçlardan ayrı yukarıdaki işlemi için kullanılan aletler tutun. Limbus bölgede 3-4 mm skleral kesi gerçekleştirmek için bir neşter bıçak kullanın, sonra altta yatan uveal dokuyu perfore kaçınarak, 360 ° kesi uzatmak veya korneanın normal eğrilik deformasyona neden. Vitreus vücut salgısı kaçınarak dört küçük boşluklar bırakarak dört büyük kesiler kesin. Dört boşluklar başka doku hiçbir kaldırma sağlamak kesilir.
9. Küçük skleral plakların varlığı kesme engel olabilir, bu nedenle comp emin olunmikrocerrahi makas ile skleral eksizyonu Lete. Bu işlem koroid, retina ve vitreus zarar vermeden yapılmalıdır.
10. Bu tamamlanmasını sağlamak üzere kesi inceleyin. Insizyon sadece kornea ile yazışmalarda noktada siliyer organlarına doğru corneo-skleral rim yapışır yapıldıysa.
11. Steril alanın merkezine yakın sarılı oküler dünyanın aşağı ayarlayın. Aşağı ve uzak corneo-skleral düğmesini siliyer cisim-koroid çekmek için eksizyon için kullanılan skleral jant sabit ve elini tutmak için forseps kullanılarak kornea kaldırılması.
12. Yavaşça corneo-skleral düğmesinden kalan yapışıklıklar ayırın. Ne çapraz kornea gerginliğe neden ne de ön kamara üzerine aşağı gerilemek olanak verebilecek bir şekilde corneo-skleral rim çekin.
13. Kornea endotel hücre yoğunluğu bir tryp kullanarak bir hipotonik çözüm ve hücre ölümleri kontrol edilir kullanılarak kontrol ediliryaklaşık 1 dakika ile hücreleri için bir mavi boyama daha sonra bir optik mikroskop altında sayıldı ve hücre / mm ² olarak ölçülür. Posterior Petri plakanın alt bakmalıdır ise ön kamara kapağını bakmalıdır. Endotel hücre yoğunluğu 100X büyütme altında objektif bir ızgara kullanarak manuel sayılabilir. İtalya'da transplantasyonu için asgari kabul sayımı 2200 endotel hücre / mm ^{2 'dir.}
14. Tablo 3'te gösterildiği RT (oda sıcaklığında) muhafaza önceden hazırlanmış kornea depolama ortamına bir kornea tırnak kullanarak corneo-skleral rim aktarın.
15. Doğal kristalin lens için arka kamara inceleyin. Sklera hazırlanmış ise, dünyanın tüm uvea kalıntıları ve vitreus çıkarın. Dikkatle kakışıyor ve aseptik teknik kullanılarak, ilgili gözünü kavanoza kalan arka segment dönmek. Yeni enstrümanlar kullanarak diğer dünya için prosedürü tekrarlayın. Kornea zekâ Fixh kornea pençe ve 31 medya depolama (organ kültürü) altında muhafaza ° C Şekil 1a'da gösterilen çıkarıldı kornea, daha sonra keratoplasti ya araştırmalar için kullanılabilir.
16. Uygun çöp bidonları içine gereksiz malzeme ve biyo-tehlikeli atık bertaraf edin. Iş% 70 izopropil alkol sprey kullanarak bittikten sonra çalışma alanı temizleyin.
17. 28 gün sonra korneanın tüm değerlendirme parametreleri tutar, varsa [böyle morfolojisi gibi, hücre sayımı, şeffaflık, kalınlık ve mikrobiyoloji testleri - bakteriyel ve BACTEC 9240 cihaz (Becton Dickinson, Milan, İtalya) kullanarak mantar], daha sonra sevk edilebilir Tablo 4'te gösterildiği gibi, taşıyıcı kullanılarak hastanelerde. Kornea kaldırıldı laminar hava akımı kabin altında orta taşıma depolama konulmalıdır.
18. Olarak, depolama sırasında, kornea nakli için gerekli her zamanki boyutundan daha kalın olur, göz bankaları kalınlığı azaltmak için de şişme maddeler kullanmayın. Bizulaşım ortamda normal boyutuna geri kornea almak için% 6 dekstran T500 kullanın. % 4-8 dekstran T500 kullanılabilir rağmen,% 6 bizim için iyi hizmet etmiştir. Bu daha kolay cerrahlar hemen onu alırsınız gibi kornea nakli için yapar.

2. Kornea eksizyon Oküler Küre gelen Retina Eviserasyon

1. Çıkarılması takiben, kornea morfolojisi ve endotelyal hücre yoğunluğuna bağlı nakli ya araştırmalar için seçilir ve 31 depolama veya korunması orta yerleştirilir ° C. Oküler dünyanın kalan, ardından cerrahi amaçlı gibi sklera izolasyon gibi daha sonra kullanmak için işlenmiş araştırma için retinanın vb edilir
2. Retina eksizyonu öncesinde, oküler dünyanın bozulmamış ve kaldırılır sklera bir parçası sadece korneanın olduğundan emin olun. Jelatinimsi vitreus dışarı salgılayan ise bir retina doku kaldırmak için zor olur.
3. Donör aşağıda 65 yaş ise, sklera olduğunuserolojik testler sonrasında cerrahi amaçlı steril PBS altında korunmuş. Bu durumda, sklera, kesilmemiş sadece camsı gövdesi kaldırılır ve tüm sklerasına korunur.
4. Retina eksizyon için, steril forseps ve makas kullanılarak optik sinir doğru hareket sklera kornea tarafı küçük bir kesik veya kesi ile başlar. Forseps kullanarak skleranın parçası tutun ve düz vitreus vücuda zarar kaçınarak parçası kısmen kesme optik sinir doğru makasla kesti.
5. Birlikte sıkışmış olarak Koroid plaklar sklera ayrılmalıdır. Koroid dokusu ortaya çıkarmak için tüm sklera kesin. Sklera tamamen kesilir sonra, optik sinir yakınında keserek vitreus vücudun geri kalan ile sklera ayırın. Şekil 2a'da gösterildiği gibi koroidin kaplı camsı gövdenin tamamını bilya görülebilir.
6. İki steril forseps kullanma biri ile toplayıp yavaşça koroid tabakasının uzaklaştırılmasıforseps çifti ve diğer çıkarmadan. Alternatif olarak, koroid tabakası makas kullanılarak kaldırılabilir ancak retinaya zarar verebilir, bu ideal kaçınılmalıdır. Kısmen koroid tabakası çıkarın ve kaldırma kolaylaştırmak için kesti.
7. Koroid tabakası kaldırıldıktan sonra, retina şeffaf bir tabaka açık olarak Şekil 2b'de gösterilmektedir görülecektir. Koroid tabakası da kaldırılmış olabilir bir iç Bruch membranı vardır ama bir göz ile tespit etmek zordur.
8. Benzer şekilde, Şekil 2 c 'de gösterildiği gibi retinal tabakası kaldırma için iki forseps kullanabilir. Bu optik sinir yakınında eksize eğer retinada yüksek miktarda izole etmek kolaydır. Şekil 2B'de gösterildiği gibi, gözün tüm tabakalar artık görülebilir.
9. Retina dokusu kaldırıldıktan sonra, farklı amaçlar için kullanılabileceğini ve korunması için kullanılan bu nedenle sonraki adımları ve koşulları buna göre değişebilir. Örneğin,retina dokusunun RNA stabilizasyonu reaktifleri (RNAlater gibi) veya lizis tamponu (RNA ya da DNA izolasyonu için), dispase / tripsin (hücre izolasyonu için), sabitleme çözümleri (önceden için parafin veya OCT dokuların embed içeren tüpler yerleştirilebilir immünhistokimya).
10. Tüm çalışma alanı temizleyin ve% 70 izopropil alkol sprey kullanarak temizleyin.

3. Temsilcisi Sonuçlar

Şekil 1a da görüldüğü gibi corneo-skleral rim skleral jant ve endotel morfolojisi, genellikle penetran keratoplasti için kullanılan kornea bu tür gerekli miktarı ile doğru şekilde eksize kornea olduğunu. Eksize korneanın ön stromada donukluk varlığı ile bozuksa, korneanın endotel keratoplasti / arka lameller keratoplasti (stroma bir parçası olan endotel) için kullanılabilir. Endotel tabakasının zarar görmüş veya endotel hücre yoğunluğu <2200 hücre / mm ² ise (Bu takdirde, Oysaalian standart), kornea ön lameller keratoplasti (anterior stromada bir parçası olan epitel) için kullanılabilir. Endotel hücre sayımı gerekli az ise kornea tamamen bozuksa Şekil 1b, 3b ve 3c veya atılır gösterildiği gibi, bu araştırma için kullanılır olabilir, oysa, korneanın anterior lameller keratoplasti veya araştırma için kullanılabilir. Hasar doku ilgilenmedikleri bir nedeni olabilir, stromal ya Descemet endotel izleri yol önce katarakt ameliyatları, hastanın yaşam vb sırasında fiziksel yaralanma gelişimi nedenle, bunun için optik mikroskop altında yarık lambası ve sonra her doku kontrol etmek için gerekli olur ince izleri / kıvrımlar / müfrezeleri. Kornea genellikle organ kültürü (yaklaşık 31 ° C), genellikle Avrupa ülkeleri ya hipotermik koşulları kullanılmıştır (yaklaşık 4 ° C), genellikle kullanılan ABD. Olarak iki farklı koşullar altında muhafaza edilir Bu baraj yenilenmesine yardımcı olarak biz organ kültürü kullanınyaşlı epitel hücreleri, yüksek bir post mortem zaman yeniden canlandırmak endotel hücre kontrol etmek, bir cerrahi planlama için yeterli bir pencere sağlar 4 haftalık bir depolama süresi, vb kornea mikrobiyolojik (bakteriyel ve fungal) ve serolojik test için yeterli zaman verir de 7 gün boyunca taşıma ortamı muhafaza edilebilir.

Sklera tüm koroidal plaklar nazik kaldırılması sağlanması parçası kısmen kesilmiş olabilir. Şekil 4 'de gösterildiği gibi, optik sinir, koroid veya retina keskin kesilirken camsı sıvı ifraz olabilir. RNA analiz için eksize eğer retina kısa sürede dokular eksize gibi RNAlater muhafaza edilmelidir. Genellikle ° taze Eppendorf tüpleri (güvenli kilit boruları, 2 ml) C ye kadar kullanılan veya sevk kuru ile koroid ve retina tabakasının 1X1 cm eksize edilir ve 4 az 24 saat süreyle RNAlater içinde tutmak sonra -80 ° C altında korunur buz. Retina dokusunun uzak iris gelen optik sinir yakınında iki forseps kullanılarak eksize edilmelidirretina alınırken veya diğer pigmentli yapıları ile kirlenmesini önlemek için ve RNA gibi hemen koruyarak konteyner aktarılması gerekiyor siliyer marjı kararsız alır.

Şekil 1 bir iyi bir de kötü kalite kornea arasında karşılaştırma: a.) Düzgün eksize korneanın. Böyle bir kornea genellikle 4 hafta süreyle organ kültürü altında muhafaza edilir. Mikrobiyolojik (BACTEC 9240 cihaz kullanarak) ve morfolojik (hücre ölüm tespiti için tripan mavisi ile boyanan hücrelerin ve 100X büyütme ile mikroskop altında hücreleri inceleyerek) muayene hastane (Şekil 3a) taşındığında önce gerçekleştirilir; b) bükük kornea , bunlar da yüksek Descemet kıvrımları ve yarık lamba mikroskopta incelenir yüksek endotel hücre hasarına bağlı greft reddedilmesine yol açmaktadır. Böyle bir kornea genellikle res için kullanılırrama veya atılır.

Şekil 2. Retina dokusunun doğru bir eksizyonu sağlamak için kullanılan yöntem. A) 95 mm kavisli veya künt ucu steril makas ve 0.70 mm diş steril forseps ile yönetilen 100 mm 11X2 ile 24mm bıçak kullanarak oküler Dünya'dan sklera Dissecting. Sklera forseps makas kullanırken optik sinir doğru düz bir şekilde kesilmesi ile bir tarafı tutarak kesilmelidir. Koroid tabakası artık kolaylıkla görülecektir; b) 0.70 mm diş steril forseps tarafından yönetilen iki adet 100 mm 11X2 kullanarak, koroid yatan şeffaf retina tabakasının ortaya bir apart yırtmadan tarafından kaldırılır; c) Şeffaf retina tabakası çok dikkatli yakın eksize edilir Aynı forseps kullanılarak vitreus sıvı atılımı olmadan optik sinir. Forseps Her iki retinanın her tarafında tutmak gerekir ve doku hafifçe başlıyorum çıkarılmalıdırg optik sinir yakınında retina dokusunun iyi bir miktar elde etmek için, kornea doğru hareket. Doku farklı boyutlarda halinde kesilmiş ve analiz deneyler için kullanılan olabilir; d) kornea çıkarılmasını takiben gözün Farklı katmanlar bu şekilde görülebilir. Koroid vücut gözün diğer bölümlerine zarar vermeden retina tarafından ilk takip kaldırılır.

Şekil 3. Bir optik mikroskobun 100x büyütme altında incelendi hücre yoğunluğu ve morfolojisi farklı karşılaştırılması. A) İyi endotel hücre yoğunluğu (> 2200 hücre / mm ²⁾ ve morfolojisi (az polimorfizm, düşük dejenerasyon, hiçbir distrofi ve% 0 nakli için uygun olan bir korneada ölüm); b) Zayıf endotel hücre yoğunluğu (yaklaşık 1.200-1.400 hücre / mm ²⁾ ve morfoloji (çok yüksek polimorfizm ve Degenyaklaşık% 30-40 mortalite ile birlikte hücrelerin tüketmekte) Tripan mavisi sonra gözlenir; oküler Dünya'dan kornea alınırken c) endotelyal hücrelerin bir kısmı, endotel tabakasının ayrılması nedeniyle zarar görmektedir. Bu tripan mavisi ile bölgede boyanmış hücrelerin ölüm gözlenmesi ile teyit edilir, d) Descemet kıvrımları, bükme çapraz kornea gerginlik yaratma, eksizyon sırasında yoğun vb araçları kullanarak nedeniyle kornea kötü kullanımından oluşur. Şekil korneanın çevresi ve optik bölge arasında bulunan kalın gelişmiş iatrojenik kıvrımlar gösterir.

Koroid ve retinal dokulara Şekil 4. Hasarlar zamanla korneanın eksize ederken vitreus sıvısının vücuttan atılır. Retina zor kaliteli bir doku wi tüketim yapma vitreus karışmış olurkontaminasyon thout.

Tablo 1. Fondazione Banca de 2009 ve 2010 sırasında insan göz küreleri kullanılarak yapılan faaliyetler çeşitli özeti Occhi (Venezia, İtalya) Degli. Dokuların yaklaşık% 60 ve böylece bilimsel ve tıbbi araştırmalar için (yaklaşık% 40) oküler küreler yüksek bir sayı bırakarak nakli için kullanıldı.

Ek Şekil 1. Insan gözü ⁵ anatomisi. Insan gözü farklı yerlerinde dokuların yerini kesin olarak takip için kullanılır, bu şekilde belirtilir.

Tartışmalar

Doğru eksizyon ve kornea kalınlığı ve retina dokularında uygun korunması, gerekse bu endotel hasarı veya Descemet kıvrım sayısı yüksek gibi küçük kusurları greft sıcaklık değişimlerinin ise korneanın hatası veya yanlış ele retina dokuların bütünlüğünü tehlikeye atabilir yol açabilir gibi kritik öneme sahiptir. Bu yazının amacı, kornea kalınlığı ve retina dokularında transplantasyon veya araştırma amaçlı kullanım tehlikeye hasar veya tadilat neden olmadan, en iyi şekilde iz...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ürün tanımı	Boyutlar	Firma / Kurum
Güvenlikli neşter atılabilir	Blade boyutu 15	Swann-Morton
Steril bandajlar	5 cm X 5 cm, 8 katlı, 5 adet	Artsana
Steril tek kullanımlık tıbbi havlu	35 X 50 cm	U.Jet
Steril makas	Bıçakları 24 mm / toplam uzunluk. Künt, 95 mm kavisli	e.janach
Steril forseps	Paslanmaz çelik -100 mm 11 X 2 0.70 mm diş tarafından yönetildi	e.janach
Kornea pençe - Tek kullanımlık tıbbi cihaz		NIIOS (Hippocratech)
	Hazırlıklar
PBS	[10x] 900 ml d / w (saf su) 100 ml PBS	Sigma-Aldrich
Na-tiyosülfat	PBS [1x] 1 litre 1 gr Na-tiyosülfat	Sigma-Aldrich
I-PVP	1 litre d / w 5 gm I-PVP	Sigma-Aldrich

Bileşenleri	Satıcı	Katalog numarası	Konsantrasyon	Miktar
MEM(1X) sıvı	Invitrogen	32360-034		1900 ml'lik
Sodyum piruvat	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml / l)	20 ml
L-glutamin	Invitrogen	25030-032	2mm (10ml / l)	20 ml
Antimikotik / Antibiyotik	Sigma-Aldrich	A5955-20ML	10 ml / l	20 ml
Yeni doğan buzağı serumu	Invitrogen	26010-74	2 (% 20 ml / l)	40 ml

Bileşenleri	Satıcı	Katalog numarası	Konsantrasyon	Miktar
MEM (1X) sıvı	Invitrogen	32360-034		1800 ml'lik
Sodyum piruvat	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml / l)	20ml
L-glutamin	Invitrogen	25030-032	2mm (10 ml / l)	20ml
Yeni doğan buzağı serumu	Invitrogen	26010-74	2 (% 20 ml / l)	40 ml
Dekstran T500	Pharmacosmos	551005004007	% 6 (60 g / L)	120 g / l