Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada, aynı biyolojik kökeni ve doğal hücre dışı veziküllerin (EV'ler) benzer yapısını, morfolojisini ve protein bileşimini paylaşan yeni bir tür eksozom taklitleri (EM'ler) olarak endozomdan türetilmiş nanoveziküllerin büyük ölçekli üretimi için manyetik ayırma destekli yüksek hızlı bir homojenizasyon yöntemini açıklıyoruz.

Özet

Hücre dışı veziküller (EV'ler) fizyolojik ve patolojik araştırmalarda, hastalık teşhisinde ve tedavisinde büyük ilgi görmüştür; Bununla birlikte, klinik çevirileri, ölçek büyütme üretim yaklaşımlarının eksikliği nedeniyle sınırlı kalmıştır. Bu nedenle, bu protokol, geleneksel ultrasantrifüjleme yönteminden yaklaşık 100 kat daha yüksek verime sahip olan endozomlardan türetilen yeni bir eksozom taklitleri (EM'ler) türü olarak endozom türevli nanoveziküllerin büyük ölçekli üretimi için manyetik ayırma destekli yüksek hızlı bir homojenizasyon yöntemi sağlar. Bu yöntemde, manyetik nanopartiküller (MNP'ler) ebeveyn hücreleri tarafından endositoz yoluyla içselleştirildi ve daha sonra endozomlarında biriktirildi. Daha sonra MNP yüklü endozomlar toplanarak hipotonik tedavi ve manyetik ayırma ile saflaştırıldı. MNP yüklü endozomları monodispers nanoveziküllere ayırmak için yüksek hızlı bir homojenizatör kullanıldı. Elde edilen endozom türevli veziküller, nanopartikül izleme analizi, transmisyon elektron mikroskobu ve western blotlama ile karakterize edilen aynı biyolojik kökene ve yapıya sahiptir. Morfolojileri ve protein bileşimleri doğal EV'lere benzer, bu da EM'lerin potansiyel olarak klinik çeviriler için yerel EV'lerin düşük maliyetli ve yüksek verimli bir vekili olarak hizmet edebileceğini gösterir.

Giriş

Hücre dışı veziküller (EV'ler), hemen hemen tüm hücreler tarafından salgılanan, 30-150 nm boyut aralığında, bol miktarda biyoaktif madde içeren küçük veziküllerdir. Orijin hücreye bağlı olarak, EV'ler yüksek heterojenlik gösterir ve ana hücrelere özgü birden fazla bileşene sahiptir1. EV'ler vücut sıvılarına salınır ve doku onarımı, tümör teşhisi ve tedavisi ve bağışıklık modülasyonu için çok çeşitli biyoaktif moleküller ve ilaçlar sağlamak için kullanılabileneylem 2 için hedef hücreler tarafından alındıkları uzak bölgelere taşınır 3,4. Bununla birlikte, vücut sıvılarında benzer biyofiziksel özelliklere sahip diğer biyolojik nanopartiküller (örneğin, lipoproteinler) ve nanoveziküller (örneğin, endozomal olmayan yollardan türetilen EV'ler) kaçınılmaz olarak EV izolasyonunu ve saflaştırılmasını etkiler. Bugüne kadar, ultrasantrifüjleme, EV izolasyonu için altın standart olmaya devam etmektedir ve sükroz yoğunluk gradyan santrifüjü, ultrafiltrasyon, polietilen glikol çökeltme, kromatografi ve immünomanyetik boncuk izolasyonu dahil olmak üzere diğer izolasyon yöntemleri geliştirilmiştir5. EV terapötiklerinin klinik çevirisini ve ticarileştirilmesini sınırlayan mevcut darboğaz, EV'lerinyüksek düzeyde ölçeklenebilir ve tekrarlanabilir izolasyonuna izin veren izolasyon tekniklerinin ciddi eksikliğidir 6,7,8. Geleneksel EV izolasyon teknikleri (örneğin, ultrasantrifüjleme ve boyut dışlama kromatografisi) düşük verimden (1 x 107-1 x 108/1 x 10 6 hücre), uzun üretim döngüsünden (24-48 saat), ürün kalitesinin zayıf tekrarlanabilirliğinden muzdariptir ve EV'ler için mevcut klinik talebi karşılayamayan pahalı ve enerji yoğun üretim ekipmanı gerektirir6.

Yerel EV'lerin sentetik vekilleri olan eksozom taklitleri (EM'ler), üretimdeki oldukça benzer yapıları, işlevleri ve ölçeklenebilirlikleri nedeniyle büyük ilgi görmüştür. EM'lerin ana kaynağı, doğal EV'ler11,12 olarak güçlü biyolojik işlevler gösteren, sürekli kesitleme 9,10 ile tüm ebeveyn hücrelerinin doğrudan ekstrüzyonudur. Örneğin, insan göbek kordonu mezenkimal kök hücrelerinden (hUCMSC'ler) türetilen EM'ler, doğal EV'lerle benzer yara iyileştirici etkiler gösterir ve protein bileşimi bakımından daha zengindir13. Tüm hücrelerden türetilen EM'ler, EV'lerin biyolojik karmaşıklığına sahip olsa da, ana dezavantajları, ürünlerin heterojenliğidir, çünkü kaçınılmaz olarak çeşitli hücresel organeller ve hücre kalıntıları tarafından kontamine olurlar. Protein lokalizasyon analizi ayrıca, tam hücre ekstrüzyonundan türetilen EM'lerin, mitokondri ve endoplazmik retikulumdan EV'lere özgü olmayan birçok protein içerdiğini ortaya koydu13. Ayrıca, EM'leri üretmek için kullanılan yöntemlerin çoğu, oldukça zaman ve enerji tüketen bir süreç olan ultrasantrifüjleme gerektirir14. Eksozomların yalnızca hücresel endozomlardan türetildiği gerçeğini göz önünde bulundurarak, biyomühendislik ürünü endozomdan türetilen nanoveziküllerin, tüm hücre ekstrüzyon yöntemi14 tarafından üretilen iyi kurulmuş hücre zarından türetilmiş EM'lere kıyasla eksozomlar ve EM'ler arasındaki biyolojik homolojiyi daha iyi özetleyebileceğini varsaydık. Bununla birlikte, endozom türevi nanoveziküllerin üretimi, uygulanabilir yaklaşımların olmaması nedeniyle zordur.

Klinik çalışmalar, çeşitli hastalıkların tedavisi için hücresiz tedavinin bir vekili ve nano ölçekli bir ilaç dağıtım sistemi olarak EV'ler kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Örneğin, kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinden elde edilen EV'ler, COVID-19'un neden olduğu şiddetli pnömoniyi tedavi etmek için kullanılmış ve umut verici sonuçlar elde etmiştir. Son zamanlarda, CD24 proteinleri taşıyan genetiği değiştirilmiş EV'ler de COVID-19 hastalarının tedavisi için güçlü terapötik faydalar göstermiştir15,16. Bununla birlikte, EV tedavisinin klinik gereksinimi, düşük verim ve maliyet nedeniyle geleneksel izolasyon yöntemleriyle hala karşılanamamaktadır. Bu çalışma, manyetik ayırma destekli yüksek hızlı homojenizasyon yaklaşımı yoluyla endozom türevli nanoveziküllerin büyük ölçekli üretimini bildirmektedir. MNP yüklü endozomları manyetik ayırma yoluyla izole etmek için MNP'lerin endositoz yolundan yararlanır, ardından endozomları monodispers nanoveziküller halinde formüle etmek için yüksek hızlı homojenizasyon yapar. Bu protokol tarafından toplanan endozom türleri çok çeşitli olduğundan, endüstride iyi üretim uygulamaları (GMP) oluşturmak için daha derinlemesine araştırmalara ihtiyaç vardır. Bu yeni EM hazırlama yaklaşımı, doğal EV'lere homolog nanoveziküller elde etmek için daha fazla zaman verimlidir (5 dakikalık yüksek hızlı homojenizasyon). Genellikle çeşitli hücre tiplerine uygulanabilen ultrasantrifüjlemeye göre aynı miktarda hücreden katlanarak daha fazla vezikül üretir.

Protokol

NOT: Yöntemin şeması Şekil 1'de gösterilmiştir.

1. EM hazırlığı ve izolasyonu

  1. MNP'lerin hücre içselleştirmesi
    1. Hücre kültürü
      1. 1 × 106 sıçan kemik iliği mezenkimal kök hücreleri (BMSC), 293T hücreleri veya Fare yumurtalık epitel kanseri hücrelerini (ID8) DMEM tam ortamında% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 5 penisilin-streptomisin çözeltisi (P / S) altı oyuklu plaka başına 2 mL'de askıya alın (bkz.
      2. Hücreleri gece boyunca 37 °C ve% 5 CO2'de kültürleyin.
        NOT: Yapışmadan sonraki hücre sayısı yaklaşık 1 × 106 idi.
    2. MNP'lerin endositozu
      1. Her altı oyuklu plakanın orta hacmini 1 mL'ye düşürün. Hücreleri, 100 μg/1 × 106 hücre konsantrasyonunda 10 nm polilisin ile modifiye edilmiş demir oksit nanopartikülleri (IONP'ler) (Malzeme Tablosuna bakınız) ile birlikte kültürleyin ve hücrelerin IONP'leri tamamen endositoz etmesine izin vermek için 12 saat boyunca% 5 CO2 içeren bir atmosferde 37 ° C'de inkübe edin.
  2. Endozomların izolasyonu ve homojenizasyonu
    1. Hücre hipotonik tedavisi
      1. IONP'leri tamamen içselleştirmiş hücreleri 3 dakika boyunca 0.5 mL/kuyucuklu tripsin ile sindirin ve 1 mL/kuyucuk tam ortam ekleyerek sindirimi sonlandırın.
      2. 5 dakika boyunca 1000 x g'da santrifüjleyin ve süpernatanı atın. Hücreleri fosfat tamponu salin (PBS) ve santrifüj içinde, artık ortamı ve emilmemiş IONP'leri yıkamak için tekrar tekrar iki kez yeniden süspanse edin.
      3. Son olarak, peleti önceden hazırlanmış hipotonik çözelti (71.4 mM potasyum klorür, 1.3 mM sodyum sitrat, pH 7.2-7.4) içinde 8 mL'de 15 dakika boyunca yeniden süspanse edin (bkz.
    2. Düşük hızlı homojenizasyon ile organellerin serbest bırakılması
      1. Hipotonik çözelti içindeki hücre süspansiyonunu bir cam test tüpüne aktarın ve bir cam homojenizatör kullanarak organelleri serbest bırakın (Malzeme Tablosuna bakınız) 1000 rpm'de 20 şok.
    3. Endozomları elde etmek için manyetik ayırma
      1. Homojenize hücre çözeltisinin 1 mL'sini 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve IONP yüklü endozomları diğer organellerden (çekirdek ve mitokondri gibi) ve hücre kalıntılarından tamamen ayırmak için 1 saat manyetik bir ayırıcıya yerleştirin.
      2. Manyetik çerçevenin yanındaki mikrosantrifüj tüplerinin temas yüzeyindeki kahverengi peletleri toplayın (Malzeme Tablosuna bakınız), yani IONP yüklü endozomlar. Mikrosantrifüj tüplerindeki sıvıyı atın ve endozomları yeniden süspanse etmek için 3 mL PBS ekleyin.
  3. Yüksek hızlı homojenizasyon
    1. Endozomları içeren çözeltiyi, sıvı hacmi 3-10 mL arasında olan 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın.
    2. Yüksek hızlı homojenizatörün 10 mm'lik probunu ( bkz. Malzeme Tablosu) tabana dokunmadan santrifüj tüpünün dibine uzatın. Ekranın altındaki Hız düğmesini ayarlayın, hızı 140 x g'ye ayarlayın ve Zaman düğmesini 5 dakikalık süreyi ayarlayacak şekilde ayarlayın, ardından OK düğmesine basın.
    3. Numunenin altına bir buz kutusu yerleştirdikten sonra homojenizasyonu gerçekleştirmek için Başlat düğmesine basın.
  4. EM'ler için manyetik sıralama
    1. Yüksek hızlı homojenizasyondan elde edilen nanovezikül içeren çözeltiyi 1.5 mL mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve 1 saat boyunca manyetik bir ayırıcıya koyun.
    2. Gerekli EM'leri içeren sıvıyı toplayın. Serbest IONP'leri ve IONP yüklü EM'leri adsorbe eden manyetik çerçevenin yanındaki tüplerin yüzeyine dokunmamaya dikkat edin.

2. EM karakterizasyonu (Şekil 2 ve Şekil 3)

  1. Dinamik ışık saçılımı (DLS) analizi
    1. 1 mL EM numunesi (20 μg/mL) duvar boyunca küvete enjekte edin ve DLS cihazının cihaz s'sine yerleştirin.amp yuvası (Malzeme Tablosuna bakın).
    2. DLS yazılımını açın, Parçacık Boyutu Testi'ni seçin ve teste başlayın.
    3. Bir BCA protein tahlil kiti kullanarak protein konsantrasyonunu ölçün (Malzeme Tablosuna bakınız).
  2. Nanopartikül izleme analizi (NTA)
    1. EM'leri PBS ile 1 × 107-1 × 108 partikül / mL'lik bir çözeltiye seyreltin ve bunları 500-1000 μL / dak akış hızında 1 mL'lik bir şırınga kullanarak NTA cihazının odasına (Malzeme Tablosuna bakınız) enjekte edin.
    2. 488 lazer kanalını açın ve yazılım arayüzündeki EM sayısının 100-300 arasında ve Brown hareketinde olduğundan emin olun.
    3. Üreticinin protokolüne göre, cihazın hassasiyetinin EM tespiti için uygun olduğundan emin olmak için uygun SOP'yi (EV-488) seçin.
  3. Transmisyon elektron mikroskobu (TEM)
    1. EM'leri (1 mg / mL) 30 dakika boyunca eşit hacimde% 5 glutaraldehit ile sabitleyin ve EM'lerin konsantrasyonunu BCA protein test kiti ile 1 mg / mL olarak ölçün.
    2. Bakır ağın karbon tarafına 10 μL'lik bir EM damlası yerleştirin ve 10 dakika sonra filtre kağıdı ile fazla sıvıyı temizleyin. 10 μL PBS ekleyin ve hemen filtre kağıdı ile kurulayın. Fazla glutaraldehiti çıkarmak için iki kez tekrarlayın.
    3. 5 μL uranil asetat kontrast maddesini damlatın ve 1 dakika boyunca negatif olarak boyayın, ardından fazla kontrast maddeyi çıkarın. Deiyonize su ile üç kez yıkayın ve oda sıcaklığında (RT) kurutun.
    4. 100 kV ivme geriliminde bir TEM ile görüntü kaydedin.
  4. Batı lekeleme
    1. Numunelere 100 μL hücre lizis tamponu ve 5 μL 50x proteaz inhibitör kokteyli ekleyin (bkz. Bir pipet tabancasıyla hafifçe karıştırın ve 30 dakika boyunca buza koyun.
    2. Çözeltiyi 1000 ° C'de 10 dakika boyunca 4 x g'da santrifüjleyin, süpernatantın protein konsantrasyonunu bir BCA protein test kiti ile ölçün ve toplayın.
    3. 100 μL'lik süpernatanı 25 μL 5x protein yükleme tamponu ile karıştırın ve 95 °C'de 10 dakika ısıtın.
    4. Jelleri önceden oluşturulmuş jellerin talimatlarına göre hazırlayın. Oyuk başına 15 μg protein yükleyin ve 80 V'ta jel elektroforezi ile çalıştırın. Numunenin ayırma jeline akmasını bekleyin, 100 V'a geçin ve ardından proteini buz banyosu altında 60 dakika 100 V'ta bir nitroselüloz membrana aktarın.
    5. EV'ye özgü olmayan belirteçleri (Calnexin) ve EV biyobelirteçlerini (Annexin ve CD63) western blotting ile tespit edin (bkz.
      NOT: Antikorlar, üreticinin tavsiyelerine göre seyreltilir.

3. In vitro EM fonksiyon algılama

  1. EM etiketleme
    1. 1 μL PKH26'yı 250 μL seyreltici C (1:250) ile karıştırarak 2x boyama çözeltisi (4 × 10-6 M) yapın (bkz.
    2. 250 μL EM'yi (1 mg/mL) 250 μL 2x boyama solüsyonu ile karıştırın ve pipetleme tabancasıyla hızlıca üfleyin.
    3. Santrifüj tüpünü nazikçe ters çevirirken RT'de 2-5 dakika inkübe edin.
    4. Eşit hacimde serum veya% 1 sığır serum proteini ekleyin ve sindirimi sonlandırmak için 1 dakika inkübe edin.
    5. 30 dakika boyunca 3000 x g'da 1000 KD ultrafiltrasyon tüpleri ile ultrafiltrasyon ile fazla PKH26'yı çıkarın ve PBS ekleyerek üç kez tekrarlayın. Kalan sıvıyı PBS ile 500 μL'ye yeniden süspanse edin ve 0,22 μm'lik bir filtreden süzün.
  2. Hücre alım testi
    1. Hücre aşılaması: %10 FBS × %5 P/S içeren 1 mL DMEM içeren 35 mm'lik konfokal kaplarda 1 ila 106 hücreyi tohumlayın ve gece boyunca 37 °C ve %5CO2'de inkübe edin.
    2. Potansiyel kontaminasyonu gidermek için EM'leri 0,22 μm steril şırınga filtreleriyle filtreleyin.
    3. Hücreleri 8 saat boyunca PKH26 etiketli EM'lerle (109 partikül / mL) tedavi edin.
    4. PBS ile üç kez yıkayın, DAPI (10 ng / mL) ekleyin ve RT'de 10 dakika inkübe edin.
    5. 405 nm ve 561 nm lazer kanallarını kullanarak konfokal lazer taramalı floresan mikroskobunda floresan görüntüleri elde edin (bkz.

Sonuçlar

Manyetik ayırma destekli yüksek hızlı homojenizasyon ile EM hazırlamanın iş akışı Şekil 1'de gösterilmektedir. Hücreler, endositoz yoluyla endozomlarda spesifik olarak biriken 10 nm polilisin ile modifiye edilmiş IONP'leri içselleştirir (Şekil 3A). Hipotonik tampon ile muamele edildikten ve homojenize edildikten sonra, IONP yüklü endozomlar hücrelerden salınır ve daha sonra manyetik ayırma ile toplanır. İzole edilen endozomlar, yüksek h...

Tartışmalar

Hücresiz terapinin ve nano ölçekli bir ilaç dağıtım sisteminin bir vekili olarak, EV'ler henüz klinik beklentilerini karşılamamıştır ve ana engel, ölçeklenebilir ve tekrarlanabilir üretim ve saflaştırma yöntemlerinin olmamasıdır6. Bu nedenle, benzer biyolojik karmaşıklığa sahip EV analogları olarak çeşitli EM türleri geliştirilmiştir14. Bugüne kadar, en yaygın kullanılan EM örneği, hücre plazma zarından türetilmiş nanoveziküllerdir. ...

Açıklamalar

D.W. ve P.G., Çin Bilimler Akademisi Temel Tıp ve Kanser Enstitüsü (IBMC) tarafından yapılan bir patent başvurusunun ortak mucitleridir. Diğer yazar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

Yazarlar, Çin Bilimler Akademisi, Temel Tıp ve Kanser Enstitüsü'ndeki (IBMC) Paylaşılan Enstrümantasyon Çekirdek Tesisi'nde aletlerin kullanıldığını kabul ediyor. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC; 82172598), Çin'in Zhejiang Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (LZ22H310001), Çin'in Zhejiang Eyaleti Sağlık Komisyonu'nun 551 Sağlık Yeteneği Eğitim Projesi, Hangzhou Belediye Bilim ve Teknoloji Bürosu Tarımsal ve Sosyal Kalkınma Araştırma Projesi (2022ZDSJ0474) ve Qiantang Disiplinlerarası Araştırma Bursu tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Annexin antibodyABclonalA11235Western blotting
BCA assay kitBeyotimeP0012Protein concentration assay
CalnexinGeneTexHL1598Western blotting
CD63 antibodyABclonalA19023Western blotting
Cell lysis buffer for Western and IPBeyotimeP0013Western blotting
CentrifugeBeckmanAllegra X-30RCell centrifuge
CO2 incubatorThermoCell culture
Confocal laser scanning fluorescence microscopyNIKONA1 HD25Photo the fluorescence picture
DMEM basic (1x)GIBCOC11995500BTCell culture
Dynamic light scattering (DLS)MalvernZetasizer Nano ZS ZEN3600Diameter analysis
Electric glass homogenizerSCIENTZ(Ningbo, China)DY89-IILow-speed homogenization
Exosome-depleted FBSsystem BioscienceEXO-FBS-50A-1Cell culture
High-speed homogenizerSCIENTZ(Ningbo, China)XHF-DYHigh-speed homogenization
Magnetic grateTuohe Electromechanical Technology (Shanghai, China)NAMagnetic separation
PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit for General Cell Membrane LabelingSigma-AldrichPKH26GL-1KTThe kit contains PKH26 cell linker in ethanol and Diluent C
Polylysine-modified iron oxide nanoparticles (IONPs)Zhongke Leiming Technology (Beijing, China)Mag1100-10Cell culture
Potassium chlorideAladdin7447-40-7Cell hypotonic treatment
Protease inhibitor cocktailBeyotimeP1030Proteinase inhibitor
Sodium citrateAladdin7447-40-7Cell hypotonic treatment
Transmission electron microscopy (TEM)JEOLJEM-2100plusMorphology image
UltracentrifugeBeckmanOptima XPN-100Exosome centrifuge
ZetaView nanoparticle  tracking analyzersParticle MetrixPMX120Nanoparticle tracking analysis

Referanslar

  1. Kalluri, R., LeBleu, V. S. The biology, function, and biomedical applications of exosomes. Science. 367 (6478), eaau6977 (2020).
  2. Hyenne, V., et al. RAL-1 controls multivesicular body biogenesis and exosome secretion. J Cell Biol. 211 (1), 27-37 (2015).
  3. Farooqi, A. A., et al. Exosome biogenesis, bioactivities and functions as new delivery systems of natural compounds. Biotechnol Adv. 36 (1), 328-334 (2018).
  4. Gatti, S., et al. Microvesicles derived from human adult mesenchymal stem cells protect against ischaemia-reperfusion-induced acute and chronic kidney injury. Nephrol Dial Transplant. 26 (5), 1474-1483 (2011).
  5. Zhang, Y., et al. Exosome: A review of its classification, isolation techniques, storage, diagnostic and targeted therapy applications. Int J Nanomedicine. 15, 6917-6934 (2020).
  6. Yang, D., et al. Progress, opportunity, and perspective on exosome isolation - efforts for efficient exosome-based theranostics. Theranostics. 10 (8), 3684-3707 (2020).
  7. Castilletti, C., et al. Coordinate induction of IFN-alpha and -gamma by SARS-CoV also in the absence of virus replication. Virology. 341 (1), 163-169 (2005).
  8. Guo, P., Huang, J., Moses, M. A. Cancer nanomedicines in an evolving oncology landscape. Trends Pharmacol Sci. 41 (10), 730-742 (2020).
  9. Jo, W., et al. Large-scale generation of cell-derived nanovesicles. Nanoscale. 6 (20), 12056-12064 (2014).
  10. Yoon, J., et al. Generation of nanovesicles with sliced cellular membrane fragments for exogenous material delivery. Biomaterials. 59, 12-20 (2015).
  11. Li, M., et al. Exosome mimetics derived from bone marrow mesenchymal stem cells ablate neuroblastoma tumor in vitro and in vivo. Biomater Adv. 142, 213161 (2022).
  12. Wang, J., et al. Exosome mimetics derived from bone marrow mesenchymal stem cells deliver doxorubicin to osteosarcoma in vitro and in vivo. Drug Deliv. 29 (1), 3291-3303 (2022).
  13. Zhang, Z., et al. Comprehensive proteomic analysis of exosome mimetic vesicles and exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells. Stem Cell Res Ther. 13 (1), 312 (2022).
  14. Li, Y. J., et al. Artificial exosomes for translational nanomedicine. J Nanobiotechnology. 19 (1), 242 (2021).
  15. Yang, W., et al. Clinical characteristics of 310 SARS-CoV-2 Omicron variant patients and comparison with Delta and Beta variant patients in China. Virol Sin. 37 (5), 12 (2022).
  16. Shapira, S., et al. A novel platform for attenuating immune hyperactivity using EXO-CD24 in COVID-19 and beyond. EMBO Mol Med. 14 (9), 15997 (2022).
  17. Jang, S. C., et al. Bioinspired exosome-mimetic nanovesicles for targeted delivery of chemotherapeutics to malignant tumors. ACS Nano. 7 (9), 7698-7710 (2013).
  18. Le, T. S., et al. Quick and mild isolation of intact lysosomes using magnetic-plasmonic hybrid nanoparticles. ACS Nano. 16 (1), 885-896 (2022).
  19. Jeong, D., et al. Nanovesicles engineered from ES cells for enhanced cell proliferation. Biomaterials. 35 (34), 9302-9310 (2014).
  20. Kooijmans, S. A., et al. Display of GPI-anchored anti-EGFR nanobodies on extracellular vesicles promotes tumour cell targeting. J Extracell Vesicles. 5, 31053 (2016).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

JoVE de Bu AySay 203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır