Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Biz omurgasız koku yolunun ilk üç aşamada koku-uyarılmış yanıtlar karakterize etmek ekstraselüler çoklu ünite kayıt tekniği varyasyonları göstermektedir. Bu teknikler kolayca başka sinir sistemlerinin topluluk etkinliği incelemek için adapte edilebilir.
Olfaktör ipuçları Algılama ve yorumlama birçok organizma hayatta kalmak için çok önemlidir. Dikkate değer, filumlar genelinde türlerin kimyasal algılama için biyolojik yaklaşım evrimsel zaman 1 fazla optimize edildiğini çarpıcı benzer koku sistemleri düşündüren oylandı. Böcek koku sisteminde, koku aksiyon potansiyellerinin trenler içine kimyasal uyaranlara dönüştürmek anteni koku reseptör nöronları (ORN) tarafından transduced edilir. ORNs Duyusal input antennal lob (; omurgalı koku ampul benzer bir yapı AL) ulaştırılıyor. 2,3; al, kokular için sinirsel temsil asıl (nöronlar da projeksiyon nöronlar olarak anılacaktır PNS) oluşan bir grup dağıtılmış zamanmekansal ateşleme kalıpların şeklini alır. AL çıkışı sonradan mansap mantar vücut (MB), olfaktör bellek ve 4,5 öğrenme ile ilişkili bir yapı içinde Kenyon hücreleri (KCS) tarafından işlenir. OnuE, bu koku devrelerde koku-uyarılmış nöral yanıtlarını izlemek üzere elektrofizyolojik kayıt teknikleri sunuyoruz.
İlk olarak, ORNs 6,7 popülasyonlarının seviyesinde koku-uyarılmış yanıtları incelemek için, tek bir sensillum kayıt yöntemi sunulmaktadır. Biz ekstraselüler ORN yanıtları izlemek için elektrotları olarak salin dolu bilenmiş cam pipetler kullanımını tartışmak. Sonra, ekstraselüler ticari bir 16 kanallı elektrot 3 kullanarak PN tepkileri izlemek için bir yöntem mevcut. Ismarlama bir 8-kanal bükülmüş tel tetrode kullanarak benzer bir yaklaşım Kenyon hücre kayıtları 8 için gösterilmiştir. Biz deney düzeneği ve bu tekniklerin her biri için bugünkü temsilcisi kayıt izlerinin ayrıntıları.
1. Koku Hazırlama ve Gönderme
2. Tek Sensillum Kayıt için Locust Anten hazırlanması
3. Tek Sensillum Kayıt Olfaktör Reseptör Nöronlar (ORNs) den Koku-uyarılmış yanıtlar Monitör
4. Antennal Lob ve Mantar Vücut Kayıtları için Locust Diseksiyon Prosedürü
5. Multi-ünite antennal Lob gelen Kayıtlar veMantar Vücut
6. KC Kayıtları için Twisted Telinin olun Prosedürleri
Iki farklı alkolün bir tek ORN kokusu-uyarılmış yanıtları Şekil 3B 'de gösterilmiştir. Kayıt konumuna bağlı olarak (sensilla tipi, elektrot yerleştirme) çoklu ünite kayıtları elde edilebilir.
AL bir kayıt gelen bir ham hücre dışı dalga Şekil 6A'da gösterilmiştir. Aksiyon potansiyelleri veya farklı PNS kaynaklanan değişen genliklerinin sivri Bu gerilim iz görülebilir. Keçiboynuzu antennal lob eksitatör projeksiyon nör...
En uyarıcılardır nöron toplulukları dağıtılmış kombinatoryal tepkiler çağrıştırıyor. Bu nedenle, çok-nöron aktivitesi eşzamanlı izleme bilgisi beyin sinir devreleri ile temsil edilen ve nasıl işlendiğini uyarıcı özel anlamak için gereklidir. Burada, böcek koku yolu boyunca ilk üç işleme merkezlerinde koku-uyarılmış yanıtlar karakterize ekstrasellüler çoklu ünite kayıt teknikleri göstermiştir. Biz burada sunulan tekniklerin koku kodlama önceki çalışmalarda çok sayıda kullan?...
Çıkar çatışması ilan etti.
Cömert start-up fonları Biyomedikal Mühendisliği Bölümü Washington Üniversitesi, Sistemleri Neuroscience hibe, Donanma Araştırma hibe bir Office için bir McDonnell Merkezi (Grant #: N000141210089) BR yazarlar bu iş için fon aşağıdaki teşekkür etmek istiyorum
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Isim | Şirket | Katalog Numarası | Yorumlar |
Elektrofizyoloji Ekipmanları | |||
AC yükselteç | ÇİM | Model P55 | Tek sensillum kayıtları için |
Ses monitörü (model 3300) | AM Sistemleri | 940000 | |
16 kanal ön-amplifikatör ve amplifikatör Ismarlama | Cal. Tech. Biyoloji Elektronik Mağazalar | AL ve MB kayıtlar için | |
Veri toplama ünitesi | National Instruments | BNC-2090 | |
Fiber optik ışık | TEFE | SI-72-8 | |
Işık kaynağı 115 V | TEFE | NOVA | |
Manuel mikromanipülatör | TEFE | M3301R | keçiboynuzu beyin kayıtları için |
Boom stand Stereomicroscope1 | Leica | M80 | keçiboynuzu beyin kayıtları için |
Stereomicroscope2 | Leica | M205C | Tek sensillum kayıtları için |
Titreşim izolasyonu tablosu | TMC | 63-500 serisi | |
Motorlu mikromanipülatör | Sutter Aletleri | MP285 / T | |
Osiloskop | Tektronix | TD2014B | |
Elektrotlar / İnşaat Araçları | |||
16 kanallı elektrot | NeuroNexus | A2X2-tet-3mm-150-121 | antennal lob kayıtları için |
Filament, ID 0.69 mm Borosilikat kılcal tüpler | Sutter Aletleri | BF120-69-10 | Cam elektrotlar yapmak için |
Mikropipet çektirme | Sutter Aletleri | P-1000 | |
Fonksiyon jeneratörü | Multimetre Atölyesi | SG1639A | altın kaplama elektrotlar için |
Altın kaplama çözeltisi (siyanür olmayan) | SIFCO Sektörler | NC SPS 5355 | |
Empedans test | BAK Electronics Inc | IMP-2 | altın kaplama elektrotlar için |
Döner Anahtar | ELECTROSWITCH | C7D0123N | altın pl içinating elektrotlar |
Darbe izolatörü | TEFE | A365 | altın kaplama elektrotlar için |
Q serisi elektrot tutucu | Warner Instruments | 64-1091 | |
Gümüş tel 0.010 "çap | AM Sistemleri | 782500 | Toprak elektrodu |
8 Pinli DIP IC yuva | Digikey | ED90032-ND | |
Filament, ID 0.58 mm Borosilikat kılcal tüpler | Warner Instruments | 64-0787 | bükülmüş tel tetrode inşaat |
Isı tabancası | Weller | 6966C | |
Rediohm-800 tel | Kanthal Hassas Teknolojileri | PF002005 | |
Titer plaka çalkalayıcı | ThermoBilimsel | 4625Q | büküm teller |
Karbür makas, 4.5 " | Biyomedikal Araştırma Instr | 25-1000 | bükülmüş tetrode telleri kesmek için |
Güzel nokta cımbız | HECO | 91-F5'i-SA | dışında alay tetrode teller için |
Koku Gönderme | |||
6 ml şırınga | Kendall | 1180600777 | özel tasarlanmış aktif karbon filtre |
Kahverengi koku şişeleri | Balıkçı | 08-912-165 | |
Kömür | BuyActivatedCharcoal.com | GAC-48C | |
Kurutucu | Drierite | 23005 | |
Drierite gaz kavanoz kurutma | Fischer Scientific | 09-204 | |
Şirink tüplerde Isı | 3M | EPS-200 | koku filtre hazırlığı |
Derialtı iğne alüminyum merkezi, ölçer 19 | Kendall | 8881-200136 | koku şişeleri için giriş ve çıkış hatları sağlamak için |
Madeni yağ | Mallinckrodt Kimyasallar | 6357-04 | koku seyreltme için |
Nalgene plastik boru, 890 FEP | Thermo Scientific | 8050-0310 | taşıyıcı gaz teslimatı için |
Pnömatik picopump | TEFE | sys-pv820 | koku teslim |
Polietilen boru Kimlik 0.86 mm | Intramedic | 427421 | koku şişesi çıkışı connecti içinons ve tuzlu bolluğu tüp |
Tıpalar | Lab Pure | 97041 | koku şişeleri sızdırmazlık için |
Zaman bandı | PDC | T-534-RP | |
Boru luer | Cole-Parmer | 30600-66 | |
Vakum tüp | McMaster-Carr | 5488K66 | |
Hazırlık / Diseksiyon | |||
100 x 15 mm petri | VWR International | 89000-304 | |
18 AWG bakır telli | Lapp Kabel | 4510013 | tel yalıtım kauçuk conta olarak kullanılır |
22 AWG çok telli Kargaburun tel | Alphawire | 1551 | beyinplatform |
Batik balmumu | Jakarlı | 7946000 | |
Diş periferi Wax | Henry-Schein Dental | 6652151 | |
Electrowaxer | Almore Uluslararası | 66000 | |
Epoksi, 5 dk | Permatex | 84101 | |
Derialtı iğne alüminyum merkezi | Kendall | 8881-200136 | |
Streptomyces griseus gelen Proteaz | Sigma-Aldrich | P5147 | keçiboynuzu beyin desheathing için |
Sütür iplik steril olmayan | Balıkçı | NC9087024 | gut çıkarıldıktan sonra karın montajı için |
Vetbond | 3M | 1469SB | ben sızdırmazlık içinputation siteleri |
Dumont # 1 forsepsi (kaba) | TEFE | 500335 | |
Dumont # 5 titanyum forseps (ince) | TEFE | 14096 | |
Dumont # 5SF forseps (süper ince) | TEFE | 500085 | keçiboynuzu beyin desheathing |
10 cm makas diseksiyon | TEFE | 14393 | bacaklarını ve kanatlarını kaldırmak için |
Vannas makas (ince) | TEFE | 500086 | foregut kesme, manikür kaldırmak için |
Salin Profusion | |||
Uzatma hızı akış regülatörü ile ayarlanır | Moore Tıp | 69136 | Tuzlu su akış düzenleme için |
IV idaresi ile ayarlanırY enjeksiyon yerinde | Moore Tıp | 73190 | Tuzlu su akış düzenleme için |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır