İşlevselleştirilmiş spirrosiklik heterosiklus sentezi ve sitotoksisite testi

Özet

Burada, daha önce sentezlenmiş spirosiklik oksimleri test etmek için 3-(4′,5′-dimetiltiazol-2′-il)-2,5- difeniltetrazolyum bromür (MTT) kullanan bir biyotahlil tarif ediyoruz.

Özet

Spirosiklik heterosiklusların son zamanlarda literatürde kanser tedavisi için potansiyel ilaçlar olduğu bildirilmiştir. Bu yeni ortogonal halka sistemlerinin sentezi zordur. Bu bileşikleri sentezlemek için yakın zamanda, katı faz sentezini daha önce bildirilen beş adım yerine dört adımda tanımlayan etkili bir metodoloji yayınlandı. Bu kısa sentezin avantajı, toksik reaktiflerin kullanımının ortadan kaldırılmasıdır. Düşük yüklemeli Rejenere Michael (REM) bağlayıcı bazlı reçinenin sentezde çok önemli olduğu bulunmuştur, çünkü yüksek yüklemeli versiyonlar hacimli fenil ve aromatik yan zincirler içeren reaktiflerin eklenmesini önlemiştir. Kolorimetrik 3-(4′,5′-dimetiltiazol-2′-il)-2,5- difeniltetrazolyum bromür (MTT) testi, bu yeni spirosiklik moleküllerin mikromolar konsantrasyonlarının in vitro sitotoksisitesini incelemek için kullanıldı. MTT ticari olarak kolayca temin edilebilir ve nispeten hızlı, güvenilir sonuçlar üretir, bu da bu testi bu spirosiklik heterosikluslar için ideal kılar. Ortogonal halka yapılarının yanı sıra furfurilamin (benzer 5 üyeli halka motifi içeren sentez yönteminde bir öncül) test edildi.

Giriş

E3 ubikitin-ligaz faresinin çift dakika 2 homologunun (MDM2) p53 ile etkileşiminin küçük moleküllü inhibisyonu 1,2,3 tümör hücresi apoptozunun p53 aracılı indüksiyonunu geri kazandırdığı ^{bilinmektedir.} MDM2, p53 yolunun negatif bir düzenleyicisidir ve genellikle 4,5,6,7,8,9 kanser hücrelerinde aşırı eksprese edilir. Son kristalografik ve biyokimyasal çalışmalar, spirosiklik bir ....

Protokol

NOT: Bu protokolde kullanılan çeşitli kimyasallar ve biyolojik reaktifler toksik ve kanserojendir. Kullanmadan önce ilgili malzeme güvenlik bilgi formlarına (MSDS) başvurun. Deneye başlamadan önce uygun kişisel koruyucu donanımları (İş Güvenliği ve Sağlığı İdaresi onaylı güvenlik gözlükleri, uygun eldivenler, laboratuvar önlükleri, tam boy pantolonlar ve kapalı ayak ayakkabıları) kullanın. Ek olarak, sentez yaparken ve toksik kimyasalları ve reaktifleri (duman davlumbazı) kullanırken uygun güvenlik uygulamalarını benimseyin.

1. Spirosiklik heterosiklusların katı faz sentezi 6 ve 7

NOT: Sentez daha önce yayınlanmış<....

Sonuçlar

Spirosiklik oksim 6 ve 7, modifiye edilmiş bir protokol kullanılarak sentezlendi (Şekil 1). Michael'ın bir REM bağlayıcı 1b'ye furfurilamin ilavesi, polimere bağlı reçine 2'yi sağladı. Reaksiyonun ilerlemesi, α.β doymamış esterin 1722 ^cm-1'de kaybolduğunu tespit ederek kızılötesi (IR) spektroskopi ile izlendi (Şekil 3). Spirosiklik bağlı reçine 4, 2'den geçici bir ara 3 ile oluşturulmuştur. 4'ün metanolik hidrolizi 3-[(3E

Tartışmalar

Spirosiklik bileşiklerin sentezi, bu laboratuvar tarafından yürütülen önceki araştırmalara dayanıyordu, ancak bazı modifikasyonlarla (Şekil 1)^11,12. Her reaksiyon adımının ilerlemesi IR spektroskopisi ile izlendi. Rem bağlayıcı 1'in furfurilamin ile Michael ilavesi, polimere bağlı 2'yi (IR 1722 cm-1 → 1731 ^cm-1) sağladı. Ö.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
CELLS
COS-7 cells (ATCC CRL-1651)	ATCC	CRL-1651	African green monkey kidney cells
CHEMICALS
1-Bromooctane	Sigma-Aldrich	152951	Alkyl-halide
Allylbromide	Sigma-Aldrich	337528	Alkyl-halide
Benzylbromide	Sigma-Aldrich	B17905	Alkyl-halide
Cisplatin	Cayman Chemical	13119	Cytotoxicity control
Dichloromethane (DCM)	Sigma-Aldrich	270997	Solvent
Dimethylformamide (DMF)	Sigma-Aldrich	227056	Solvent
Dimethylsulfoxide (DMSO)	Sigma-Aldrich	276855	Solvent
DMEM, high glucose, with L-glutamine	Genesee Scientific	25-500	Cell culture media
FBS (Fetal bovine serum)	Sigma-Aldrich	F4135	Cell culture media
Furfurylamine	Acros Organics	119800050	reagent
Iodomethane	Sigma-Aldrich	289566	Alkyl-halide
Methanol	Sigma-Aldrich	34860	Solvent
MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide)	EMD Millipore	Calbiochem 475989-1GM	Reagent
Phosphate-buffered Saline (PBS)	Genesee Scientific	25-507	Cell culture media
REM Resin	Nova Biochem	8551010005	Polymer support; 0.500 mmol/g loading
trans-β-nitrostyrene	Sigma-Aldrich	N26806	Nitro-olefin reagent
Toluene	Sigma-Aldrich	244511	Solvent
Triethylamine (TEA)	Sigma-Aldrich	T0886	Reagent for beta-elimination
Trimethylsilyl chloride (TMSCl)	Sigma-Aldrich	386529	Reagent; CAUTION - highly volatile; creates HCl gas
GLASSWARE/INSTRUMENTATION
25 mL solid-phase reaction vessel	Chemglass	CG-1861-02	Glassware with filter
96 Well plate reader	Promega (Turner Biosystems)	9310-011	Instrument
AVANCE III NMR Spectrometer	Bruker	N/A	Instrument; 300 MHz; Solvents: CDCl3 and CD3OH
Thermo Scientific Nicole iS5	Thermo Scientific	IQLAADGAAGFAHDMAZA	Instrument
Wrist-Action Shaker	Burrell Scientific	757950819	Instrument