JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Biz bir non-invaziv multimodal bleomycin Çift Kişilik boğaza korumak tarafından indüklenen fare akciğer fibrozis modelinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı yaklaşım Imaging tanımlamak.

Özet

İdiyopatik Pulmoner Fibrozis (IPF) akciğer fonksiyon ve solunum yetmezliği nedeniyle sonraki ölüm önemli bozulma nedenleri akciğer mimari, ilerici ve geri dönüşü olmayan imha ile karakterize bir ölümcül akciğer hastalığıdır.

Deneysel hayvan modelleri IPF patogenezinde bleomycin idare tarafından indüklenen. Bu çalışmada, bir çift boğaza bleomycin korumak tarafından indüklenen bir IPF benzer fare modeli araştırıyoruz. Standart histolojik Değerlendirmeler akciğer fibrozis çalışmak için kullanılan invaziv terminal işlemlerdir. Bu eser amacı akciğer fibrozis floresan moleküler tomografi (FMT) ve mikro-CT gibi noninvaziv görüntüleme teknikleri izlemektir Bu iki teknoloji Histoloji bulguları ile doğrulanmış gerçek zamanlı izleme non-invaziv IPF hastalık şiddeti ve ilerleme için devrimci bir fonksiyonel yaklaşım temsil edebilir. Farklı yaklaşımlar füzyonu nerede patolojik bir durumda oluşan moleküler olaylar ile FMT görülebilir ve sonraki anatomik değişiklikler mikro-CT tarafından izlenebilir IPF hastalığı anlamak için bir adım daha ileri temsil eder.

Giriş

İdiyopatik Pulmoner Fibrozis (IPF) ne yazık ki sık sık tanı1dört yıl içinde ölümcül akciğer fonksiyonları progresif azalma ile kronik akciğer hastalığı var. Hücre dışı matriks ifade ve fibroblast proliferasyonu IPF en önemli özellikleri vardır, ama Patogenez henüz tam olarak anlaşılamamıştır. Birden fazla döngüleri akciğer yaralanmalara yol açar değişiklik Mezenkimal hücre döngüsü yayılması, abartılı birikimi fibroblastlar ve myofibroblasts, alveoler epitel hücreleri imha neden en desteklenen hipotezdir ve artan matris üretim. Arabulucu gibi matriks metalloproteinazların (MMPs) dysregulated fibrozis gelişiminde insan IPF veya hayvan modellerinde bleomycin kaynaklı bulunmuştur Bu süreçlerle ilgili. Kontrolsüz MMP üretim anormal yara onarım1,2taklit eden bir dengesiz kollajen birikimi için akciğer interstitium ve alveoler alanı içinde açar.

İlaç bulma ve geliştirme için ana engellerden biri insan Patogenez ve hastalık fenotip taklit erişilebilir fare modelleri olduğunu. Farklı ajanlar akciğer fibrozis hayvan modellerinde ikna etmek için kullanılmıştır: ışınlama zararı, yönetim asbest ve silis, yönetim fibrinogenic sitokinler ve bleomycin3,4; Ancak bleomycin en kullanılan fare, rats, eskiden şiling şimdi pigs, hamster, adatavşanı5 veya büyük hayvanlar (insan dışı primatlar, atlar, köpekler ve ruminants)6,7. Bleomycin antibiyotik bakteri Streptomyces verticillus8 tarafından yapılan ve bir anti-kanser ajanı9olarak kullanılır. Pulmoner Fibrozis uyuşturucunun ve bu nedenle ortak bir yan etkisi, Pulmoner Fibrozis ikna etmek için deneysel hayvan modellerinde kullanılır.

Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis modellerinde, 14-21 gün sonra bleomycin yönetim fibrotik lezyonlar ortaya çikmaktadir. Sunulan çalışma, biz yeni farelerde akciğer fibrozis Çift Kişilik bleomycin boğaza korumak tarafından ikna etmek için kullanılan protokol. Bleomycin fare modeli yeni ilaçlar üzerinde kurulan fibrotik lezyonlar değerlendirilmesi gerektiğinden çok zaman alıcıdır ve anti-fibrotik etkileri anti-inflamatuar etkileri ayırt etmek için test edilmiştir.

