Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Mevcut protokol, farelerde uyku yoksunluğunu indüklemek için kullanılan uygun maliyetli bir rocker platform tabanlı cihaz kurmak için bir yöntemi özetlemektedir. Bu cihazın, elektroensefalogram (EEG) ile kanıtlanmış uyku düzenlerinde bozulmalara neden olmanın yanı sıra uyku yoksunluğu ile ilişkili metabolik ve moleküler değişiklikleri indüklemede etkili olduğu kanıtlanmıştır.
Sirkadiyen ritim bozulması, dış çevre veya davranış ile sağlığı önemli ölçüde bozan endojen moleküler saat arasındaki senkronizasyonun bozulmasını ifade eder. Uyku yoksunluğu, sirkadiyen ritim bozulmasının en yaygın nedenlerinden biridir. Sağlık üzerindeki etkilerini araştırmak için farelerde uyku yoksunluğuna neden olmak için çeşitli yöntemler (örneğin, su üzerindeki platformlar, nazik kullanım, kayar çubuk odaları, dönen tamburlar, yörünge çalkalayıcılar, vb.) bildirilmiştir. Bu çalışma, farelerde uyku yoksunluğu için alternatif bir yöntem sunmaktadır. Ayarlanabilir zaman aralıklarında grup halinde barındırılan farelerde uygun maliyetli ve uykuyu verimli bir şekilde bozan otomatik bir rocker platformu tabanlı cihaz tasarlanmıştır. Bu cihaz, minimum stres tepkisi ile uyku yoksunluğunun karakteristik değişikliklerine neden olur. Sonuç olarak, bu yöntem, uyku yoksunluğunun çoklu hastalıkların patogenezi üzerindeki etkilerini ve altta yatan mekanizmaları incelemekle ilgilenen araştırmacılar için yararlı olabilir. Ayrıca, özellikle birden fazla uyku yoksunluğu cihazının paralel olarak çalışması gerektiğinde uygun maliyetli bir çözüm sunar.
Sirkadiyen ritim bozulması, dış çevre veya davranış ile endojen biyolojik saat arasındaki senkronizasyonun bozulmasını ifade eder. Sirkadiyen ritim bozukluğunun en yaygın nedenlerinden biri uyku yoksunluğudur1. Uyku yoksunluğu sadece insan sağlığını olumsuz etkilemekle kalmaz, aynı zamanda kanser2 ve kardiyovasküler hastalıklar3 dahil olmak üzere birçok hastalığın riskini önemli ölçüde artırır. Bununla birlikte, uyku yoksunluğunun zararlı etkilerinin altında yatan mekanizmalar büyük ölçüde bilinmemektedir ve bu konudaki anlayışımızı geliştirmek için uyku yoksunluğu modelleri oluşturmak esastır.
Farelerde uyku yoksunluğu için su platformlarının4, nazik kullanım5, kayar çubuk odalarının6, dönen tamburların7 ve kafes ajitasyon protokollerinin5,8,9 kullanımı gibi çeşitli yöntemler bildirilmiştir. Kayar çubuk odaları, çubukları kafesin alt kısmı boyunca otomatik olarak süpürür ve fareleri üzerlerinden geçmeye ve uyanık kalmaya zorlar. Kafes ajitasyon protokolleri, kafeslerin laboratuvar orbital çalkalayıcılarına yerleştirilmesini içerir ve bu da verimli uyku bozukluğuna neden olur. Bu yöntemler otomatik ve etkili olsa da, özellikle sirkadiyen gen profillemesi için gerekli olan çok sayıda uykudan mahrum fareyi içeren özel çalışma tasarımları için, birden fazla cihazın paralel olarak çalışması gerektiğinde pahalı olabilirler. Öte yandan, su platformları ve nazik kullanım protokolleri, uyku yoksunluğunu indüklemek için yaygın olarak kullanılan daha ucuz ve daha basit yöntemlerdir. Bununla birlikte, su platformu, önceden belirlenmiş yoksunluk-dinlenme döngülerinin10,11 otomatik kontrolüne izin vermez ve nazik kullanım, araştırmacıların uykuyu bozmak için sürekli uyanık olmasını gerektirir. Ek olarak, dönen tamburlar gibi diğer yöntemler, sosyal izolasyon veya stres12 ile karıştırılabilir.
Orbital çalkalayıcı tabanlı yöntemden esinlenerek, farelerde uyku yoksunluğu için rocker platform tabanlı bir cihaz oluşturmak için bir protokol sunmayı amaçlıyoruz. Bu yöntem ucuz, etkili, minimum stresli, kontrol edilebilir ve otomatiktir. Mevcut protokol, erişilebilirliğimize bağlı olarak, yörünge çalkalayıcılardan yaklaşık on kat daha ucuz bir maliyetle rocker platform tabanlı bir cihaz oluşturmamıza izin veriyor. Bu cihaz, grup halinde barındırılan farelerde uykuyu etkili bir şekilde bozdu ve minimum stres tepkisi ile uyku yoksunluğunun karakteristik değişikliklerine neden oldu. Uyku yoksunluğunun çoklu hastalıkların patogenezi üzerindeki etkilerini ve altta yatan mekanizmalarını araştırmakla ilgilenen araştırmacılar için, özellikle de çalışma paralel olarak çok gruplu uyku yoksunluğunu içerdiğinde, özellikle yararlı olacaktır.
Bu çalışmadaki tüm hayvan deney protokolleri, Şanghay Jiao Tong Üniversitesi Tıp Fakültesi Renji Hastanesi Laboratuvar Hayvanları Refahı Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Çalışmada 8 ila 10 haftalık erkek C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz. Cihazı kurmak için gerekli ana parçalar Şekil 1A'da listelenmiştir.
1. Uyku yoksunluğu cihazının hazırlanması
2. Uyku yoksunluğunun indüksiyonu
3. Oral glukoz tolerans testi
4. Beyin dokularının toplanması
5. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile gen ekspresyonunun saptanması
Farelerde uyku yoksunluğu için kurulan cihaz Şekil 1D'de gösterilmektedir. Uyku yoksunluğunun başlamasından sonraki 7. günde, elektroensefalogram (EEG) ve elektromiyografi (EMG) izleme16, cihazın farelerde uyku süresini önemli ölçüde azalttığını ve uyanıklık süresini artırdığını göstermiştir (Şekil 2A-D). Bu arada, mevcut protokol, başarılı uyku yoksunluğunun belirteçleri...
Uyku yoksunluğunun fare modelleri, uyku bozukluğunun kardiyovasküler hastalık21, psikiyatrik durumlar22 ve nörolojik bozukluklar23 dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar üzerindeki etkilerini incelemek için gereklidir. Farelerde mevcut uyku yoksunluğu stratejileri arasında, tekrarlayan kısa süreli uyku kesintisini içeren fiziksel yaklaşımlar en sık kullanılanlardır 5,7,12<...
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82230014, 81930007, 82270342), Şanghay Üstün Akademik Liderler Programı (18XD1402400), Şanghay Belediyesi Bilim ve Teknoloji Komisyonu (22QA1405400, 201409005200, 20YF1426100), Şanghay Pujiang Yetenek Programı (2020PJD030), SHWSRS(2023-62), Şanghay Yaşlanma ve Tıp Klinik Araştırma Merkezi (19MC1910500) ve Bengbu Tıp Fakültesi Lisansüstü İnovasyon Programı (Byycxz21075).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.5 mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C-S | |
50 mL centrifuge tube | NEST | 602002 | |
Adenosine ELISA kit | Ruifan technology | RF8885 | |
Animal cage | ZeYa tech | MJ2 | |
Blood glucose meter | YuYue | 580 | |
C57BL/6J Mice | JieSiJie Laboratory Animal | N/A | Age: 8-10 weeks |
Connecting rod | ShengXiang Tech | N/A | Length: 20 cm |
Cooling fan | LiMing | EFB0805VH | Supply voltage: 5 V; Power consumption: 1.2 W; Air flow: 26.92 cfm; Dimensions: 40 mm * 40 mm * 56 mm |
Corticosterone ELISA kit | Elabscience | E-OSEL-M0001 | |
EEG/EMG recording and analysis system | Pinnacle Technology | 8200-K1-iSE3 | |
Isoflurane | RWD | 20071302 | |
mosquito hemostats | FST | 13011-12 | Surgical instrument |
Motor and motor mount | MingYang | MY36GP-555 | Supply voltage: 24 V dc; Shaft diameter: 8 mm; Maximum output torque: 100 Kgf.cm; Maximum output speed: 10 rpm |
NanoDrop 2000c | Thermo Scientific | NanoDrop 2000c | |
Power brick adapter | MingYang | QiYe-0243 | Input voltage: 110-220V ac; Output voltage: 24 V dc; Outputcurrent: 2 A; Cable length: 2 m |
qPCR commercial kit | Vazyme | Q711-02 | |
qPCR measurement equipment | Roche | 480 | |
Rectangle platform attached with a screw-compatible steel cylinder | Customized | N/A | Width: 20 cm; length: 25 cm; length of the cylinder: 30 cm, thickness: 2 mm |
Reverse RNA to cDNA commercial kit | Vazyme | R323-01 | |
Screw and nut | Guwanji | N/A | Inner diameter: 6 mm, 12 mm |
Screw-compatible steel cylinder | Customized | N/A | Length: 300 mm |
Slotted steel channels | Customized | N/A | Length: 400 mm or 500 mm, thickness: 2 mm |
Time contactor | LiXiang | DH48S-S | Supply voltage: 110-220 V ac; Units measured: hours, minutes, seconds; Contact configuration: DPDT |
TRIzol | Vazyme | R401-01 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır