Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Özet

Burada, canlı görüntüleme, farelerde aşılı fluorescently etiketli insan endometrium parçacıkları için bir iletişim kuralı mevcut. Yöntemi seçim ilaçların etkileri izleme aracılığıyla endometriotic lezyon boyutu ve gerçek zamanlı olarak flüoresan muhabir tarafından yayılan Floresans miktar sağlar

Özet

Burada, biz hangi endometriozis ilerlemesini noninvaziv implante Ektopik insan endometrium dokusu tarafından yayılan Floresans izleme aracılığıyla gerçek zamanlı olarak tespit edilebilir bir kapaklı fare modeli uygulanması için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu amaçla, insan endometrium biyopsi donör kadınlar devam eden oosit bağış elde edilir. İnsan endometrium parçaları muhabir floresan protein mCherry için hızlı cDNA için tasarlanmış adenovirüse bakın huzurunda kültürlü. Enfeksiyon daha sonra seçilen alıcı farelerde implantasyon için görselleştirme, doku floresan en uygun bir fiyata sahip adlı. İmplantasyon ameliyat öncesi bir hafta alıcı fareler oophorectomized ve östradiol granül subkutan hayatta kalma ve büyüme lezyonların sürdürebilmek için yerleştirilir. Ameliyat günü fareler küçük (1.5 cm) kesi linea alba. tarafından erişilen imzalat ve Periton boşluğu vardır. Fluorescently etiketli implantlar kaşların, kısa bir süre içinde tutkal batırılmış ve Periton katmana bağlı. İnsizyon sütüre ve hayvanlar birkaç gün kurtarmak için yaptı. Floresan endometriotic implantlar tarafından yayılan genellikle non-invaziv 3 günde 4 hafta içinde vivo bir görüntüleme sistemi ile izlenir. Endometriotic implantları boyutunda varyasyonlar gerçek zamanlı olarak mCherry sinyal ve normalleştirme maksimal floresan yoğunluğu gösteren ilk zaman noktası karşı miktar tarafından tahmin edilebilir.

Endometriozis modellerin geleneksel preklinik kemirgenler non-invaziv lezyon gerçek zamanlı izleme izin vermez ama oldukça bitiş noktası denetlesinler ilaçların etkilerinin izin. Bu iletişim kuralı bir lezyonlar gerçek zamanlı olarak izlemek izin verir ve endometriozis Preklinik modellerin uyuşturucu tedavi potansiyelini keşfetmek için daha yararlı olduğunu. Böylece üretilen modeli ana sınırlandırılması non-invaziv izleme reklam-virüs episomal ifadesi nedeniyle uzun süreler boyunca mümkün değildir.

Giriş

Endometriozis rahim boşluğuna dışında işlevsel endometrium implantasyonu tarafından başlatılan kronik bir jinekolojik hastalıktır. Ektopik lezyonlar büyümek ve iltihabi süreçleri kronik pelvik ağrı ve infertilite¹için önde gelen neden. Bu kadar üreme çağındaki kadınların % 10-15 endometriosis2 tarafından etkilendiğini tahmin edilmektedir ve infertil kadınlar³yaklaşık % 40-50 mevcut. Endometriozis için mevcut farmakolojik tedaviler lezyonlar tamamen ortadan kaldırmak için ve yan etkileri^4,5özgür değil. Endometriozis insan lezyonlar uygun şekilde taklit ve diğerleri arasında lezyon boyutu bileşikler etkilerini yakından tespit edilebilir şekilde varolan hayvan modellerinin arıtma, daha etkili tedaviler için araştırma gerektirir.

Primat modelleri endometriozis Ektopik lezyonlar implantasyonu histolojik olarak aynı ve benzer sitelerde olduğu gibi insanlar^6,7,8taklit etmek için kullanılmıştır; Ancak, etik kaygılar ve yüksek ekonomik maliyetler primatlar sınırı ile deneme onların kullanım⁹ile ilgili. Sonuç olarak, küçük hayvanlar, özellikle kemirgenler, kullanım endometriozis ın-vivo modellerinin uygulanması için çalışmalar bireyler^10,11daha büyük sayılarla verdiğinden tercih devam ediyor. Endometriozis indüklenen bu hayvanlara kemirgen rahim boynuzları ("homolog modelleri")^12,13 adet veya Ektopik sitelere (kapaklı modelleri) insan endometrium/endometriotic doku nakli tarafından¹⁴ . Aksine insanlar, kemirgenler endometrium doku döken değil ve böylece endometriozis kendiliğinden bu türler içinde geliştirilebilir değil. Bu nedenle, homolog fare modelleri endometriozis gerçeğini Ektopik fare rahim dokusu implante nedeniyle eleştirdi var insan endometriotic lezyonlar¹⁵özelliklerini yansıtacak.

