Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma

Özet

Biz düşük basınçlı emme kullanarak fiberoptik bronkoskopi ve bronkoalveoler lavaj için bir araştırma tekniği açıklar. Bu teknik, akciğer bronkoalveoler yüzeylerinden bağışıklık hücreleri hasat etmek için kullanılır. Lokal anestezik ve hafif bilinçli sedasyon (midazolam) kullanılır. Denekler prosedür iyi ve deneyim minimal yan etkileri tolere.

Özet

Biz mukozal yüzeyinden yapışmayan hücreler ve akciğer astar sıvıyı çıkarmak için manuel el düzenlenen emme kullanarak bronkoalveoler lavaj (BAL) ile fiberoptik bronkoskopi için bir araştırma tekniği açıklar. Araştırma ortamlarında, BAL akciğer içinde doğuştan (akciğer makrofaj) örnekleme, hücre (B-ve T-hücreleri) ve humoral (immunoglobulin) yanıt sağlar.

BAL uluslararası araştırma amaçlı kabul edilen ve 1999 yılından bu yana teknik grubumuz tarafından İngiltere ve Malavi> 1.000 konularda yapılmıştır.

Bizim teknik aranan sıvıya nazik el vakum kullanır, bu BAL hacim döndü üst düzeye çıkarmak ve BAL sıvısı içindeki hücrelerin yapısını ve fonksiyonunu korumak ve büyümeyi kolaylaştırmak için canlılığını korumak amacıyla kirpikli epitelya az kesme kuvveti uygulamak için tasarlanmıştır ex vivo kültür içinde hücreleri. Araştırma tekniği bu nedenle daha büyük hacimli eklentileri kullanırtillate (tipik olarak 200 ml sırayla) ve hücre hasarı azaltmak için elle emme kullanmaktadır.

Hastalar, lokal anestezi verilir bilinçli sedasyon (midazolam) sunulan ve minimal yan etkileri ile de işlemi tolere edilir. Sözlü ve yazılı konu bilgi toleransını arttırır ve yazılı bilgilendirilmiş onam zorunludur. Konunun güvenlik her şeyden önemlidir. Konular dikkatle net katma ve dışlama kriterleri kullanılarak seçilir.

Bu protokol, potansiyel risklerin bir açıklama ve bunları azaltmak için atılan adımları, kontrendikasyonlar listesi öncesi ve işlem sonrası kontrolleri, yanı sıra hassas bronkoskopi ve laboratuvar tekniklerini içerir.

Giriş

Arka plân

Fiberoptik bronkoskopi klinik uygulama için geliştirilmiş olan ve yaygın olarak hem tanı hem de tedavi ^1,2 kullanılır. Bronkoalveoler lavaj (BAL) yapışkan olmayan hücreler ve mukoza yüzeyinden akciğer astar sıvıyı ortadan kaldırır, biyopsi ve mukozal dokuları submukozal örnek için kullanılır. Araştırma ortamlarında, BAL akciğer içinde, (akciğer makrofajlar ^3-5) doğuştan gelen bir hücre (B-ve T-hücreleri, ⁶⁾ örnekleme ve humoral (immunoglobulin ⁷⁾ yanıt sağlar.

BAL uluslararası araştırma amaçlı ⁸ için kabul edilir ve 1999 yılından bu yana teknik grubumuz tarafından İngiltere ve Malavi> 1.000 konularda yapılmıştır. Bu deney, insan pnömokok taşıyıcı ^9,17, biyokütle duman ^5, HIV ve aşılama ve ilave tedavi de dahil olmak üzere Stu pnömokok antijene, doğal hücresel ve humoral bağışıklık tepkilerinin çalışmalarda bu tekniği kullanmakpnömoni kurtarma içine ölür. Bizim teknik aranan sıvıya nazik el vakum kullanır, bu dönen BAL hacmini maksimuma çıkarmak ve BAL sıvısı içindeki hücrelerin yapısını ve fonksiyonunu korumak için kirpikli epitelya az kesme kuvveti uygulamak için tasarlanmıştır.

Bir araştırma bağlamında BAL tanı veya tedavi parası kazanmak hedefliyoruz solunum ve yoğun bakım doktorları (sık olarak adlandırdığı bronşiyal yıkama, yıkamalar lavaj veya BAL) tarafından uygulanan farklı bir tekniği kullanır. Araştırma teknik hücreler hasat ve ex vivo kültür içinde hücrelerin büyümesini kolaylaştırmak için canlılığını korumak için tasarlanmıştır. Bu nedenlerle araştırma tekniği (genellikle 200 ml sırayla) daha büyük bir hacim instillate kullanır ve hücre hasarını azaltmak için el emme kullanır. Hastalar, lokal anestezi verilir bilinçli sedasyon (midazolam) sunulan ve minimal yan etkileri ile de işlemi tolere edilir. Sözlü ve yazılı subjektift bilgi toleransını arttırır ve yazılı bilgilendirilmiş onam ^1. zorunludur.

Hedef

Genel amacı prosedür güvenli ve etkili olmasıdır. Denekler herhangi bir fizyolojik rahatsızlık yaşamazsınız ve operatörler sürekli konulardan BAL 100 ml aşan toplamak gerekir. İşlemden sonra, denekler minimal yan etkileri deneyim gerekir.

Güvenlik

Konunun güvenlik her şeyden önemlidir. Konular dikkatle net katma ve dışlama kriterleri kullanılarak seçilir. Bu protokol, potansiyel riskler ve bunları hafifletmek için atılan adımlardan bir açıklamasını içerir.

Araştırma bronkoskopi Kontrendikasyonları mutlak veya göreceli olarak ifade edilebilir, ve ve dışlama kriterleri olarak çalışma protokolüne dahil edilmiştir. Bizim konular tüm tam sağlığını sağlamak için taranır.

Mutlak kontrendikasyonlarkararsız servikal omurga, tepkisiz hipoksi, kararsız angina, kanama diyatezi, ve malign kardiyak aritmi içerir.

Artmış komplikasyon oranları ile ilişkili durumlar dahil olmak üzere Göreceli kontrendikasyonlar, şunlardır:

Genel: kötü kooperatif konu ^1, önemli bir genel tıbbi bir sorun, örneğin epilepsi, lidokain veya midazolam, hamilelik, kötü beslenme olumsuz tepkiler bilinen önceki tolere bronkoskopi,.

Solunum:, hiperkapni, kararsız astım ^1, önemli ölçüde bozulmuş solunum fonksiyonu ¹ (FEV ₁ <1 L), pulmoner hipertansiyon hipoksi [havanın <% 94 üzerine doygunlukları (sats)].

Kardiyovasküler: üremi, miyokard enfarktüsü ^1, vena kava tıkanıklığı 6 hafta içinde.

Diğer: immunmodulatör (bizim grup düzenli olarak bu prosedürü gerçekleştirirHIV pozitif kişilerde dure).

Araştırma için BAL ile ilgili riskler - Bakınız Tablo 1.

Protokol

1.. Konular Solunum Araştırma Hemşiresi tarafından Geliş Met vardır

1. Konu katı gıda ve berrak sıvıların ¹ için 2 saat süreyle> 4 saat oruç olmuştur.
2. Prosedürü (standart hastane politikası uyarınca) uygun öncesi ve işlem sonrası kontrolleri ile bir günlük vaka olarak gerçekleştirilir.
3. Konu bir hastane elbisesi giyer.
4. Küçük bir göstergesi kanül (ideal sol eline) yerleştirilir ve işlem sonrası iyileşme dönemi ¹ sonuna kadar yerinde kalır.
5. Uygulama öncesi gözlemler alınır (kan basıncı, kalp hızı, oksijen satürasyonu [sats]).
6. Konu bronkoskopi aktarılır.

2. Konu Bronkoskopi deneyimli bir Solunum Araştırma Klinisyen tarafından Suite Prosedür için hazırlanır

1. 3-kurşun EKG, pulse oksimetre ^1,10 ve tansiyon aleti; izleme ekipmanları da dahil olmak üzere takılır. Anesthetic destek yazılı bilgilendirilmiş onam dahil olmak üzere gerekli değildir.
2. Oksijen>% 90 ¹ satürasyonu elde etmek kadar 4 L / dk nazal kanül aracılığı ile teslim edilebilir.
3. Operatör, bu steril serum fizyolojik aspire etkili emme sağlanması içerir, bronkoskop denetler.
4. Lidokain ile topikal anestezi (lidokain kullanılarak) (Instillagel ¹ kullanarak) burun ve ağız mukozasında elde edilir
5. Sedasyon uygun ve konu ile talep varsa, intravenöz midazolam ¹ verilir. Uygun bir ters madde (flumazenil) hemen kullanılabilir.
6. Resüsitasyon ekipmanı ^1,10 hazır olmalıdır.