Kollajen içeriği, morfometrik ve histolojik analiz biyokimyasal belirlenmesi, post mortem analizi, aynı hayvan hastalık patogenezinde takip imkanı sınırlayan dayalı. Her ne kadar bu parametreler fibrozis değerlendirilmesi için altın standart olarak kabul edildi, onlar değil fibrotik doku bozulması zamansal veya mekansal dağılımı sağlamak ve hastalık ilerleme süreci araştırmak için bir yol engel. 10

Son zamanlarda, non-invaziv görüntüleme teknolojileri hava yolu monitör yenileme, inflamasyon ve fare modelleri ilerlemesinde fibrozis uygulanmış olan: manyetik rezonans görüntüleme (MRG), mikro Bilgisayarlı Tomografi (mikro-CT), Floresans moleküler Tomografi (FMT) ve kollarındaki (BLI)11,12,13,14,15,16,17,18,19 ,20,21. Boyuna farklı noktalarda zaman-bir bleomycin meydan sonra22FMT ve mikro-CT akciğer fibrozis ilerleme izlemek için bir non-invaziv görüntüleme yaklaşım öneriyorum.

Birçok yollar kuruluş ve fibrozis geliştirilmesi dahil olan ve pek bilinir. Bu işlemler sadece daha derin bir anlayış kliniğe transfer olabilir daha fazla uyuşturucu hedeflerine çevirmek olabilir. Boyuna Floresans moleküler tomografi akciğer parenkima değişiklikleri algılama için mikro-BT ile birleştiğinde tarafından MMP etkinleştirme izleme olanağı gelecekte tedavi klinik yanıt erişmek için kullanılan.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Burada açıklanan tüm hayvan deneyleri Chiesi Farmaceutici ve ERASMUS MC hayvan deney protokol numarası altında intramural hayvan refahı Komitesi tarafından kabul edildi: EMC Avrupa Yönergesi 2010/63 UE ile uymak 3349 (138 / 14 / 07) İtalyan D.Lgs 26/2014 ve yeniden düzenlenen "Kılavuzu için bakım ve kullanım of Laboratory Animals"23.

Not: kullanılmadan önce kadın doğuştan C57Bl/6 (7-8 haftalık) fareler en az 7 gün yerel vivaryum koşullarına acclimatized (Oda sıcaklığı: 20-24 ° C; bağıl nem: % 40-70; 12-saat koyu döngüsü), standart kemirgen chow ücretsiz erişimine ve yumuşatılmış su dokunun.

1. boğaza tedavi fare Bleomycin ile

  1. Cihazın içi trakeal korumak12,13,14için hazırlayın.
  2. Fareler %2.5 oksijen ile karışık ayarlamak bir isoflurane Buharlaştırıcı bağlı anestezik odası koymak. Anestezi derinliği için bir ayak parmağı-çimdik yanıt eksikliği tarafından kontrol. Anestezi etkisi 3-5 dk sonra oluştu.
  3. Entübasyon platformda imzalat fareyi getirin, onun ön dişler tarafından asılı tel üzerinde yerleştirilir.
  4. Laringoskop, künt uçlu forseps bir çift ve forseps veya laringoskop'ın uç ağız hafifçe açmak için kullanın.
  5. Dilini ve Forseps ile kenarda tutun. Trakea açılışı görüntülenir kadar laringoskop blade ağız arkasına doğru koyun ve laringoskop tutmak.
  6. Diğer elini de PE boru içine üç yollu vana dönen Trakea, sonu bağlı teslim tüp takın. Bleomycin (0,020 µg/fare) 50 µL teslim. Korumak sonra hızlı bir şekilde boğulma önlemek için Trakea tüpü çıkarması. Fareler dik birkaç saniye boyunca basılı tutun.
    1. Bleomycin intratracheally gün 0 saat yönetmek ve gün 4 (Resim 1) tekrarlayın.
  7. Entübasyon platformdan fareyi kaldırın ve 30 dk (tam anesteziden kurtarmak için gerekli zamanı) için fare izlemek.
  8. FMT ve mikro-CT tarafından fareler akciğerler vivo içinde görüntüleme Çift Kişilik bleomycin korumak, 7, 14 ve 21 gün sonra gerçekleştirin.

2. Floresans moleküler tomografi tarafından vivo içinde görüntüleme

Not: Önceden, ışık kullanmadan önce 4 ° C'de korunuyorsunuz MMP hassas floresan substrat 680 tuzlu çözüm (% 0,9 Sodyum Klorür) ve store 6 nmol/mL taze stok çözeltisi hazırlamak. 4 ° C'de 6 aya kadar kararlı MMP görüntüleme ajanı hayvana enjekte önce oda sıcaklığına kadar equilibrate sağlar.

  1. Sonda enjeksiyon
    1. MMP sonda çözüm intravenöz enjeksiyon için donatım hazırlayın. Sıcak su 50 ° c fare kuyruğu ısıtmak için önceden.
    2. Fare scruff sıkıca kavramak için kuyruk tarafından kabul ve Kafesin kapağını tutunma sağlar. Fareler hayvanın omuz üzerinde tutarak, kuyruk 4 önlemek için kuyruk cilt termal hasar için en fazla 8 s termal yaralanma için bir sıcak su kabı koymak.  Daha kolay görselleştirme ve iğne ekleme için şişme damarları kontrol edin.
    3. Enjeksiyon işlemi sırasında sabit tutun ve arkadaki özel bir delikten kuyruk çekmek için plastik bir restrainer fareler koyun. İki Kaudal damarlar üstünde ikisinden biri yan-kuyruk bulmak; arter alt kısmında kuyruk değil.
    4. İğne (26 G) 1 mL şırınga damar içine yerleştirin. İğne doğru şekilde yerleştirilmiş olması durumunda, enjeksiyon kolay olacak ve sonda çözüm gemi akacaktır.
    5. MMP sonda çözüm 10 mL/kg enjekte.
    6. İğne atmak.
      Not: çünkü sondası tarafından etkinleştirilmesi için gereken süreyi en uygun görüntüleme saat 24 h MMP sonda enjeksiyon sonra noktasıdır. Uzunlamasına çalışmalar gerçekleştirilmesi durumunda en iyi yeniden enjeksiyon 7 gün, hangi sağlar aracı tam giriş izni için fare zamanı.
  2. FMT görüntüleme
    Not: başlamadan önce her zaman kürk kaldırın ve hayvan alanların etrafında, bu durumda saçılma ve doku Absorbans önlemek için göğüs, yansıması için olan.
    1. Fare anestezi için anestezik odasına koy ve isoflurane kadranını indüksiyon için % 2.5 ve bakım için % 2.
    2. Veri toplama yazılımı başlatmak ve deneme için veritabanında yeni bir çalışma açın.
    3. Görüntüleme ile FMT başlamadan önce fare görüntüleme kaset aktarın. FMT görüş alanı en iyi şekilde kullanmak için kaset Imaging ortasında imzalat fareyi getirin. Fareler düz, güvenli ve yavaşça sıkıştırılmış görüntüleme kaset her iki windows karşı tutun. Kaset kolları tarafından yüksekliği ayarlamak ve sonra belgili tanımlık rıhtım istasyon kaydırın.
    4. Konu tarama penceresinde tıklatın ve canlı görüntüyü görmek için Önizleme ' yi tıklatın.
    5. Floresans beklenen alanı çevreleyen doku yakalanır tarama bölgesi yeterince büyük çizmek. Toplam 25 tarama noktaları garantiler de dahil olmak üzere akciğer bölge tamamen taranan olacak.
    6. Bir kez yatırım Getirisi çizilir, ilk imar Kuyruğa Ekle ' yi tıklatın ve fareyi görüntü tarama ' yı tıklatarak. Emin olun doğru lazer, 680 nm seçilidir.
    7. Resim alma tamamlandığında, fare onun kafes yerleştirin. Tam anesteziden kurtarır emin olun.
    8. Floresans analizi penceresinde yatırım Getirisi aracını kullanarak analiz yazılımı picomoles ölçmek ve yatırım Getirisi 700-800 mm3 akciğer yöresinin sinyal üzerinde etrafında azaltır. Karaciğer sinyal dışlamak için dikkatli olun. Onları boyutunda benzer ve her hayvan görüntü içindeki konumlarını ayarlamak için diğer konularda yatırım Getirisi kopyalayın.
    9. Görüntüleri jpg dosyaları olarak dışa aktarma.

3. mikro-CT tarafından Vivo içinde görüntüleme

Dikkat: başlamadan önce her zaman tüm metal takılar ve x-ışınları saçılma önlemek için görüntüleme alanını yakınındaki metal nesneleri kaldırın.

Not: Radyasyon kaynaklı akciğer fibrozis akciğer hasarı24radyasyon sırasında ortak bir bulgu indüklenmektedir. Ne mikro-CT endeksleri türetilmiş ne de Histolojik bulgular akciğer fibrozis ile ilişkili serum fizyolojik tedavi kontrol farelerde mevcut dört mikro-CT oturumları görüntüleme, x-ışını doz mikro-CT sırasında hayvanlara teslim gösteren tabi gün 21 muayene bulguları etkiler için yeterli değildi.

  1. Mikro-CT yeşil güç düğmesine basarak kapatmak ve x-ışını kaynağı ısıtmak için yazılımı başlatmak. Küçük delik ve hayvan yatak Imaging fareler için kullanın.
  2. Yeni veritabanı için yeni bir tıklatarak veritabanını oluşturmak ve yapı tarayıcı fare deneyinde sayısını temel alan veya önceden oluşturulmuş bir veri kaydetmek için Varolan bir veritabanına bağlanırken ' ı tıklatın.
  3. Tarama başlamadan önce satın alma parametrelerini yazılım denetimi penceresinde seçin: x-ışını tüpü gerilim, 90 kV; CT X-ray tüp akım, 160 µA; X-ışını tüpü geçerli, 80 µA canlı; FOV, 36 mm; Hiçbir gating tekniği; Teknik, yüksek çözünürlükte tarama 4 dak.
  4. Fareler % 3 isoflurane inhalasyon tarafından anestezi ve anestezi sürekli bir tedarik sağlayan bir burun konisi ile delik eklenen yatağın üstüne koyun. Belgili tanımlık paws maruz göğüs izin vermek için yatakta bantlı farelerin hareketsiz.
  5. Enstrüman kapı slayt ve Live Mode yakalama düğmesine basarak fare pozisyon gerçek zamanlı olarak görmek için açmak. Hayvan yatak doğrudan CT araç üzerinde yer alan düğmelerini kullanarak göğüs görüş alanı (FOV) ile hizalamak için taşıyın. Fare üzerinde tarama Merkez; Eğer değilse CT araç üzerinde bulunan sol ve sağ okları olan pozisyonunu ayarlayýn.
  6. En iyi yatak pozisyonu 90 ° ve ayarla' yı tıklatarak işaretleyerek gantry döndürerek onaylayın. Görüntü bölgesine tamamen FOV içinde olduğundan emin olun.
  7. Perdeleme herhangi bir tekniği uygulamak ve tarama CT Scan düğmesine tıklayarak başlatın. Evet bu x-ışını kaynağı açılır olduğunu bildiren iletisi için'i tıklatın.
    Not: röntgen yanar sonra araç üzerine portakal lamba vurgulanır ve kayar kapı operatör güvenliği için açmak imkansız olacaktır. Tarama işlemi bittiğinde, transaxial, koronal ve yeniden sagittal dilim gösteren 2D Viewer yazılımının yeni bir pencere görünür.
  8. Görüntü kalitesi kontrol ve hareketleri nedeniyle anestezi düşük düzeyde görüntüleri bulanık değil emin olun. Gerekirse, tarama tekrarlamak.
  9. Hayvanlar kafesin içine yerleştirin ve tam anesteziden kurtarmak emin olun.

