Ksenopusta etkili hızlı kan perfüzyonu

Özet

Burada, transkriptomik ve proteomik çalışmalar için Afrika pençeli kurbağalarından doku örnekleri hazırlamak için etkili bir hızlı kan perfüzyon protokolü sunulmaktadır.

Özet

Xenopus , 100 yılı aşkın bir süredir omurgalı gelişimini ve hastalığını anlamak için güçlü model organizmalar olmuştur. Burada, Xenopus'ta, tüm dokularda kanın tutarlı ve sert bir şekilde azaltılmasını amaçlayan hızlı bir kan perfüzyon protokolü tanımlanmıştır. Perfüzyon, bir iğnenin doğrudan kalbin ventrikülüne sokulması ve heparinize fosfat tamponlu salinin (PBS) vasküler sistem yoluyla pompalanmasıyla gerçekleştirilir. İşlem hayvan başına yaklaşık 10 dakika içinde tamamlanabilir. Kan, birkaç bol miktarda protein ve hücre tipi tarafından yönetilir ve bu proteinler diğer moleküllerin ve hücre tiplerinin çoğunu maskelediği için sayısız sorun yaratır. Yetişkin Xenopus dokularının kantitatif proteomik ve tek hücreli transkriptomik ile tekrarlanabilir karakterizasyonu, organ örneklemesinden önce bu protokolün uygulanmasından fayda sağlayacaktır. Doku örneklemesi protokolleri eşlik eden makalelerde tanımlanmıştır. Bu prosedürler, Xenopus'ta farklı cinsiyet, yaş ve sağlık durumuna, özellikle X. laevis ve X . tropicalis'e sahip uygulamaların standartlaştırılmasını amaçlamaktadır.

Giriş

Amfibilerin tüm vücut perfüzyonu, 1,2,3,4,5,6'nın korunması ve^{sabitlenmesi amacıyla} rutin olarak tamamlanır. Bununla birlikte, bu prosedürler hayvan başına alınabilecek taze numune sayısını sınırlayan bir oranda gerçekleşir. Bu çalışmanın amacı, tekniğin hızına öncelik vererek Xenopus'ta etkili bir kan perfüzyon protokolü geliştirmektir. Protokol, X. tropicalis için hayvan başına 10 dakikadan az ve X. laevis hayvanı başına 15 dakikadan az sürer. ....

Protokol

Tüm deneyler Harvard Tıp Fakültesi IACUC (Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi) (IS 00001365_3) kural ve düzenlemelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

NOT: Tarif edilen birincil ötenazi yöntemi, Amerikan Veteriner Hekimleri Birliği¹² tarafından ötenazi için kabul edilebilir bir teknik olarak kabul edilmesine rağmen, kalp atışının durmasına yol açtığı bulunmamıştır¹³. Sık kullanılan ikincil çift korsanlık yöntemi bile bunu engellemez ve kalbi hayvandan çıkarmaz. Anestezi uygulanan hayvanların exsanguinasyonu, başarılı ötenazi¹² için insancıl ve etkili bir yö....

Tartışmalar

Bu protokol, koelomik kaviteye erişmek için geleneksel diseksiyon tekniklerini tanımlar. Diğer teknikler de, dokulara minimum zarar vermeleri, kalbe erişilebilir olmaları ve akciğer ve midenin görünür olması koşuluyla kabul edilebilir. Benzer şekilde, listelenen çoğu diseksiyon aleti kolayca karşılaştırılabilir öğelerle değiştirilebilir.

Bu prosedürün etkinliğini optimize etmek için girişimlerde bulunulmuş olsa da, sonuçlar kişinin deneyimine ve bireysel kurbağ.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
5x Magnifying glass with LED light and stand	amazon.com	B08QJ6J8P1	light must not produce heat
Disposable transfer pipets	VWR	414004-036
Dissecting fine-pointed forceps	Fisher Scinetific	08-875
Dissecting scissors sharp piont, straight 6.5"	VWR	76457-374
Dissection tray	Fisher Scinetific	14-370-284	styrofoam sheets are an acceptable alternative
Euthanasia container	US Plastic	Item 2860	alternative opaque containers acceptable
Euthanasia container lid	US Plastic	Item 3047
Fine dissection pins	Living Systems Instrumentation	PIN-#3
General use hypodermic needles, 22 G	Fisher Scientific	14-826-5A	for X. laevis
General use hypodermic needles, 25 G	Fisher Scientific	14-826AA	for X. tropicalis
Heparin, porcine intestinal mucosa	MilliporeSigma	37-505-410MG
Iridectomy scissors 6"	vwr	470018-938	iris scissors are an acceptable alternative
Luer-to-barb adapter male Luer with lock ring	amazon.com	B09PTX6M2Z	size will be dependant on the hosing of the pump used
Mayo-Hegar needle holder	Fisher Scinetific	08-966	mosquito forceps are an acceptable alternative
MS-222: Syncaine (formerly tricaine)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Peristaltic liquid pump dosing pump 5–100 mL/min	amazon.com	B07PWY4SM6	any peristaltic pump capable of pumping 5-10mL/min is acceptable
Sharpening stone	VWR	470150-112	optional; for dulling needles
Sodium bicarbonate, powder, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Specimen forceps, serrated	VWR	82027-442
T-Pins for dissecting	Fisher Scinetific	S99385
Ultra-fine short insulin syringes, 31 G	VWR	BD328438
Wire flush cutters, 6-inch ultra sharp & powerful side cutter clippers	amazon.com	B087P191LP