3. Bronkoskop yerleştirilebilirler edilir

1. Entübasyon burun üzerinden genellikle. Bu durum, nazal polipler, iltihaplı konka ya da sonra herhangi bir rahatsızlık söz konusu ağız yolu ile entübe mümkün değilse (bir ağız koruma önlemek için kullanılır) kapsamı veya deneğin dişlerine zarar verebilir.
2. Gırtlak topikal anestezi genellikle 4-6 ml toplam kullanılan,% 4 lidokain kullanılarak tamamlandı. Genellikle bu damlatılmasından üzerinde öksürüğe neden olur.
3. Ses telleri geçti ve olan sağ alt lob (RLL) ve sağ orta lob (RML) bölünmesi de ve RML girişinde, karina 2 lidokain% 2 ml'lik numuneler kullanılarak daha fazla mukozal anestezi.
4. Bronkoskop emme ('Wink test', emme düğmesi kullanılarak uygulandığı zaman hava yolu daraltır ve böylece güvenli bir konumda olmak için yeterince uzak ama çok uzak olmayan bir konumda, ideal medial segmentte, RML içinde konumlandırılır .)
5. İyi konumlandırma tam bronkoskopist ve hemen nazik emiş tam kapanmıyor bir havayolu konumunda muhafaza edilebilir bir bronkoskop ile Göz testi sırasında belirtilir.

4. BAL Yapılır

1. Dört 60 ml şırınga önceden vardır60 ml, 50 ml, 50 ml, ve birbirini takip eden şırıngalar içinde, 40 ml - ısıtıldı, normal tuzlu su ile doldurulur. Konu ve bronkoskopist hazır olduğunuzda bronkoskopist RML olarak konumunu korumaktadır ederken tuzlu ilk şırınga bronkoskopi asistanı tarafından telkin edilir.
2. Nazik el emme sonra aynı port ve 50 ml şırınga kullanarak asistanı tarafından yapılır.
3. Bu prosedür, o zaman özel bir teknik kullanılan 200 ml'lik bir maksimum hacme sahip, bir başka 3 kez tekrar edilir.
4. Alınan BAL sıvısı zaten erimeye buz üzerinde tutulan etiketli kaplar içine yavaşça dışarı atılır. Cam kaplar, hücre bağlanmasının inhibe edilmesi ve hücre dönüş en üst düzeye çıkarmak amacıyla presiliconized olabilir.
5. BAL sıvısı yüzey aktif maddeler ile oluşan yüzey, sabun köpüğü ile ışığa karşı puslu görünür.
6. Bronkoskop yavaş yavaş tamamen çekilir.
7. BAL sıvısı anında işlem için buz üzerinde bir gecikme olmaksızın taşınır.

5. Konu Kurtarma

1. Konu bir koğuşta solunum araştırma hemşiresi tarafından 2-4 saat için geri kazanılır.
2. Bu süre içinde onlar (kendi yutmak güvenli olarak değerlendirilir zaman) işleminden sonra, sırayla aspirasyon riskini azaltmak dinlenmek ve daha sonra sadece yemek ve> 60 dakika ¹ içmek için izin verilir.
3. Mesaj usul gözlemler izlenir ve kaydedilir. Bir klinik muayene deşarj öncesinde oluşur.
4. Konu yaygın yan etkileri (ateş, hafif sağ submamariyan göğüste rahatsızlık hissi, boğaz ağrısı) hakkında Taburcu bilgi verdi ve önemli yan etkileri ¹ oluşması durumunda bir irtibat numarası verilir.
5. Konu takip edilir 1-5 gün bir klinik temas sonrası prosedür de. Bu telefonla ya da şahsen olabilir.

6. Hücreler Laboratuvarında İzole nelerdir - Erime Ice gerçekleştirin nerede Olası

1. BAL sıvısının hacmi, steril bir gazlı bez bir çift tabaka ile kaydedilir ve süzülürönceden soğutulmuş, steril bir 50 ml santrifüj tüplerine mukus fişler kaldırın.
2. Hücreler, 5-10 dakika boyunca 4 ° C'de 500 x g'de santrifüj ile pelet haline getirildi ve 50 ml normal tuzlu su içinde soğuk bir vorteks ile yıkanır. Santrifüj bir kez tekrarlanır.
3. Hücreler (RPMI-1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin + Penisilin [40 IU / ml], streptomisin [75 IU / ml] ve amfoterisin B [0.5 IU / ml]) ve kültür ortamında yeniden süspanse diferansiyel sayma tripan mavinin eşit hacmi ve bir hemasitometre kullanılarak gerçekleştirilmiştir.
4. Hücre süspansiyonu, uygun doku kültür levhaları içerisine pipetle tanıtıldı (biz 1 x 10 ⁶ hücre / ml kullanımı) ve makrofaj yapışmasını sağlamak için 3 saat boyunca 37 ° C'de inkübe istenilen yoğunluğuna normalize edilir. Oyuk başına bu hücre süspansiyonu 1 ml 24 oyuklu kültür plakaları için uygundur.
5. Lenfosit çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra kültür ortamı nazikçe yukarı ve aşağı 3x pipetle ve toplanır. Bu ortam, lenfositler içerirve yapışmayan makrofajlar ve lenfosit fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilir, aynı zamanda saflaştırma adımları kullanılabilmektedir makrofajlar kaldırmak için CD14 manyetik boncukları ile örneğin.
6. Makrofaj çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra, ortam dikkatlice minimal pipetleme ile çıkarılır ve taze antibiyotikler olmadan, sıcak bir ortam (RPMI 1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin) ile değiştirildi. Makrofajlar (bkz. Şekil 1), doku kültürü plakasına yapışık.

Sonuçlar

Iyi klinik sonuç 100 ml üzerinde bir BAL hacmi ve en deneyimli olan bir konu, küçük bir rahatsızlık (bkz. Tablo 1) vardır. Bu rahat ve kooperatif konuyu gerektirir. Klinisyen, (Malzemeleri) tam hazır emin olmak ve anlayış gönüllü doğru olmalıdır.

(Diferansiyel sayımı da dahil olmak üzere), hücresel verimle arası ve denekler arası değişkenlik tarif edilmiştir. Sağlıklı deneklerden Diferansiyel hücre sayımları, tipik haliyle>% 90, nötrofillerin az sayıda ile makrofajlar (<% 2) ve lenfositler (% 5-10) 'dir. Mikroskop lamı üzerine santrifüj BAL hücreleri bu bilgiyi (Şekil 1) elde etmek için bir diferansiyel nükleer boyası ile boyanmış olabilir. Şekil 1 'de, BAL hücreleri sabit ve üreticinin talimatlarına göre Hemacolor lekeleme kullanılarak boyandı edilmiştir. En az 300 hücre makrofajlar için güvenilir sonuçlar elde etmek için sayılmalıdır,nötrofiller ve lenfositler, nadir hücre tipleri için 500 hücre.

Tehlike	Risk	: Bu protokolde İndirimli
Bronkoskopi ve BAL 1, 14 Etkisi
Hafif rahatsızlık	<25% 14 #	Uygun analjezi ve sedasyon. Konuya güvenen ve şefkatli bir yaklaşım.
Epistaksis	<% 1 #	Sadece nazal entübasyon için hafif basınç. Eğer konu rahatsızlık veya daralmış diyafram - Oral entübasyon yerine.
Endobronşiyal kanama (hemoptizi)	<% 0.1 * 15	Hiçbir biyopsi alınır. Bronkoskopi sırasında dikkatli kontrolü - solunum mukozasını kaçınarak.
Nausadet, kusma ve aspirasyon pnömonisi	<0.02% 14, #	Katı gıda> 4 saat uygulama öncesi 1 Oruç. Yeterli lokal anestezi. İşlem sırasında Semirecumbent konumu. Dikkatli sonrası prosedür gözlem.
Ateş	0.01 14-1% # 16	Inflamasyon ile ilgilidir ve BAL maksimal toplama minimize edebilir. Tek lob BAL sadece. #
Boğaz burun / boğaz ve ses kısıklığı	<25% 14 #	Burun, boğaz ve gırtlak (öksürük minimize) Yeterli lokal anestezi.
Enfeksiyon	HIV pozitif 14, # 1%	Standart bronkoskop yıkama prosedürü 1.. Tek lob BAL sadece. # Enfeksiyonun erken tanınması: 1 saat An içinde klinik muayene1-5 gün sonra bronkoskopi d klinik temas.
Göğüs ağrısı / öksürük	<0.2% 14, #	Tek lob BAL sadece. Maksimal BAL koleksiyonu. #
İlaçların etkileri: lidokain, midazolam
Aritmi	* Çok nadir	5 mg / maksimum kullanılan 14 lidokain kg. Telkin ısındı normal tuzlu su. # Pulse oksimetre (oksijen takviyesi ile sats>% 90), işlem boyunca kardiyak izleme. Benzodiazepin antagonisti (flumazenil) hemen kullanılabilir.
Dezoryantasyon / ajitasyon	<% 0.1 † #
Kardiyo solunum depresyonu	* Çok nadir

* 1.500 'den fazla araştırma işlemleri Grubumuzun deneyimli değil.

† idiosdaha çok doza bağımlı bir tepki daha yncratic.

# 1500 üzerinde araştırma işlemleri Bizim grubun deneyim.

Tablo 1. Araştırma için BAL ile ilgili riskler. Bu tehlike ya da risk içeren ve bu anlatılan tekniği kullanarak nasıl azaltılır. Bronkoskopi / BAL ve kullanılan herhangi bir tıbbi ilaçların etkileri etkileri dahildir.

Şekil 1. BAL makrofaj ve sıra Nötrofiller gösteriliyor Bir Mikroskop Slayt. BAL hücreleri, metanol içinde sabitlendi ve Hemacolor kırmızı (eosin-Y) ve mavi (gök B) ile boyanmış edilmiştir.

Tartışmalar

İyi sonuçlar elde etmek için, aşağıdaki faydalıdır:

1. Dil ve posterior orofarinksin dibinde iyi anesthetisation. Bu konunun usul hoşgörü ve genel rahatlığı artırır, çünkü bu önemlidir.
2. Bir çocuk (dış çapı 3,4-3,6 mm) veya yetişkin bronkoskop (dış çapı 4,8-5,9 mm) da kullanılabilir.
3. Nazal entübasyon sırasında herhangi bir rahatsızlık varsa, ağızdan entübasyon tercih edilir. Genelde burun entübasyon basit bir tekniktir ya ya terk edilmelidir.
4. Orofarenks lidokain ilk uygulamasından sonra, konu bronkoskop ağızdan sokulur, özellikle anestezi başlangıcı bekleyen çekilmesini bronkoskop tercih edebilir.
5. En az 10 x 10 ml şırınga lidokain 2-4 ml ile doldurulmuş emin olun. Hava doğrudan kordonlar ve endobronşiyal muco üzerine anestezi geliştirilmiş teslimini sağlayan şırıngalar bırakılmalıdırsa.
6. İşlem sırasında öksürme yana önemli ölçüde BAL verimi azaltır; ısıtılmış tuzlu su kullanılarak ve iyi mukozal anestezi bu azaltmak için önemli olan.
7. 50 ml şırıngalar ısıtıldı tuzlu su ile doldurulmuş olması gerekir. Bu ölü alan kaybı ve terminal solunum yolları içine çalıştıran kalanına bağlı olarak 10-20 arasında ml elde etmek için aşılanan normal tuzlu su, ilk 50 ml yaygındır. Bundan başka alikotları sıvı daha büyük bir kısmının geri döner.
8. Operatör, her zaman steril serum fizyolojik aspire etkili emme sağlanması da dahil olmak üzere, entübasyon öncesi bronkoskop kontrol etmelisiniz. Emme kaybı yaygın nedeniyle bronkoskop veya emme cihazı ile bağlantıları etrafında tüp veya sızıntı dolaşmasının oluşabilir.
9. Manuel emme sırasında, ideal hava yolu daraltmak gerekir. Emme tekrarlı havayolunu çökerse, BAL döner bir valf mekanizması azalır ve lokal inflamasyon ve kanama olasılığı daha yüksektir vardır: Bu da solunum yolları m yaparcevher sinirli ve öksürük daha muhtemeldir. En uygun RML Subsegmental şube seçimi ve düşük emiş basıncı kullanarak bu nedenle önemlidir hem de.
10. Hava sürekli aspire edildiğinde bronkoskopa şırınganın bağlantısını ve aynı zamanda uzak solunum yollarında bronkoskop konumunu yeniden kontrol edin. Bu tekrarlayan bir sorun olup olmadığını, işlem sonrası bronkoskop kendisi hiçbir delik olmadığından emin olmak.
11. Sigara içenlerin BAL nedeniyle sık sık hücre içi partikül varlığı koyu. Sigara içenler daha az iyi bronkoskopi tahammül ve artan öksürük olabilir.
12. Tercih BAL hacim verimi> 100 ml. > 150 ml'lik bir verimi mükemmeldir. Biz> 170 ml herhangi bir verim yaşamamış. Hücre verimi ve BAL hacim verimi arasında doğrusal bir ilişki yoktur.
13. <100 ml Verimleri, bizim deneyim, öksürük, göğüs ağrısı ve ateş gibi yan etkilere yol olasılığı daha yüksektir. Biz <100 verimle konular Reco olması ml öneririzsol lateral pozisyonda Vered, bu kalan akciğer sıvısının drenajını yardımcı olabilir.
14. Klinik temas yan etkileri sağlamak için 1-5 gün içinde konu ile yapılmalıdır.
15. Midazolam sedasyon İngiltere'de deneklerin% 50 ve Malavi <% 5
16. Bizim tecrübelerimize göre, bu teknik ile önemli bir öğrenme eğrisi vardır. Örneğin doktor ve hemşire arasında koordinasyon zaman alır ve verimleri öğrenme sürecinin başında genellikle düşüktür.
17. HIV pozitif kişilerde, biz profilaktik prebronchoscopy antibiyotik kullanın.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Material	Company	Catalogue Number	Comments
Fibreoptic bronchoscope, light and suction source	unspecified
Surgical gown, sterile gloves	unspecified
Sphygnomanometer	unspecified		For continuous patient monitoring
Pulse oximeter	unspecified		For continuous patient monitoring
3 lead ECG monitor	unspecified		For continuous patient monitoring
Nasal oxygen delivery 2-4l/min	unspecified
Lidocaine 10% spray (Xylocaine)	AstraZeneca		For topical anaesthesia
Lidocaine hydrochloride 2%	unspecified		For topical anaesthesia
Lidocaine gel (Instillagel)	Farco-Pharma, Germany		Alternative products available from other suppliers
Normal saline, sterile 200ml	unspecified		Warm to 30oC
10ml taper-end syringe (x10)	unspecified		For administration of lidocaine
Intravenous cannula 18G	unspecified		For administration of midazolam
Midazolam	unspecified		For sedation
Flumazenil	unspecified		Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only)
60ml taper-end syringes (x4)	unspecified		For normal saline injection and BAL fluid withdrawal. May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope
Sterile gauze swab	Vernaid, UK		Alternative products available from other suppliers
Sterile container for BAL fluid	See text and comments		Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml)
Sigmacote	Sigma, UK	SL2	Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer’s MSDS
Centrifuge	unspecified		At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred.
Shandon Cytospin centrifuge	Thermo Scientific, UK		For differential count only
RPMI 1640 medium with L-glutamine	Sigma, UK	R8758	Alternative products available from other suppliers
Fetal bovine serum	Sigma, UK	F6178	Alternative products available from other suppliers
Penicillin-Streptomycin	Sigma, UK	P4333	Alternative products available from other suppliers
Amphotericin B	Sigma, UK	A2942	Alternative products available from other suppliers
Tissue culture plates	Greiner Bio-One, UK	662160	Alternative products available from other suppliers
Glass microscope slides	unspecified		For differential count only
Shandon cytofunnel	Thermo Scientific, UK	A78710003	For differential count only
Shandon cytoclip	Thermo Scientific, UK	59910052	For differential count only
Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents)	Merck, Germany	111661	Use according to manufacturer’s instructions