Endometriozis uygun fizyolojisi nerede taze insan endometrium parçaları immünyetmezligi hayvana implante edilir endometriozis kapaklı modelleri taklit. Geleneksel Contegra modellerinde bileşikler ilgi tedavi edici etkileri yaygın lezyon boyutu değerlendirme Çap pergeli¹⁶kullanımı ile tarafından bitiş noktası değerlendirilir. Bu nedenle, bitiş noktası hayvan modelleri implantasyon dynamics ya da zaman içinde endometriotic lezyon geliştirme eğitim izin vermez, bir açık kısıtlamadır. Çap pergeli kullanımı doğru ölçümler lezyon boyutu izin vermez bir ek kısıtlamadır. Nitekim, aynı aralıkta (yani, milimetre) farelerde, böylece gerçek varyasyonları boyutu algılamak için bu araçları kapasitesine sınırlama implante lezyonlar boyutu olarak Çap pergeli tarafından sağlanan standart hata olduğunu.

Gibi sınırlamalar üstesinden gelmek için burada, implante insan dokusu içinde bir muhabir m-kiraz floresan protein hızlı şekilde tasarlanmıştır endometriozis bir kapaklı fare modeli oluşturmayı açıklar. Bir uygun görüntü sistemi ile floresan sinyal tespiti non-invaziv lezyon durumunu gerçek zamanlı olarak boyutunun aynı anda miktar ile izleme sağlar. Böylece, bizim model derecede o getirmek gerçek zamanlı non-invaziv izleme fırsatı ve olasılığı daha objektif ve varyasyonları doğru tahmin lezyon boyutunda gerçekleştirmek için geleneksel bitiş noktası modelleri karşılaştırıldığında Net avantajlar sağlar.

Protokol

İnsan dokusu örnekler kullanımı Kurumsal değerlendirme Komitesi ve hastane Universitario La Fe Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Tüm hastalar yazılı Onam sağlanan. Hayvanları içeren çalışma Centro de Investigacion Principe Felipe de Valencia kurumsal hayvan bakımı Komitesi tarafından kabul edildi ve tüm yordamlar Ulusal kurumları için bakım ve memeliler kullanım yönergeleri izleyerek gerçekleştirilmiştir Sağlık.

1. rahim dokusu koleksiyonu ve ön işleme

1. Kaliteli biyopsi insan endometrium aspiratı ve emme bir aygıta bağlı bir kanül kullanarak elde. Biyopsi 10 mL steril serum fizyolojik ve nazik el ile ajitasyon ile yıkama içeren bir şişe içine dökün.
   Not: Kaliteli biyopsi almak hakkındaki yordamlar yukarıda açıklanan¹⁷olmuştur.
2. Biyopsiyi kalan herhangi bir kan ya da mukus yıkayın. Doku doku temiz görülmektedir kadar gerektiği gibi çok sayıda diş taze serum fizyolojik içeren Şişeler için dökerek tekrarlayın.
3. Transfer biyopsi parçaları 10 mL içeren bir çözüm içine sağlıklı bir görünüm ile Dulbecco'nın modifiye kartal orta (DMEM) orta % 10 Fetal sığır Serum (FBS) ve % 1 antibiyotik antimycotic çözüm ile tamamlayın.
4. İçeriği bir 10 cm Petri kabına dökün ve neşter çifti ile 5-10 mm³ parçaya doku kesmek için devam edin.

2. adenoviral Transfection, endometrium parçacıkları

Not: Sürecinde istihdam edilebilir dair bütün malzemeler mahallede önceden sunulması. Bu süreç içinde kullanılan ve bir şişe çamaşır suyu ile yerleştirmek için gitmiyor her şeyi al. Adenoviral vektör temas geliyor tüm malzeme biohazard kapsayıcısında atılmadan önce çamaşır suyu ile dezenfekte gerekir.

1. Sonra doğranmış biyopsi, yeni Petri kabına alın. Birden fazla 30 – 50 µL DMEM damla bütün yemek boyunca yayılan pipette. Onlar kişiye gelmiyor bu yüzden damla arasında yeterli boşluk bırakın.
2. Şırıngaya bağlı bir iğne ile destekli, tek bir parça her orta damla içinde yerleştirin.
   Not: Her damla tek bir endometrium içermelidir.
3. Ad-mCherry çalışan çözüm 1:20 mCherry adenoviral hisse senedi çözüm [1 x 10¹⁰ pfu/mL] sulandrarak DMEM hazırlamak) orta (DMEM + % 10 filtre FBS) antibiyotik olmadan.
4. 100-200 μL iyi parçaları Petri kabına damla (Adım 2.2) kullanılabilir gibi çok sayıda wells doldurma 96-şey tabakta başına reklam-mCherry çözüm dağıtmak. Buna ek olarak, en az 3 Kuyu adenovirus ücretsiz DMEM orta ile bir negatif kontrol doldurun.
5. Şırıngaya bağlı bir iğne ile destekli, her bir Petri kabına (Adım 2.2) içinde parçaları her reklam-mCherry solüsyon 96-şey plaka içeren Wells aktarın.
6. 96 iyi plaka 16 h için % 5 CO₂ 37 ° C'de bir kuluçka içine reklam-mCherry çözüm ile endometrium parçaları içeren bir yer.
7. Kalan adenovirüse bakın dokular ile tam DMEM orta dolu yeni bir 96-şey plaka içine aktarma tarafından orta dışarı yıkama (antibiyotik-antimycotics ile adenovirus ücretsiz) ve % 5 CO₂ için 24-48 h 37 ° C için kuluçkaya.
   Not: Bütün iyi plakalar ve reklam-virüs ile temas geldi biohazard konteyner içine atarak önce ipuçları çamaşır suyu ile kapak unutmayın.
8. Kuluçka makinesi tabaktan dışarı almak ve 568 adlı bir floresan mikroskop altında yer en uygun etiketleme için test etmek için nm (kırmızı kanalı).
9. En parlak parçaları seçin ve yeni bir 96-şey plaka ile taze tam DMEM orta içine koyun (antibiyotik-antimycotics ile adenovirus ücretsiz).
10. İyi bir plastik parafin film ile plaka mühür ve kendisine endometrium parçaları implantasyonu içine alıcı hayvanlar için özel patojen ücretsiz hayvan alana taşıma.

3. nesil endometriozis fare modeli

Not: 6 – 8 hafta kullanın-eski korele çıplak (ya da benzer immün suşları) alıcı hayvanlar gibi patojen-ücretsiz spesifik koşullar içerisinde yer alan kadın fareler. Hormonal döngüsü bağımlı varyasyonları ve aynı anda yakıt lezyon büyüme estradiol ile önlemek için Ovariektomili ve ile yerleştirilen 60 günlük yayın kapsüller 17 βeta-Estradiol (17β-E₂) 18 mg içeren hayvanlar vardır. Ooforektomi ve Pelet yerleşim var endometrium parçaları alıcı hayvanlara aşılama öncesinde en az bir hafta gerçekleştirilecek.

1. Ooforektomi
   Not: Bir başlıklı cerrahi steril malzeme hazırlamak. Anestezi ekipman ve aynı odada bir ameliyat sonrası kurtarma bölge hazır hazır olun.
   1. Morfin türevi bir doz 5 mg/kg / fare, subkutan enjeksiyon gerçekleştirin. Ağrı kesici ilaç etkileri tecelli olabilir bu yüzden sonra enjeksiyon için 30 dk bekletin fareler izin.
   2. İnhalasyon anestezi ekipman ve izin oksijen ve isoflurane (% 2 mg/kg) akışı için bir kaç dk mühürlü anestezi odasına bağlayın.
   3. Hayvan isoflurane anestezi odasına tanıtmak. 3-5 dakika için bekleyin ve hayvanlar tam olarak onun pençeleri birini basarak anestezi kontrol edin. Hayvan ameliyat alanına aktarmak ve anestezi sürekli solunum solunum yolları kapsayan isoflurane gaz akışının bir maskeyle yerleştirerek korumak.
   4. Alan chlorohexidine ile dezenfekte sonra kalça bir enine 0.5 cm kostal kesi-yaklaşık yükseklikte keskin makas ile gerçekleştirin.
   5. Cilt karın boşluğu erişin, yumurtalık çevreleyen beyaz yağ yastığı tanımlamak ve yumurtalık diseksiyon Forseps ile geri çekmek için kas ayırmak.
   6. Bir düğüm ovidukt absorbe dikiş ile çevresinde ve uygun hemostaz yumurtalık bilincin önce emin olmak için sıkın.
   7. 6-0 absorbe dikiş katmanı kas ve cilt 6-0 absorbe olmayan sütür ile kapatın. Antiseptik solüsyonu ile tekrar alanı temizleyin.
   8. Contra yanal yumurtalık kaldırmak için yordamı yineleyin.
2. Estradiol cips implant
   Not: Hayvan ooforektomi ameliyatta peletler bu noktada yerleştirmek için anestezi ilgilen.
   1. Hemen sonra ooforektomi yordamı tamamlandıktan, deri boyun çevreleyen antiseptik solüsyonla temiz ve keskin makas ense ile enine subkutan küçük (0.5 cm) kesi yapmak.
   2. Makas granül yerleştirerek izin vermek için yeterince büyük bir cep yapma kas, deriden incelemek için kullanın.
   3. 17β-E₂ 18 mg içeren Pelet takın ve cilt ile 6-0 absorbe olmayan dikiş dikerim. Antiseptik solüsyonu ile tekrar alanı temizleyin.
   4. Hayvan Kurtarma bölgesinde yer ve iyileşme süresi kolaylaştırmak için uzun süreli analjezi en iyi bir doz yönetmek.
3. Endometrium implant ameliyatı
   Not: En azından bir süre yedi gün karantina hayvanların tam kurtarma sonra ooforektomi endometrium parçası implantasyonu ameliyatı başlamadan önce izin vermek için izin. Dokusunun etiketleme ile en iyi eşitleme için 2 – 3 gün böylece uzun vadeli explants kültürünün önlemek için implantasyon ameliyattan önce biyopsi toplamak.
   1. Belirli patojen serbest bölge cerrahi odaya önceden hazır olun. Ayrıca tüm gerekli cerrahi malzeme, anestezi ekipman ve ameliyat sonrası kurtarma bölgesi ile örtünün hazırlayın.
   2. Hayvanlar odaya getireceksin, her fare, 5 (mg/kg) bir doz morfin türevi bir Subkutan Enjeksiyon gerçekleştirin. Uyuşturucu analjezik etkileri tecelli olabilir bu yüzden sonra enjeksiyon için 30 dk bekletin fareler izin.
   3. İnhalasyon anestezi ekipman ve izin oksijen ve isoflurane (% 2 mg/kg) akışı için bir kaç dk mühürlü anestezi odasına bağlayın.
   4. Ameliyat başlamadan önce fluorescently içeren plaka bu PIN'i parçaları (Kimden adım 2.10) hood, etiketli ve parçaları bir petri daha kolay kullanım için içine dökün taşıyın.
   5. Hayvan isoflurane anestezi odasına tanıtmak. 3-5 dakika için bekleyin ve hayvanlar tam olarak onun pençeleri birini basarak anestezi kontrol edin. Hayvan ameliyat alanına aktarmak ve anestezi sürekli solunum solunum yolları kapsayan isoflurane gaz akışının bir maskeyle yerleştirerek korumak.
   6. Yer imzalat hayvan yüzleri yukarıya. Ventral bölgeyi dezenfekte. Boyuna 1,5 cm kesi karnından keskin makas ile gerçekleştirmek ve cilt kas ayrı. Sonra boyuna 1,5 cm kesi Periton boşluğuna erişmek için kas içinde gerçekleştirin.
   7. Karın kaslı duvar sol kenarına Mini Forseps ile tutun ve dış Periton iç yüzünü ortaya çıkarmak çalışırken katlayın.
   8. Endometrium implant mini cımbız ile kısa bir süre içinde bir n-butil-ester siyanoakrilat yapıştırıcı emmek alıp karın zarını için nerede o bağlı olsun yerleştirin. Bir kaç saniye için kurumasını bekleyin. 3.3.6 ve 3.3.7 bir implant karın zarını kontralateral tarafına yerleştirmek için adımları yineleyin.
   9. Bir absorbe 6-0 sütür ile kas katmanı ve 6-0 sütür ile bir olmayan-absorbe cilt kapatın. Antiseptik solüsyonu ile tekrar alanı temizleyin.
   10. Hayvan Kurtarma bölgesinde yer ve uzun ömürlü analjezi en iyi bir doz yönetmek.

4. içinde görüntüleme sistemi içinde bir Vivo floresan görüntüleme vivo

1. İçinde vivo görüntüleme sistemi aygıtı açın, program başlatmak ve CCD fotoğraf makinesi birkaç dakika soğumasını sağlar.
2. İnhalasyon anestezi ekipman hazırlayın. %2 min anestezik odası doldurmak için birkaç isoflurane akışı açın. Sonrası anestezi kurtarma bölge hazırlayın.
3. Program başladı ve CCD kamera soğuduktan sonra Sihirbazı görüntüleme aracı tıklatın: bir öğretici ardışık windows görüntülenen bir dizi ile başlar, her biri birkaç ile ilgi bir parametreye karşılık gelen seçilecek kullanılabilir seçenekleri ilgili kutuya tıklayarak. Her pencerede uygun kutuları seçerek öğretici ile ileriye taşımak ve aşağıdaki sıra ile sonraki parametrelerinin taşımak için Tamam düğmesini tıklatın.
   1. Floresans parametresi için Epiluminescence kutusunu seçin, filtre çiftleri parametresi için mCherry kutusunu seçin. Fotoğraf modu ve Onaylamak odak kutuları işaretleyin ve pozlama parametresi için otomatik kutusunu seçin.
4. Araç kurulmuş olan bir kez, bir hayvan anestezi odası içinde hareket. Tam anestezi zaman içinde sistem kafes görüntüleme in vivo hayvan aktarmak ve anestezi makineye bağlı bir tübül onun kafasında ile yan yerleştirin. Kapağı kapatın ve izlemek için Al düğmesini tıklatın.
5. (Toplam beş fotoğraf, seçilen filtreleri her çift için bir görüntü) görünen görüntüleri ve veri Kaydet düğmesini tıklatarak kaydedebilirsiniz. Fare sonrası anestezi kurtarma alanına taşıyın. Kalan hayvanlar ile işlemi tekrarlayın.
6. İki izlemeyi yineleyin veya üç kez bir hafta takip sinyali uygun zaman boyunca.
7. Zamanlı kurs sonunda hayvan CO₂ boğulma tarafından feda etmeye devam edin.

5. Vivo Floresans görüntülerin miktar

1. Görüntü unmixing aracılığıyla gerçek Floresans ayrılığı:
   1. Vivo analiz görüntüleme yazılım programı birleştiğindeaçın.
   2. Analiz başlamak için "Sequenceinfo" dosyasını seçin. İki pencere-ecek gözükmek: "Sıra görünüm" ve "Araç paleti". Araç paleti seçin ve görüntülenen menü sonra aşağıdaki seçenekleri işaretleyin.
   3. Düzeltmeler seçin ve istenmeyen floresan sinyallerini Işıksaçan görüntü verileri kaldırmak için Uyarlamalı FL arka plan çıkarma kutusunu tıklatın. Eşik büyük ilgi seçin ve ayarla' yı tıklatın.
   4. Tayf Unmixingtıklatın, dalga boyu ilgi, unmixing (Kütüphane için rehberli, otomatik veya el ile) seçilmiş olan yönteme bağlıdır seçin ve sonra Unmix Başlat ' ı tıklatın.
   5. MCherry sinyal için karşılık gelen Unmixed resmi seçin ve çift tıklatın. Yeni bir pencere faiz sinyal son görüntüleri ile gösterilir.
   6. 5.1.3 arasındaki adımları yineleyin.
   7. İsteğe bağlı: bir temsili resim (JPEG) unmix sonucu gerekiyorsa, araç paleti istenen ayarları seçmek | Görüntü ayarlama (renk tablosu, binning, kontrast, vs.) ve şu anki görüntüsü gibi ters bir resim olarak vermek için İhracat grafik unmix penceresinde tıklatın.
   8. Karışmamış dosyayı kaydedin: dosyası | Farklı Kaydet | Klasör seçin ve Ok.
   9. Bütün hayvanlar ile izleme gün geri kalanı ile işlemi yineleyin.
2. ROIs kurmak ve miktar sinyal
   1. Gözat ' ı tıklatın ve karışmamış dosya seçin (bkz. Adım 5.1.8) analiz edilebilir ilgi. Yeni pencere-ecek gözükmek.
   2. Tıklayın Listesine ekle her hayvan farklı zaman noktalarda tüm karışmamış dosyaları içerir ve Yükleme olarak bir grupüzerinde'yi tıklatın. Tüm görüntüleri tek bir sıra görünmesi gerekir.
   3. Araç paleti penceresine git: Ben aynı ölçekte tüm görüntüleri elde etmek içinkaynaklandığıdır ölçek kutusunu tıklatın.
   4. Çift sıra bir görüntüyü tıklatın ve bir yatırım Getirisi aşağıdaki işlem sırasını kullanarak faiz bölge üzerinde oluşturun. ROI araçlar ' a gidin ve Countour ve Otomatik 1 seçeneğini seçin, görünen daire şekli tıklatın, floresan sinyal üstünde belgili tanımlık merkez yerleştirin ve sonra görüntülenen pencerede Oluştur ' u tıklatın.
      Not: Bu otomatik olarak piksel floresan arka plan değerleri (Yani, lezyon) yukarıda bir yoğunluk ile vurgular ve kimin alanı Seviyelendirilmiş piksel kucaklayan bir şekil oluşturur.
   5. Oluşturulan yatırım Getirisi şekli kopyalayıp bir arka plan bölge olduğu yerde sinyal yok.
   6. Tıklatın ölçü ROIs üzerinde | Floresans yoğunluk değerleri görüntülemek için Tümünü Seç . Fare ile veri değerleri seçin, sağ düğmesini tıklatın, Kopyala seçeneğini tıklatın ve bir elektronik tabloya yapıştırmak için devam edin.

6. veri (floresan sinyal) normalleştirme

1. Hangi sinyal şiddeti maksimal başlangıç zaman noktasını seçin. Formül kullanarak, her zaman bir noktada sinyal normale devam:
   Sinyal şiddeti, her zaman bir noktada / maksimal sinyal şiddeti gözlenen zaman boyunca) x 100.

Sonuçlar

Burada, böylece non-invaziv izin insan endometrium fluorescently etiketli adet immün fareler yerleştirerek tarafından lezyonlar mimarisini korunduğu endometriozis kapaklı bir model oluşturmak için süreci tanımlamak lezyon ilerlemesini izleme. Endometrium parçaları etiketleme tarafından Enfeksiyon Mod hızlı mCherry, Floresans yakın kızılötesi bölgesi yayan bir protein için tasarlanmış adenovirus ile elde edilir. Şekil 1' de, Ad-mCherry ...

Tartışmalar

Burada ayrıntılı iletişim kuralı aynı anda gerçek zamanlı değerlendirmesini Floresans izin yayılan iken lezyonlar mimari Reproduction Mimarlık mCherry tarafından korunur endometriozis bir hayvan modeli uygulamasını açıklar endometrium dokusu etiketli. Bu protokol için belirli içinde vivo görüntüleme sistemi ve non-invaziv etiketli lezyon tarafından yayılan Floresans değerlendirmek için ilgili yazılım kullanımını açıklar. Her kullanıcı bağlı olarak belirli görüntü aygıtı ve ilgili ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Endosampler™	Medgyn	22720	Cannula for sampling the uterine endometrium
DMEM Medium	VWR	HYCLSH30285.FS	Medium
Ad-mCherry	Vector Biolabs	1767	Adenoviral vector expressing mCherry
PBS, 1x solution, sterile, pH 7.4	VWR	E504-500ML	Buffer for washes
Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/60 days	Innovative Research of America	SE-121	Hormone pellets for rodents
Vetbond™ Tissue Adhesive	3M	780-680	Tissue adhesive
Petri dishes in polystyrene crystal	Levantina	367-P101VR20	Petri dishes
Penicillin-Streptomicin	Sigma	P4333-100ML	Antibiotics
Syringes, medical 10 mL 0.5 ml	VWR	CODA626616	Syringes
Nitrile gloves, powder-free	VWR	112-2754	Gloves
Soft swiss nude mice	Charles River	SNUSSFE05S	Mice for animal experiment
Ivis Spectrum In vivo Imaging system	Perkin Elmer	124262	In vivo Monitoring equipment
Living Image® (Ivis software)	Perkin Elmer	---	In vivo monitoring software
Fetal Bovine Serum	Gibco	10082147	Enrichment serum
96-well cell culture treated plates	Life technologies	167008	Culture plates
Urine flasks	Summedical	4004-248-001	Flasks for washes
Sterile surgical blades	(Aesculap Division) Sanycare	1609022-0008	Surgical blades
Isovet 1,000 mg/g	B-BRAUN	---	Isoflurane (Anesthetic)
Buprex® 0.3 mg	Schering Plough S.A.	---	Buprenorphine (Analgesic solution)
Injectable morphine solution 10 mg/mL	B BRAUN	---	Morphine (Analgesic solution)
Monofyl® Absorbable Sutures	COVIDIEN	---	Sutures
Desinclor chlorhexidine	Promedic SA	---	Antiseptic solution
Microscopy DMi8	Leica Mycrosystems	---	fluorescence microscope
Hera Cell 150 Incubator	Thermo Scientific	51026282	Incubator