4. Bronchoalveolar lavaj

  1. Kurban ve % 3 isoflurane hayvanlarla abdominal aorta kanama tarafından anestezi.
  2. Makas göğüs kafesi ve boyun ortaya çıkarmak için kullanın. Sonra Trakea ortaya çıkarmak ve 1 mL şırınga iğne olmadan bağlı 21'lik lavaj tüp ile gerçekleştirilecek BAL yordam izin vermek için küçük bir insizyon attım olun. Nefes borusu kesmemeye dikkat edin.
  3. BAL gerçekleştirmek için bir iğne olmadan 1 mL şırınga 0.6 mL steril çözeltisi ile doldurun [10 x Hank'in dengeli tuz solüsyonu (HBSS); 100 mM ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA); 1 mM 4-(2-hydroxy-ethyl)-1-piperazineethansulphonic asit (HEPES); distile su].
  4. Nefes borusu içinde belgili tanımlık kesme lavaj tüp takın ve yavaş yavaş enjekte ve çözüm 3 kez, en iyi toplama BALF daha sonraki analiz için izin vermek için üçüncü para çekme üzerinde duraklatma çekmek.

5. Histoloji ve Histomorfometri

  1. Ortaya çıkarmak ve onları nefes borusu aracılığıyla bir kanül ile % 10 formalin tarafsız tamponlanmış 0.6 mL ile nazik infüzyon tarafından şişirme akciğerler, çıkarın ve örnekleri için 24 saat oda sıcaklığında saklayın.
  2. Alkol Çözümleri (1 h için % 60 etanol, 1 h, % 90 etanol için 1 h, 2 h için % 95 etanol etanol % 70 ve % 100 etanol için 2 h) konsantrasyonları artan farklı pasajlar ile örnekleri kurutmak bir otomatik doku işlemci kullanarak.
  3. Numuneler Ksilen onları yarı saydam yapmak 2 h için yerleştirin. Su kaybı sonunda parafin 3 h için 60 ° C'de örneklerinde sızmak ve otomatik işlemcide katıştırabilirsiniz.
  4. 5 µm kalınlığında seri bölümler döner microtome kullanarak elde edilir.
  5. Deparaffinize ve slaytlar etanol azalan sınıflarda rehydrate ve bir otomatik doku işlemci kullanarak Masson'ın Trichrome ile leke.
  6. El ile tarama bir slayt tarayıcı kullanarak 20 X büyütme oranında akciğer dilimleri odaklanmak ve 451 nm/piksel çözünürlük ile görüntüleme yazılımı kullanarak tüm akciğer bölümlerinin dijital çekim.
  7. Morfolojik fibrotik akciğer hasarı yarı nicel ve nicel parametreleri ile aşağıdaki gibi değerlendirmek:
    1. Ashcroft puanı belirlemek. Yarı kantitatif akciğer bölümleri Ashcroft10 Hübner vd tarafından değiştirilmiş tarafından tanımlanan ölçeğine göre sınıf morfolojik değişiklikler 25 kullanım sistem 0-8 puan akciğer bölümlerdeki tüm parankimi değerlendirmek için.
    2. Kollajen içeriği belirleyin. Mikroskop görüntü analiz yazılımı tarafından fibrozis10,25 derecesini ölçmek. Rastgele her slayt başına 10 X büyütme, üç ROIs seçin. Renk eşiği ayarlarını standardizasyon tarafından kollajen yeşil lekeli alan olarak algılar.
    3. Alveoler hava alanı belirleyin. Alveoler hava alanı fibrozis10,25dolaylı bir parametresi olarak ölçmek. Hava alanı içinde beyaz bir eşik kullanarak ROIs bulmak belgili tanımlık aynı yazılım ve fibrozis kesir için uygulanan ROIs aracılığıyla.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Akciğer fibrozis lezyonların spontan çözünürlük üç hafta sonra tek bleomycin yönetim ve ılımlı yapısal değişiklikler sınırları bu modelin vurgulamak görülmektedir. Sadece koruyucu tedavi klinik pratikte17temsil etmiyor dar terapötik pencere nedeniyle gerçekleştirilebilir.

Burada, Çift Kişilik bleomycin boğaza korumak bizim protokolünden uzun süreli akciğer fibrozis fareler

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

IPF tedavi etmek için yeni ilaçların geliştirilmesi üzerinde odaklanan birçok araştırma grupları rağmen şu anda sadece iki hasta için kullanılabilir. Bir acil tıbbi gerek çünkü daha etkili tedaviler7 bulmak sadece akciğer transplantationis 4-5 yıl26yaşama uzatmak mümkün. Translasyonel tıp ve yeni ilaçların geliştirilmesi için gerekli ön koşul IPF ve Girişimsel hangi çalışmalar başarı klinikte akıllı özellikler taklit eden bir hayvan mod...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

Teşekkürler

Yazarlar Dr Daniela Pompilio ve Roberta Ciccimarra teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
FMT 2500 Fluorescence Tomography SystemPerkin Elmer Inc.Experimental Builder
MMPsense 680Perkin Elmer Inc.NEV10126Protect from light, store the probe at 4 °C
TrueQuant softwarePerkin Elmer Inc.
Female inbred C57BL/6San Pietro NatisoneHorst, The Netherlands (UD), Prior to use, animals were acclimatized for at least 5 days to the local vivarium conditions
IsofluraneESTEVE spa571329.8Do not inhale
Automated cell counterDasit XT 1800JExperimental Builder
Saline Solution, 0.9% Sodium Chloride (NaCl)Eurospital15A2807
Quantum FX Micro-CT scanner Perkin Elmer Inc.
Bleomycin sulphate from Streptomyces Verticillus Sigma B2434 
Automatic tissue Processor ATP700 Histo-Line LaboratoriesATP700 
Embedding system EG 1160 Leica BiosystemsEG 1160
Rotary microtome Slee Cut 6062
Digital slide scanner NanoZoomer S60, Hamamatsu Photonics
NIS-AR image analysis software Nikon
Masson’s Trichrome StainingHisto-Line Laboratories
10% neutral-buffered formalinSigmaHT5012-1CS
Penn-century model DP-4M Dry power insufflatorPenn-centuryDPM-EXT
PE190 micro medical tubing2biological instruments sncBB31695-PE/8
Syringe without needle 5 mLTerumoSS*05SE1Cut the boards of the piston by scissors
Hamilton 0.10 mL (model 1710)Gastight81022
Discofix 3-way StopcockBraun4095111
Syringe with needle 1 mLPic solution3,071,260,300,320Use without needle
Plastic feeding tubes 18 ga x 50 mm2biological instruments sncFTP-18-50Cut obliquely the tip 

Referanslar

  1. Wynn, T. A. Integrating mechanisms of pulmonary fibrosis. J. Exp. Med. 208 (7), 1339-1350 (2011).
  2. Wynn, T. A., Ramalingam, T. R. Mechanisms of fibrosis: therapeutic translation for fibrotic disease. Nat. Med. 18 (7), 1028-1040 (2012).
  3. Moore, B. B. Animal models of fibrotic lung disease. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (2), 167-179 (2013).
  4. Ackermann, M., et al. Effects of nintedanib on the microvascular architecture in a lung fibrosis model. Angiogenesis. , (2017).
  5. Moore, B. B., Hogaboam, C. M. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), 152-160 (2008).
  6. Organ, L., et al. A novel segmental challenge model for bleomycin-induced pulmonary fibrosis in sheep. Exp Lung Res. 41 (3), 115-134 (2015).
  7. Organ, L., et al. Structural and functional correlations in a large animal model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. BMC Pulm Med. 15, 81(2015).
  8. Shen, B., Du, L., Sanchez, C., Edwards, D. J., Chen, M., Murrell, J. M. Cloning and characterization of the bleomycin biosynthetic gene cluster from Streptomyces verticillus ATCC15003. J Nat Prod. 65 (3), 422-431 (2002).
  9. Yu, Z., et al. Targeted Delivery of Bleomycin: A Comprehensive Anticancer Review. Curr Cancer Drug Targets. 16 (6), 509-521 (2016).
  10. Ashcroft, T., Simpson, J. M., Timbrell, V. Simple method of estimating severity of pulmonary fibrosis on a numerical scale. J Clin Pathol. 41 (4), 467-470 (1988).
  11. Stellari, F., et al. In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin. J Transl Med. 13, 251(2015).
  12. Stellari, F., et al. In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice. J Transl Med. 14 (1), 226(2016).
  13. Stellari, F. F., et al. In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct. PloS one. 7 (6), 39716(2012).
  14. Stellari, F. F., et al. Enlightened Mannhemia haemolytica lung inflammation in bovinized mice. Vet Res. 45, 8(2014).
  15. Tassali, N., et al. MR imaging, targeting and characterization of pulmonary fibrosis using intra-tracheal administration of gadolinium-based nanoparticles. Contrast Media Mol Imaging. 11 (5), 396-404 (2016).
  16. Ma, X., et al. Assessment of asthmatic inflammation using hybrid fluorescence molecular tomography-x-ray computed tomography. J Biomed Opt. 21 (1), 15009(2016).
  17. Van de Velde, G., et al. Longitudinal micro-CT provides biomarkers of lung disease that can be used to assess the effect of therapy in preclinical mouse models, and reveal compensatory changes in lung volume. Dis Model Mech. 9 (1), 91-98 (2016).
  18. Stellari, F. F., et al. Heterologous Matrix Metalloproteinase Gene Promoter Activity Allows In Vivo Real-time Imaging of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Transiently Transgenized Mice. Front Immunol. 8, 199(2017).
  19. Hellbach, K., et al. X-ray dark-field radiography facilitates the diagnosis of pulmonary fibrosis in a mouse model. Sci Rep. 7 (1), 340(2017).
  20. Zhou, Y., et al. Noninvasive imaging of experimental lung fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 53 (1), 8-13 (2015).
  21. Ruscitti, F., et al. Longitudinal assessment of bleomycin-induced lung fibrosis by Micro-CT correlates with histological evaluation in mice. Multidiscip Respir Med. 12, 8(2017).
  22. Stellari, F., et al. Monitoring inflammation and airway remodeling by fluorescence molecular tomography in a chronic asthma model. J Transl Med. 13, 336(2015).
  23. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th ed. , National Research Council. Washington DC. (2011).
  24. Meganck, J. A., Liu, B. Dosimetry in Micro-computed Tomography: a Review of the Measurement Methods, Impacts, and Characterization of the Quantum GX Imaging System. Mol Imaging Biol. , (2016).
  25. Hubner, R. H., et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples). BioTechniques. 44 (4), 507-514 (2008).
  26. King, T. E., Pardo, A., Selman, M. Idiopathic pulmonary fibrosis. Lancet. 378 (9807), 1949-1961 (2011).
  27. De Langhe, E., et al. Quantification of lung fibrosis and emphysema in mice using automated micro-computed tomography. PloS one. 7 (8), 43123(2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

mm noloji ve enfeksiyonsay 134idiyopatik Pulmoner Fibrozis IPFg r nt lemeFMTmikro CT i inde vivoakci er hastalhayvan modellerimatriks metalloproteinazlar n MMPsBleomycin

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır