Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Buradaki amaç, kardiyovasküler hastalıklarda dysbiosis mekanizmalarını araştırmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektir. Bu yazıda, murin dışkı örneklerinin aseptik olarak nasıl toplanacağı ve nakledileceği, bağırsakların nasıl izole edileceği ve "Swiss-roll" yönteminin nasıl kullanılacağı, ardından gastrointestinal sistemdeki değişiklikleri sorgulamak için immün boyama teknikleri tartışılmaktadır.

Özet

Bağırsak mikrobiyota dysbiosis, kardiyovasküler ve metabolik bozuklukların patofizyolojisinde rol oynar, ancak mekanizmaları iyi anlaşılmamıştır. Fekal mikrobiyota transplantasyonu (FMT), hastalık patofizyolojisinde total mikrobiyota veya izole türlerin doğrudan rolünü tanımlamak için değerli bir yaklaşımdır. Tekrarlayan Clostridium difficile enfeksiyonu olan hastalar için güvenli bir tedavi seçeneğidir. Preklinik çalışmalar, bağırsak mikrobiyotasını manipüle etmenin, dysbiosis ve hastalık arasındaki mekanik bağlantıyı incelemek için yararlı bir araç olduğunu göstermektedir. Fekal mikrobiyota transplantasyonu, kardiyometabolik hastalıkların yönetimi ve tedavisi için yeni bağırsak mikrobiyota hedefli terapötiklerin aydınlatılmasına yardımcı olabilir. Kemirgenlerde yüksek başarı oranına rağmen, transplantasyonla ilişkili translasyonel değişiklikler devam etmektedir. Buradaki amaç, bağırsak mikrobiyomunun deneysel kardiyovasküler hastalıklardaki etkilerini incelemede rehberlik etmektir. Bu çalışmada, murin çalışmalarında fekal mikrobiyotanın toplanması, işlenmesi, işlenmesi ve transplantasyonu için ayrıntılı bir protokol tanımlanmıştır. Toplama ve işleme adımları hem insan hem de kemirgen donörleri için açıklanmıştır. Son olarak, kardiyovasküler hastalıklarda ve ilgili bağırsak mikrobiyota mekanizmalarında bağırsaklara özgü morfoloji ve bütünlük değişikliklerini değerlendirmek için İsviçre yuvarlanma ve immün boyama tekniklerinin bir kombinasyonunu kullanmayı tanımladık.

Giriş

Kalp hastalığı ve inme de dahil olmak üzere kardiyometabolik bozukluklar, önde gelen küresel ölüm nedenleridir1. Fiziksel hareketsizlik, yetersiz beslenme, ilerleyen yaş ve genetik bu hastalıkların patofizyolojisini modüle etmektedir. Biriken kanıtlar, bağırsak mikrobiyotasının tip 2 diyabet2, obezite3 ve hipertansiyon4 dahil olmak üzere kardiyovasküler ve metabolik bozuklukları etkilediği kavramını desteklemektedir ve bu da bu hastalıklar için yeni terapötik yaklaşımların geliştirilmesinde bir anahtar tutabilir.

Mikrobiyotanın hastalıklara neden....

Protokol

Vanderbilt Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi, bu makalede açıklanan tüm prosedürleri onayladı. Jackson Laboratuvarı'ndan satın alınan 3 aylıkken C57B1/6 erkek fareler, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak barındırıldı ve bakımı yapıldı.

1. İnsan dışkı örneklerinin toplanması, depolanması ve işlenmesi

  1. Denek klinikteyse steril bir kap kullanarak bir dışkı örneği toplayın. Dışkı numunelerini, işleme hazır olana kadar toplandıktan sonraki 36 saat içinde 4 °C'de soğutun. Alternatif olarak, özellikle evde kullanım için, ortam sıcaklığında kolay ve genişletilmiş D....

Sonuçlar

Yukarıda açıklanan adımlar Şekil 1'de özetlenmiştir. Fare çekal içeriği veya insan dışkısı, mikropsuz farelere (100 μL) gavage ile verilecek bir bulamaç hazırlamak için steril salin içinde yeniden askıya alınır, önce art arda 3 gün, sonra her 3 günde bir. Protokolün sonunda, kan basıncı kuyruk-manşet yöntemiyle ölçülür, fareler ötenazi yapılır ve bağırsak mikrobiyotasındaki değişikliklerin ve kardiyovasküler ve metabolik değişikliklerin değerlend.......

Tartışmalar

Bağırsak mikrobiyotasının kardiyovasküler ve metabolik hastalıklardaki nedensel rolünü incelemek için değerli bir yaklaşım, toplam mikrobiyotayı veya ilgilenilen türleri mikropsuz farelere aktarmaktır. Burada, hipertansif bozukluklarda bağırsak mikrobiyotasının rolünü incelemek için insanlardan dışkı örnekleri toplamak için protokolleri ve geleneksel olarak barındırılan fareleri mikropsuz farelere dönüştürüyoruz.

Farelerde, aerobik bir odada işlenmiş asepti.......

Açıklamalar

Yazarlar tarafından finansal veya başka türlü hiçbir çıkar çatışması beyan edilmez.

Teşekkürler

Bu çalışma, Ulusal Translasyonel Bilimleri Geliştirme Merkezi'nden Vanderbilt Klinik ve Translasyonel Bilim Ödülü Hibesi UL1TR002243 (AK'ye) tarafından desteklenmiştir; Amerikan Kalp Derneği Hibe POST903428 (J.A.I.'ye); ve Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü Hibeleri K01HL13049, R03HL155041, R01HL144941 (AK'ye) ve NIH hibe 1P01HL116263 (V.K.'ye). Şekil 1 , Biorender kullanılarak oluşturulmuştur.

....

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Alexa Fluor 488 Tyamide SuperBoostThermoFisherB40932
Anaerobic chamberCOY7150220
Apolipoprotein AINovus BiologicalsNBP2-52979
Artery Scissors - Ball TipFine Science Tools14086-09
Bleach solutionFisher Scientific14-412-53
Bovine Serum AlbuminFisher ScientificB14
CD3 antibodyThermoFisher 14-0032-82
CD68 monoclonal antibodyThermoFisher14-0681-82
CentrifugeFisher Scientific75-004-221
CODA high throughput monitorKent Scientic CorporationCODA-HT8
Cryogenic vialsFisher Scientific10-500-26
Disposable graduate transfer pipettesFisher Scientific137119AM
Disposable syringesFisher Scientific14-823-2A
EthanolFisher ScientificAA33361M1
Feeding NeedleFine Science Tools18061-38
Filter (30 µm)Fisher ScientificNC0922459
Filter paper sheetFisher Scientific09-802
Formalin (10%)Fisher Scientific23-730-581
High salt dietTekladTD.03142
OMNIgene.GUTDNAgenotekOM-200+ACP102
Osmotic mini-pumpsAlzet MODEL 2002
PAP PenMillipore SigmaZ377821-1EA
Petri dishFisher ScientificAS4050
Pipette tipsFisher Scientific21-236-18C
PipettesFisher Scientific14-388-100
Serile Phosphate-buffered salineFisher ScientificAAJ61196AP
Smart spatulaFisher ScientificNC0133733
Stool collection deviceFisher Scientific50-203-7255
TBS BufferFisher ScientificR017R.0000
Triton X-100Millipore Sigma
9036-19-5
Varimix platform rockerFisher Scientific09047113Q
Vortex mixerFisher Scientific02-215-41
XyleneFisher Scientific1330-20-7, 100-41-4

Referanslar

  1. Virani, S. S., et al. Heart disease and stroke statistics-2021 update: a report From the American Heart Association. Circulation. 143 (8), 254 (2021).
  2. Wu, H., et al. The ....

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

mm noloji ve EnfeksiyonSay 195fekal mikrobiyota transplantasyonusvi re rulokardiyovask ler

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Araştırma

Eğitim

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır